如何證明植物生物刺激劑的功效聲明

申繼忠，余武秀

(上海艾農(nóng)國際貿(mào)易有限公司，上海 200122)

已經(jīng)出臺的歐盟肥料法規(guī)提出基于功效聲明(主張)的植物生物刺激劑定義。“植物生物刺激劑”是指促進植物營養(yǎng)的吸收和轉(zhuǎn)化而不提供營養(yǎng)物質(zhì)的產(chǎn)品，目的是改進植物的下列特征中的一項或多項: 養(yǎng)分利用效率，對非生物脅迫的耐受性，作物品質(zhì)性狀或土壤和根際土壤中被限制的營養(yǎng)物質(zhì)的有效性。法規(guī)也明確規(guī)定了植物生物刺激劑“應(yīng)具有產(chǎn)品標簽上功效聲明的效果”[1]。這就使得制造商有責(zé)任向監(jiān)管機構(gòu)和消費者證明產(chǎn)品功效聲明是合理的。因此，對某一特定的植物生物刺激劑證明其農(nóng)藝學(xué)上的功效聲明是使其能夠被投放到市場的重要因素。

目前全世界范圍內(nèi)生物刺激劑的監(jiān)管還都處于起步階段，有很多問題尚待明確。中國目前尚無生物刺激劑的官方定義，更沒有專門的監(jiān)管措施[2]。因此，作為刺激劑產(chǎn)品都是廠家自己的功效聲明，市場上的生物刺激劑產(chǎn)品也相對混亂。生物刺激劑的有效成分可能具有多種生物活性，功效聲明其具有刺激劑作用必須有充分的證據(jù)，這些證據(jù)可以來自田間驗證試驗、現(xiàn)有文獻等多個方面。但是功效聲明具有刺激劑作用必須遵守一定的原則，否則就會產(chǎn)生混亂。這方面的工作，目前只有歐盟和美國在進行中。歐盟生物刺激劑工業(yè)委員會(EBIC)提出了功效聲明產(chǎn)品具有刺激劑作用應(yīng)遵守的一般性原則，目的是為歐洲肥料法規(guī)中生物刺激劑產(chǎn)品制定標準提供參考[2]。美國環(huán)保署發(fā)布了“植物生長調(diào)節(jié)劑包括生物刺激劑產(chǎn)品標簽聲明指導(dǎo)草案(2019)”[3]以及“植物生長調(diào)節(jié)劑包括生物刺激劑產(chǎn)品聲明指導(dǎo)草案(2020)”[4,5]。本文僅就EBIC 提出的“證明生物刺激劑功效聲明的一般原則”作簡要介紹，以供國內(nèi)主管部門和業(yè)界參考。

1 歐盟肥料法規(guī)

新的歐盟肥料法規(guī)于2019 年6 月25 日發(fā)布，2019 年7 月15 日開始生效，2022 年7 月16 日開始全面實施[1]。

新的肥料法規(guī)將生物刺激劑納入肥料管理范疇，與植物保護產(chǎn)品(農(nóng)藥)分開監(jiān)管。新的歐盟肥料法規(guī)涵蓋6 種產(chǎn)品(肥料、石灰質(zhì)材料、土壤改良劑、生長介質(zhì)、抑制劑、植物生物刺激劑)以及它們的組合物(表1)。其中生物刺激劑包括微生物刺激劑和非微生物刺激劑。在此法規(guī)中，沒有微生物肥料的概念，說明此類物質(zhì)都可以歸入微生物類刺激劑。

表1 歐盟肥料法規(guī)包括的肥料產(chǎn)品類別[1]

歐盟肥料法規(guī)還對每類產(chǎn)品所使用的原材料進行了規(guī)范，共分為11 類原材料(表2)。其中第7 類(CMC 7)是微生物類生物刺激劑推薦使用的微生物種類。當然在實際生產(chǎn)中，也可以使用其他類微生物。

表2 歐盟肥料產(chǎn)品原料組分分類(CMCs)[1]

續(xù)表2

2022 年7 月16 日之前，還需要為法規(guī)的實施制定一系列執(zhí)行標準。這項工作由歐洲標準化委員會負責(zé)。

歐洲標準化委員會(CEN)專門制定歐洲標準(ENs)，適用于整個歐洲單一市場。CEN 匯集了34個國家的國家標準機構(gòu)和由數(shù)千個來自商業(yè)聯(lián)盟、商業(yè)和消費者的技術(shù)專家組織、環(huán)境團體和其他社會利益相關(guān)者。它被歐洲委員會授權(quán)開發(fā)標準支持肥料產(chǎn)品法規(guī)的實施，在這種情況下CEN 于2017年創(chuàng)建了CEN/TC 455 植物生物刺激劑技術(shù)委員會，專門負責(zé)開發(fā)生物刺激劑相關(guān)標準(表3)。法國標準化協(xié)會(AFNOR)被指定為CEN/TC 455 第二工作組(WG 2)的負責(zé)機構(gòu)，專門制定生物刺激劑功效聲明的標準(表3)。

表3 CEN/TC 455 生物刺激劑技術(shù)分委會和工作組[6,7]

2 證明植物生物刺激劑功效聲明的一般原則

2.1 生物刺激劑的定義及其對功效聲明的要求

植物生物刺激劑的定義是基于產(chǎn)品功效聲明的(歐洲委員會，2016；歐盟理事會，2018)，意思是用產(chǎn)品功能而不是用產(chǎn)品所含的成分來定義生物刺激劑。因此，證明一種產(chǎn)品確實是真正的生物刺激劑取決于對它的效果的證明。但是，這不能被視為要求保證產(chǎn)品具有特定水平的效果。在任何情況下，將生物刺激劑投放歐盟市場都不應(yīng)被視為保證在所有條件下的有效性，因為許多因素可能會影響生物刺激劑在現(xiàn)場的性能。

制造商應(yīng)該提供足夠可信的數(shù)據(jù)，而不是讓這個過程變成不必要的負擔(dān)。為產(chǎn)品功效聲明提供可靠的科學(xué)支持是歐洲生物刺激劑工業(yè)理事會(EBIC)工作的核心原則之一，而EBIC 也從其他部門的產(chǎn)品功效聲明證明中獲得了靈感。但是，其他類別產(chǎn)品的現(xiàn)有功效聲明論證程序不能以復(fù)制/黏貼的方式自動應(yīng)用于生物刺激劑，原因有：⑴ 現(xiàn)有生物刺激劑產(chǎn)品(包括微生物和非微生物產(chǎn)品)具有多樣性以及隨之而有的廣泛的功效聲明；⑵ 生物刺激劑的功效受多種環(huán)境因素的影響；⑶ 生物刺激劑成分之間的相互作用，以及生物刺激劑本身與其他系統(tǒng)因素(如天氣、土壤微生物群、土壤類型、作物品種等)之間的相互作用都對其功效有影響。

為了促進提供高質(zhì)量數(shù)據(jù)支持生物刺激劑的功效聲明(無論是為了投放市場還是商業(yè)用途)，EBIC與主要利益攸關(guān)方共同制定指導(dǎo)方針，匯編生物刺激劑的可靠數(shù)據(jù)，以便獲得一致和可靠的結(jié)果。

歐洲生物刺激劑工業(yè)理事會已經(jīng)確定有必要制定指導(dǎo)方針，以滿足2 個層面的要求：⑴ 生成支持生物刺激劑功效聲明的數(shù)據(jù)；⑵ 使用數(shù)據(jù)支持將生物刺激劑投放歐盟市場和/或支持商業(yè)產(chǎn)品功效聲明。

那么需要多少數(shù)據(jù)來支持產(chǎn)品功效聲明呢?這取決于功效聲明的作用多少。功效聲明范圍越窄，所需的數(shù)據(jù)就越少。考慮到產(chǎn)品效果、作物或作物分組和生長條件的多樣性，制造商需要靈活設(shè)計適應(yīng)特定農(nóng)藝狀況的試驗研究。此外，應(yīng)該認識到，當涉及到提高營養(yǎng)物質(zhì)有效性的產(chǎn)品(特別是微生物)時，土壤類型和條件可能比作物類型本身更重要。因此，需要靈活的試驗設(shè)計來適應(yīng)這種情況。

產(chǎn)品功效聲明的理由應(yīng)集中在歐盟的生物刺激劑定義上。為了將產(chǎn)品投放歐洲市場，所有功效聲明均應(yīng)證明與歐盟肥料法規(guī)(歐洲委員會，2016 年；歐盟理事會，2018 年)之生物刺激劑定義中的4 種功效聲明之一：提高養(yǎng)分利用效率、對非生物脅迫的耐受性、作物品質(zhì)特征或土壤和根際被限制養(yǎng)分的可獲得性。

由于每一類功效聲明都相當寬泛，表4 給出了各類功效聲明的更精確描述，以使每一類功效具體化并便于執(zhí)行。

表4 生物刺激劑的功效聲明類別及子類

此外，這些影響通常會轉(zhuǎn)化為對農(nóng)民有價值的建議。例如提高產(chǎn)量(這在歐盟肥料法規(guī)中沒有明確提到，但可能是使用任何生物刺激劑產(chǎn)品的結(jié)果)和提高作物質(zhì)量(這是生物刺激劑的作用)。雖然產(chǎn)量收益可以追溯到法規(guī)中所定義的生物刺激劑功效聲明中的一種，但EBIC 已將其列為單獨一類功效聲明，以確保以恰當?shù)男g(shù)語描述并顯示其功效。

2.2 可支持功效聲明的信息類型

各種類型的數(shù)據(jù)和經(jīng)驗證據(jù)可以支持生物刺激劑的功效聲明。可以從已發(fā)表的文獻和現(xiàn)有數(shù)據(jù)開始，然后根據(jù)需要再使用來自控制條件和田間試驗的新實驗數(shù)據(jù)來補充這些信息是有意義的。

在控制條件下(溫室、生長室、表型等)從歐盟以外產(chǎn)生的數(shù)據(jù)應(yīng)該是允許的，如果測試的氣候條件可以適用于歐盟內(nèi)部，而且：⑴ 如果它來自制造商自己的GEP/GLP-認證的設(shè)施；⑵ 如果產(chǎn)生數(shù)據(jù)的獨立研究合作伙伴(合同設(shè)施、大學(xué)等)被認為是有信譽的；⑶ 如果制造商能夠證明所獲得的方法和數(shù)據(jù)的質(zhì)量與GEP/GLP-認證的設(shè)施所能達到的質(zhì)量基本相當。

2.2.1 使用已發(fā)表的文獻和現(xiàn)有數(shù)據(jù)

同行評議的科學(xué)文獻可以支持生物刺激劑功效聲明。微生物的生物學(xué)文獻可以用來描述產(chǎn)品的作用方式，或為支持所提出的功效聲明而進行的任何已發(fā)表的相關(guān)論文中描述的初步研究等都可以采用。質(zhì)量可接受的科學(xué)文獻可用于支持功效聲明。文獻質(zhì)量可以根據(jù)Klimisch 等人(1997)描述的毒理學(xué)和生態(tài)毒理學(xué)試驗數(shù)據(jù)質(zhì)量系統(tǒng)評估方法進行評估，并確定是否可為歐盟化學(xué)立法(REACH)的數(shù)據(jù)要求所接受。需要注意的是，產(chǎn)品內(nèi)部物質(zhì)組合起來可能產(chǎn)生各種協(xié)同效應(yīng)或出現(xiàn)的新效應(yīng)，此時僅靠文獻本身就不太可能充分證明這種功效聲明。

現(xiàn)有的科學(xué)信息和現(xiàn)有的田間試驗數(shù)據(jù)應(yīng)按照歐洲化學(xué)品管理局(ECHA)為實施歐盟化學(xué)品法規(guī)(REACH)而定義的相關(guān)性、可靠性和充分性標準進行評估后方可采用(歐洲化學(xué)品管理局2011)。

2.2.2 試驗數(shù)據(jù)

生物刺激劑的功效聲明可以由受控條件下(實驗室、溫室、生長室、表型等)和/或田間(田間試驗)條件下產(chǎn)生的試驗數(shù)據(jù)支持。來自精心設(shè)計的小型實驗室和生長室研究的額外數(shù)據(jù)往往構(gòu)成所提供的功效聲明理由的重要組成部分。如果使用田間數(shù)據(jù)，至少必須包括一些歐盟境內(nèi)的試驗數(shù)據(jù)。如果來自歐盟以外的田間數(shù)據(jù)都是在與歐盟相似的地理氣候條件下生成的(并且與產(chǎn)品使用的預(yù)期環(huán)境相對應(yīng))，則可以為歐盟所采納。可以參考現(xiàn)有的“確定地理氣候條件可比性的指南文件(歐洲和地中海植物保護組織，2014)”確定來自歐盟以外的數(shù)據(jù)是否合乎要求。

田間試驗可提供生物刺激劑在真實條件下作用效果的必要信息。然而，對于某些功效聲明如耐受鹽脅迫或冷脅迫的能力，都很難人工模擬合適的田間脅迫的實際情況。在這種情況下田間試驗的重點將更多地放在刺激劑對作物產(chǎn)量/質(zhì)量等“整體”效益的影響上。而與刺激劑作用方式有關(guān)的功效聲明的具體內(nèi)容可在受控條件下得到驗證。比如可以證明在受控的溫室或?qū)嶒炇覘l件下使用生物刺激劑產(chǎn)品可增加磷素的可獲得性，并向農(nóng)民證明使用相同的產(chǎn)品可提高產(chǎn)量和/或質(zhì)量這一總體效益。如果制造商只想要證明某生物刺激劑產(chǎn)品能溶解磷，而不想證明其隨后能提高產(chǎn)量和/或質(zhì)量，就不需要進行田間試驗。

在考慮了生物刺激劑的積極和消極影響后，其農(nóng)業(yè)凈效益必須足以證明使用刺激劑產(chǎn)品的合理性。某個產(chǎn)品的使用效益必須與該產(chǎn)品設(shè)定的使用環(huán)境相適應(yīng)。在某些情況下，可以接受低水平的效益，例如：⑴ 當產(chǎn)品將作為作物綜合管理(ICM)計劃的組成部分使用時，或⑵ 在特殊情況下，如有機農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，或在減少養(yǎng)分使用的同時因使用生物刺激劑產(chǎn)品還能保持相同的產(chǎn)量或質(zhì)量水平的情形。

如果試驗數(shù)據(jù)表明產(chǎn)品效果出現(xiàn)顯著的不一致，那么就必須對不一致的原因加以解釋。產(chǎn)品使用說明要讓用戶明確在什么條件下能讓產(chǎn)品表現(xiàn)出最佳效果，以及哪些因素會影響產(chǎn)品的有效性。原因不明的產(chǎn)品性能的變化不應(yīng)阻礙產(chǎn)品投放市場，但在這種情況下產(chǎn)品功效聲明的不確定性應(yīng)該在產(chǎn)品標簽上說明。透明度對于農(nóng)民做出明智的選擇至關(guān)重要。

3 生物刺激劑試驗/測試的總指導(dǎo)

通用指南統(tǒng)計程序的使用應(yīng)適用于田間試驗軟件(如ARM)。

3.1 試驗研究計劃

試驗研究計劃應(yīng)包括以下內(nèi)容：⑴ 試驗?zāi)康模虎?統(tǒng)計分析和試驗設(shè)計；⑶ 試驗條件；⑷ 田間試驗的設(shè)計和布局；⑸ 對照數(shù)據(jù)；⑹ 刺激劑處理的應(yīng)用；⑺ 評估方式。以下分別詳述這些內(nèi)容。

3.1.1 試驗?zāi)康?/p>

⑴ 試驗的目的和試驗場地的基本信息：應(yīng)具體規(guī)定試驗的目標，包括待驗證的生物刺激劑的功效以及在試驗中納入其他變量(使用劑量、使用條件)；⑵ 試驗是否為評估某種功效聲明或其他目的(發(fā)芽試驗、收獲產(chǎn)品的質(zhì)量、對后續(xù)作物的影響等)；⑶ 應(yīng)提供關(guān)于試驗地點的基本信息，包括完整的地址和地理坐標(如果可能)，作物和品種，關(guān)于試驗地的任何有用的細節(jié)(例如光照和坡度)。

3.1.2 統(tǒng)計分析和試驗設(shè)計

將生物刺激劑投放市場絕不應(yīng)被認為是保證它在所有條件下都有效，因為許多因素可能會影響生物刺激劑的田間表現(xiàn)。還有許多其他因素與生物刺激劑產(chǎn)品有關(guān)。這些可能包括：⑴ 提供與作物綜合管理系統(tǒng)和/或有機農(nóng)業(yè)兼容的方法；⑵ 與栽培實踐有更大的兼容性；⑶ 減輕替代生產(chǎn)系統(tǒng)的不良影響(對人類、有益生物、非目標生物、其他作物等)。

在這種情況下，生物刺激劑制造商應(yīng)確保能夠向用戶提供有關(guān)產(chǎn)品性能的準確信息，并就如何最佳使用該產(chǎn)品提供建議，以使其盡可能有效和經(jīng)常地發(fā)揮作用。

考慮到生物刺激劑的作用性質(zhì)以及它們內(nèi)在的可變性(從生理和生物敏感性到土壤氣候條件，當?shù)匚⑸锒鄻有院妥魑镞z傳特性)，在受控的條件下(溫室或?qū)嶒炇?與未經(jīng)處理的對照相比可以將置信水平設(shè)置在90% (在受控條件下的最低農(nóng)藝生產(chǎn)試驗)。

為證明生物刺激劑的功效聲明，至少要在歐盟進行3 次田間試驗。在田間試驗中，與未經(jīng)處理的小區(qū)相比，如果觀察到生物刺激劑表現(xiàn)出經(jīng)常的“農(nóng)學(xué)上”的積極作用趨勢(不一定具有統(tǒng)計學(xué)上的顯著性)，可以認為這足以支撐生物刺激劑的功效聲明。

如果在一個季節(jié)內(nèi)且在不同的地理氣候條件下(與產(chǎn)品銷售和使用地的環(huán)境條件和農(nóng)藝條件相似)進行足夠的試驗證明功效聲明是合理的，那么試驗就不需要經(jīng)過多個季節(jié)的試驗。這些試驗應(yīng)該在歐盟進行。

試驗設(shè)計應(yīng)該以能區(qū)別處理區(qū)和未處理區(qū)的方式進行。建議有足夠的重復(fù)，以確保減少數(shù)據(jù)的可變性和增加觀察到處理區(qū)和未處理區(qū)之間經(jīng)常性差異的機會。

如果生物刺激劑的性能受溫度、土壤類型、作物或其他參數(shù)的影響，那么試驗設(shè)計、執(zhí)行和后續(xù)用戶建議都應(yīng)考慮這些因素。

如果試驗設(shè)計得當，可以在一次試驗中證明多種功效聲明。

在產(chǎn)量和質(zhì)量方面，未經(jīng)處理的小區(qū)試驗結(jié)果應(yīng)反映當?shù)厣a(chǎn)的正常農(nóng)藝預(yù)期。

研究計劃應(yīng)詳細說明評估的內(nèi)容、評估的方式、評估的時間和原因。

建議至少評估農(nóng)民所關(guān)心的某一個可測量指標(如對產(chǎn)量和/或質(zhì)量的影響)。例如，根結(jié)形成是早期的可測量的參數(shù)，但它本身不足以確認對作物產(chǎn)量和/或質(zhì)量的影響。如果在所設(shè)計的試驗中沒有評估擬聲明的某種生物刺激作用，那么這個作用就不能在標簽上作為功效聲明。例如，能增加根生長的功效聲明會在試驗中得到證明，但作物產(chǎn)量增加在試驗中沒有量化。此時，標簽可以聲稱“增加了根系生長”，但不能聲稱“能提高產(chǎn)量”，因為產(chǎn)量的增加沒有得到數(shù)據(jù)證明。

生物刺激劑對植物的藥害應(yīng)在試驗中加以驗證。如果沒有觀察到植物藥害的證據(jù)，那么就沒有必要進行額外的植物藥害試驗。但是，如果有植物藥害的跡象，則需要植物藥害數(shù)據(jù)。至少，當使用生物刺激劑時，制造商應(yīng)該提供關(guān)于如何將植物藥害降到最低的建議。

來自GEP/GLP 認證設(shè)施的數(shù)據(jù)可以被認為是可靠的，即使這些設(shè)施是屬于制造商的(即非第三方機構(gòu))。盡管如此，還是希望制造商能證明至少某些研究是由公正和合格的第三方提供的。盡可能多地由獨立和有能力的合作伙伴進行試驗以支持產(chǎn)品功效聲明，這些合作伙伴可以是⑴ 國家研究機構(gòu)和推廣官員；⑵ 在農(nóng)業(yè)和農(nóng)學(xué)領(lǐng)域發(fā)表研究成果的機構(gòu)(包括但不限于大學(xué)、其他高等院校和私人研究機構(gòu))和研究人員；⑶ 經(jīng)認證的私人研究中心(GLP/GEP或GLP/GEP 等效條件)。

3.1.3 試驗條件

應(yīng)充分說明土地和作物的有關(guān)情況，例如：⑴ 對于一年生作物，播種或種植日期、密度、行距；⑵ 對于多年生作物，行的排列和間距或單株種植、修剪或整枝方式、砧木、冠層高度、株寬、年齡、生產(chǎn)過程中的天氣；⑶ 對于溫室作物，可以在栽培箱內(nèi)、試驗臺上、水培養(yǎng)液中栽培等；⑷ 需要描述作物的栽培方法，如耕作、肥料和灌溉制度，以及任何其他額外的投入；⑸ 應(yīng)說明作物在進行生物刺激劑處理時是在正常條件下生長還是在有脅迫(如干旱、霜凍、風(fēng)或其他整體化學(xué)處理的影響，和/或其他有害生物如病害和雜草的影響)存在的條件下生長的；⑹ 對于土壤使用的生物刺激劑產(chǎn)品，應(yīng)至少在試驗的第1 個月每隔2 h 記錄表層土壤在根區(qū)層面的溫度；并應(yīng)描述土壤特征，如砂土、黏土、粉砂土和有機質(zhì)百分含量，以及pH 等。

3.1.4 田間試驗設(shè)計和布局

試驗小區(qū)的設(shè)計和布局應(yīng)加以描述，最好附有平面圖，小區(qū)的數(shù)量、大小和形狀，無論是由小區(qū)在地面上的尺寸確定的還是由特定的植物布局確定的都可以。

應(yīng)指明試驗設(shè)計的類型。為未經(jīng)處理的對照所作的安排應(yīng)被準確地標出，以及任何其他對照方式的細節(jié)。

在保證科學(xué)設(shè)計的同時，試驗小區(qū)應(yīng)確保完全隨機區(qū)組排列，以避免試驗小區(qū)之間試驗條件可能帶來的任何干擾(例如在干旱脅迫緩解試驗中，必須將充足供水的試驗帶置于試驗處理的旁邊作為參考)。

在試驗中應(yīng)保證有足夠的重復(fù)，以獲得12 個自由度，這樣就可以證明經(jīng)處理和未經(jīng)處理的作物之間是否存在經(jīng)常的差異。

3.1.5 對照數(shù)據(jù)

對照數(shù)據(jù)集可以是來自完全未經(jīng)處理的小區(qū)，也可以來自所謂的“漏驗”組(omission group)。漏驗組與處理組方案相同，只是不用生物刺激劑。

為證明用于“改進營養(yǎng)攝取”這一功效聲明要求設(shè)置的對照類型應(yīng)包括：⑴ 未經(jīng)任何處理的對照。⑵ 當生物刺激劑產(chǎn)品中含有營養(yǎng)素時，需要設(shè)置如下之一作為對照組，選擇1：如果“支持組”提供營養(yǎng)元素，則單獨使用“支持制劑”；選擇2：不含營養(yǎng)元素的生物刺激劑制劑單獨使用。⑶ 當產(chǎn)品功效聲明包括抵抗非生物脅迫時，對照應(yīng)包括：有脅迫的對照、無脅迫的對照、脅迫水平的表述。

3.1.6 刺激劑處理的應(yīng)用

應(yīng)提供有關(guān)試驗產(chǎn)品的配方、使用方法、濃度和數(shù)量的準確信息。

為證明生物刺激劑功效聲明的正當性，應(yīng)以達到預(yù)期效果所需的最低推薦劑量進行試驗。然而，這對于產(chǎn)品組成主要是環(huán)境中自然存在的物質(zhì)的生物刺激劑產(chǎn)品可能不那么重要，除非添加量顯著超過了現(xiàn)有的自然本底水平。此外，對于某些生物刺激劑(例如微生物生物刺激劑)，最低有效劑量的概念可能更難以在實際中確定，而一個劑量范圍則可能更適合證明相關(guān)的功效聲明。在這種情況下，當需要對建議的劑量作出適當解釋時，可能沒有必要提供田間產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。這種解釋應(yīng)涉及微生物的作用方式和生物學(xué)，還可以包括為推薦制劑濃度和/或使用劑量提供基礎(chǔ)的任何初步研究(包括相關(guān)已發(fā)表的同行評價論文)。

雖然制造商應(yīng)該總在尋求證明推薦劑量的合理性，但缺乏精確或常規(guī)的劑量驗證數(shù)據(jù)不能成為阻止生物刺激劑投放市場的理由。在此情況下，制造商根據(jù)實驗室或田間試驗獲得的有效數(shù)據(jù)提供證明獲得有益影響所需的最低劑量的信息可能就足夠了。

⑴ 測試和參考產(chǎn)品：應(yīng)給出試驗(測試和參考)中包含的產(chǎn)品的信息，包括通用名稱或其他指定標準(如果有)，以及每個制劑產(chǎn)品的確切名稱或其他名稱。

⑵ 使用方式：應(yīng)提供如下信息以確保田間試驗遵循了良好農(nóng)業(yè)規(guī)范：①使用的方法和設(shè)備；②任何與預(yù)期劑量的顯著偏差；③可能影響產(chǎn)品功效聲明的操作條件(例如噴霧壓力、噴嘴類型、噴霧質(zhì)量和噴霧器的移動速度)；④使用次數(shù)；⑤每次使用的日期(包括年份，最好使用日-月-年格式表示使用日期)；⑥每次使用時作物的生長階段(見BBCH 生長階段關(guān)鍵詞)；⑦使用劑量(mL/hm2，g/hm2或L/hm2, kg/hm2)和噴霧量(L/hm2)。

⑶ 氣象數(shù)據(jù)：應(yīng)記錄下列氣象資料：①試驗員在使用刺激劑當天前后觀察得到的氣象資料可能影響試驗結(jié)果。這取決于試驗者的判斷，但不需要提供像使用當天那樣詳細的氣象資料。②必須提供試驗人員在使用生物刺激劑的當天觀察的氣象資料，包括某些標準數(shù)據(jù)(溫度、濕度、風(fēng)速)；如果在葉面使用后24 h 內(nèi)下雨，應(yīng)予記錄(涉及到產(chǎn)品的耐雨水沖刷性)。

⑷ 試驗期間還應(yīng)記錄土壤數(shù)據(jù)。

3.1.7 評估方式

⑴ 評估的類型、時間和頻率。⑵ 每次評估的類型和日期。⑶ 應(yīng)描述使用的方法。使用的任何評估標準(尺度)都應(yīng)加以說明。⑷ 對作物的直接影響。應(yīng)注意每個試驗小區(qū)是否存在植物藥害，并準確描述所有藥害癥狀，例如發(fā)育周期的變化、顏色變化、壞死、變形、對植物的產(chǎn)量和質(zhì)量的影響。⑸ 當需要產(chǎn)量和質(zhì)量數(shù)據(jù)時，應(yīng)仔細記錄每一種作物所需的具體參數(shù)。

3.2 試驗報告

試驗報告應(yīng)包括：⑴ 試驗?zāi)康模虎?供試產(chǎn)品和參考產(chǎn)品清單，包括劑量和使用次數(shù)；⑶ 評估方式；⑷ 試驗結(jié)果，包括統(tǒng)計分析(如有)。

3.3 進行生物刺激劑田間試驗的作物分組

當進行證明生物刺激劑功效聲明的試驗時，可參考表5 中列出的作物分組建議，選擇需要試驗的作物。歐洲生物刺激劑工業(yè)委員會(EBIC)建議的指導(dǎo)方針(表6)，可以幫助制造商確定需要的試驗次數(shù)，試驗次數(shù)需要視實驗性質(zhì)而定，并要防止評審當局對試驗的過多要求。盡管已有這樣的指導(dǎo)方針，但是制造商仍然可能需要根據(jù)特定的刺激劑功效聲明調(diào)整試驗。

表5 為證明生物刺激劑功效聲明的作物分組建議

表6 為證明刺激劑功效聲明所需要的試驗次數(shù)

在適當?shù)那闆r下，可以用適當?shù)目茖W(xué)文獻代替所建議的一個或多個試驗。

4 結(jié) 論

一種產(chǎn)品的生物刺激劑作用需要通過其試驗效果來證明，但這不是為了保證產(chǎn)品具有特定水平的效果。在任何情況下，都不能認為投入市場的生物刺激劑產(chǎn)品必須在所有情況下都有效，因為許多因素可能會影響某種生物刺激劑在田間的表現(xiàn)。對證明產(chǎn)品功效聲明的要求應(yīng)與任務(wù)成比例；制造商應(yīng)該提供足夠可信的數(shù)據(jù)，但又不能使之成為制造商不必要的負擔(dān)。功效聲明范圍越窄，所需的數(shù)據(jù)就越少。考慮到可能的影響、作物或作物分組和生長條件的多樣性，制造商需要靈活設(shè)計適應(yīng)特定農(nóng)藝情況的試驗方案。此外，還應(yīng)認識到，對于目的在于改善營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)的產(chǎn)品(特別是微生物類刺激劑產(chǎn)品)而言，土壤類型和土壤條件在設(shè)計試驗時可能比作物類型本身更重要。隨著刺激劑產(chǎn)品向復(fù)雜、多組分的方向發(fā)展，田間試驗將變得更加重要。要證明刺激劑產(chǎn)品的多重效應(yīng)，特別是協(xié)同效應(yīng)或新出現(xiàn)的效應(yīng)時，則對試驗設(shè)計有更高的要求。

歐洲標準化委員會(CEN)已經(jīng)開始研究過程和方法，這些過程和方法將成為一套統(tǒng)一的歐洲標準的基礎(chǔ)，根據(jù)歐盟肥料產(chǎn)品新法規(guī)來證明生物刺激劑的功效聲明。這項工作包括標準的名稱、生物刺激劑規(guī)格、標簽、測試方法、驗證產(chǎn)品功效聲明和安全要求等。

由EBIC 制定并在本文中概述的一般原則可以為CEN 關(guān)于功效聲明論證的相關(guān)標準的起草提供參考，因為這些原則的提出得益于參與生物刺激劑產(chǎn)品功效聲明測試的專業(yè)人士之間的重要討論。