大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬中總黃酮工藝研究

【摘要】目的：研究大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬總黃酮的工藝，為細(xì)氈毛忍冬化學(xué)成分的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法：以靜態(tài)吸附容量及解析率篩選樹脂類型，在動(dòng)態(tài)吸附條件上，對影響純化的工藝參數(shù)條件進(jìn)行篩選。結(jié)果：確定了大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物的工藝為：D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物，上柱藥液生藥濃度為0.10g/mL，比上柱量2.74g/g（藥材/干樹脂）上柱吸附。結(jié)論：D101樹脂綜合性能較好，適用于細(xì)氈毛忍冬中總黃酮成分的分離純化。

【關(guān)鍵詞】細(xì)氈毛忍冬;大孔樹脂;總黃酮;純化

【中圖分類號】R284.2【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2022）11-0032-04

ResearchonTechniquesofPurifyingtheTotalFlavonoidsinLonicera

SimilesHemslwithMacroporousResin

ZHENGGuangya

CentralHospitalofSichuanProvincialPrisonAdministration，Chengdu610000，China

Abstract：ObjectiveToresearchonapurificationprocessforthetotalflavonoidsfromLonicerasimilesHemslbymacmporousresin，andlaythefoundationforthefurtherresearchofthechemicalcompositionofLonicerasimilesHemsl.MethodsBasedonthedifferentstaticadsorptioncapacityandelutionrateoftotalflavonoids，thetechnologicalconditionsforabsorptionofmacroporousabsorptiveresinwereselected.ResultTheresultindicatesthattheoptimumpurificationprocessareasfollows：D101macroporousresinisusedtopurifytheextractofLonicerasimilesHemsl，Thesamplesolutionconcentrationis0.10gcrudedrug/mLandtherateamountis2.74g/gcrudedrugdryresin.ConclusionWithgoodcomprehensiveproperties，D101resinissuitableforpurifyingtheelementoftotalflavonefromLonicerasimilesHemsl.

Keywords：LoniceraSimilesHemsl;MacroporousResin;TotalFlavonoids;Purification

細(xì)氈毛忍冬LonicerasimilesHemsl（圖1、圖2）為西南地區(qū)金銀花的主流品種[1]，該種資源豐富，使用歷史悠久。大量研究表明，金銀花及其同屬植物的化學(xué)成分以有機(jī)酸、黃酮類、皂苷類成分為主，但細(xì)氈毛忍冬相關(guān)研究鮮見報(bào)道。近年來國內(nèi)外新發(fā)展的分離技術(shù)大孔吸附樹脂在醫(yī)藥領(lǐng)域特別是天然藥物精制中廣泛應(yīng)用，是提取分離中草藥有效成分的一種有效方法[2-3]。本文以細(xì)氈毛忍冬提取物為研究對象，采用大孔樹脂對其黃酮類成分進(jìn)行分離、純化研究，為細(xì)氈毛忍冬化學(xué)成分的進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-5203（上海亞榮生化儀器廠）;紫外-可見分光光度計(jì)UV1100（上海天美科技有限公司）;電子天平TD6001（天津天與儀器廠）;大孔樹脂D101（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

1.2材料蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢驗(yàn)所）;大孔樹脂D101、DM301、DA201、AB-8（均為天津農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司），LD605（為晨光化工研究院）;乙醇、亞硝酸鈉溶液、硝酸鋁溶液、氫氧化鈉等均為分析純。

細(xì)氈毛忍冬藥材采購于四川省南江縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定為忍冬科植物細(xì)氈毛忍冬LonicerasimilisHemsl。

2方法與結(jié)果

2.1總黃酮的含量測定

2.1.1對照品溶液的制備取蘆丁對照品約25mg，置50mL容量瓶中，加75%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻。精密量取20mL，置50mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2供試品溶液的制備稱取細(xì)氈毛忍冬干燥花蕾475g，采用文獻(xiàn)[4-5]方法進(jìn)行提取得浸膏。精密稱取浸膏0.5g，置50mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置25mL容量瓶中，亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色。再加水定容至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法[6]，于510nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程：A=0.0137C+0.0008，r=0.9999，n=6。線性范圍：8.0179～48.1074μg/mL。

2.1.4細(xì)氈毛忍冬提取物中總黃酮的測定取供試品溶液適量，參照2.1.3中方法測定其吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出總黃酮的含量。

2.2篩選不同型號大孔吸附樹脂的研究

2.2.1大孔樹脂的預(yù)處理試驗(yàn)用5種大孔樹脂（D101、DM301、DA201、AB-8、LD605）用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡24h，再用蒸餾水反復(fù)洗滌6～8次，至無乙醇味，然后用5%HC1溶液浸泡8h，用蒸餾水洗至中性，再用5%的NaOH溶液浸泡8h，用蒸餾水洗至中性，備用。

2.2.2不同類型大孔樹脂吸附性能的考察量取各種類型的大孔樹脂（干重約為1g）置150mL的具塞錐形瓶中，分別精密加入細(xì)氈毛忍冬供試品溶液90mL，靜置24h，時(shí)時(shí)振搖，使其充分吸附后，過濾，按照2.1.3中的方法測定濾液中剩余總黃酮的含量，計(jì)算吸附量;將吸附平衡后的大孔樹脂轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，用95%乙醇解吸，測定解吸液中總黃酮的含量，計(jì)算解析率;結(jié)果見表1、圖3。

吸附量=上柱液中總黃酮含量（mg）-泄漏液中總黃酮含量（mg）

吸附率=[吸附量（mg）/上柱液中總黃酮含量（mg）]×100%

解吸率（%）=[解吸液中總黃酮含量（mg）/吸附量（mg）]×100%

結(jié)果表明：通過對五種不同的大孔樹脂進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)LD605吸附能力最強(qiáng)，但是很難被解吸下來;D101大孔樹脂在所給的實(shí)驗(yàn)條件下對總黃酮吸附有較大的吸附量，而且能夠把絕大部分解吸下來。故選擇D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物。

2.3D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬中總黃酮的的工藝參數(shù)考察

2.3.1上柱液濃度對總黃酮含量的影響稱取一定量的細(xì)氈毛忍冬浸膏，分別稀釋成不同濃度，通過裝有D101大孔樹脂（干重約4g）的吸咐柱中，以2～3mL/min流速進(jìn)行吸附，收集流出液，測定總黃酮的含量，計(jì)算大孔樹脂的比吸附量，結(jié)果見表2、圖4。

比吸附量=吸附量（mg）/樹脂干重（g）

結(jié)果表明：上柱液生藥濃度為0.10g/mL時(shí)，D101大孔樹脂對細(xì)氈毛忍冬總黃酮的比吸附量最大，為97.55mg/g，因此選擇上柱液生藥濃度為0.10g/mL。

2.3.2比上柱量對總黃酮含量的影響將180mL的細(xì)氈毛忍冬提取液通過D101大孔樹脂（干重約4g），上柱分離純化，分段收集流出液，每份10mL。測定流出液中總黃酮的含量，計(jì)算出其泄漏百分率，結(jié)果見表3、圖5。

比上樣量=生藥量（g）/樹脂干重（g）

結(jié)果表明：上樣至第14份時(shí)泄漏的細(xì)氈毛忍冬總黃酮開始顯著增大，說明樹脂柱開始不能完全吸附藥液中的總黃酮。為了細(xì)氈毛忍冬總黃酮保留完全，將最大上樣量80%的量即110mL作為上樣量，以總黃酮在藥材含量為3.39%計(jì)，得到樹脂的比上柱量為2.74g/g（藥材/干樹脂）。

3結(jié)論

大孔吸附樹脂為一種有機(jī)高聚吸附劑，具有選擇性好、吸附容量大、解吸容易、再生簡便等優(yōu)點(diǎn)，對苷類、黃酮類等成分的富集純化有較好的效果，在生物堿類、酚類等方面的分離純化中也有廣泛應(yīng)用[7]。鑒于細(xì)氈毛忍冬的有效成分有黃酮類和皂苷類成分，本研究采用大孔樹脂對細(xì)氈毛忍冬的提取物進(jìn)行分離純化。大孔樹脂法技術(shù)條件要求較高，本實(shí)驗(yàn)以靜態(tài)吸附量及解析率篩選樹脂類型，在動(dòng)態(tài)吸附條件上，研究影響純化的工藝參數(shù)如上樣液濃度、比上柱量等，最終確定了大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物的工藝為：D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物，上柱藥液生藥濃度為0.10g/mL，比上柱量2.74g/g（藥材/干樹脂）上柱吸附。本法簡單，成本較低，且能達(dá)到較好的分離純化效果，該法可用于擴(kuò)大生產(chǎn)，為下一步深入研究細(xì)氈毛忍冬中黃酮類化合物奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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徐炳聲.中藥金銀花原植物的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào).1979，14（1）：23-34.

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[3]王麗婷，王麗娟.大孔樹脂分離純化金銀花葉中的總黃酮[J].華西藥學(xué)雜志，2010，25（5）：575-576.

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[5]羅詠婧，李會(huì)軍，李萍，等.毛花柱忍冬花蕾化學(xué)成分研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2010，30（1）：73-76.

[6]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：23.

[7]匡海學(xué).中藥化學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003.

（收稿日期：2021-10-13編輯：劉斌）

基金項(xiàng)目：四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目課題（川銀花主流品種細(xì)氈毛忍冬特征性成分的分離及含量測定研究，項(xiàng)目編號：10ZA085）。

作者簡介：鄭光雅（1986-），女，漢族，碩士研究生，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庤b定、藥事管理。E-mail：412212711@qq.com