民族藥黑鎖梅根的生藥學研究段烘葉

2022-05-30 10:48:04段烘葉張潔楊竹雅楊劍啟余遠盼楊明瑞龔大偉李學芳

中國民族民間醫藥·上半月 2022年6期

段烘葉張潔楊竹雅楊劍啟余遠盼楊明瑞龔大偉李學芳

【摘要】目的：建立黑鎖梅根的生藥學研究方法，找出鑒別特征，為質量標準研究及深入研究開發提供依據。方法：采用性狀鑒別、顯微鑒別、化學成分分析及薄層色譜鑒別等方法進行系統的研究。結果：黑鎖梅根表面有較密并深陷的細縱皺紋。根橫切面木栓層有石細胞散在。韌皮部寬廣，射線向外呈喇叭狀并漸彎曲。木質部發達。粉末特征中石細胞類方形、長方形或類圓形，胞腔較大，紋孔明顯。淀粉粒臍點點狀、短縫狀、人字形;層紋不明顯。經過化學成分的系統預試驗結果顯示，主要含有多肽、蛋白質、糖類、苷類、黃酮類化合物等成分;薄層色譜結果顯示，3個不同產地黑鎖梅根藥材在相同位置上顯現相同的斑點，重現性較好。結論：研究結果為其進一步的深入研究和質量標準研究奠定了基礎。

【關鍵詞】黑鎖梅根;性狀鑒別;顯微鑒別;理化鑒別;薄層色譜

【中圖分類號】R284【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2022）11-0022-05

PharmacognosticalStudyontheNationalMedicinePrunusNiveus

DuanHongye1ZhangJie1YangZhuya1YangJiangqi2YuYanpan1YangMingrui1GongDawei1LiXuefang1*

1.YunnanUniversityofChineseMedicine，Kunming650500，China;

2.ChuxiongYiAutonomousPrefectureFoodandDrugInspection，Chuxiong67500，China

Abstract：Objective：ToestablishthepharmacognosticresearchmethodofRadixPrunusNivei，findouttheidentificationcharacteristics，andprovidethebasisforthequalitystandardresearchandfurtherresearchanddevelopment.Methods：Themethodsofcharacteridentification，microscopicidentification，chemicalcompositionanalysisandTLCidentificationwereused.Results：ThereweredenseanddeeplongitudinalwrinklesonthesurfaceofPrunusniveus.Therearestonecellsscatteredinthecorklayeroftherootcrosssection.Thephloemisbroadandtheraysaretrumpetshapedoutwardandgraduallycurved.Thexylemiswelldeveloped.Inthepowdercharacteristics，thestonecellsaresquare，rectangularorround，withlargecavitiesandobviouspits.Thestarchgranulesareumbilicallypunctate，shortslitandherringbone;Thelaminationisnotobvious.Theresultsofsystematicpre-testofchemicalcompositionshowedthatitmainlycontainedpeptides，proteins，sugars，glycosides，flavonoidsandothercomponents;TheresultsofTLCshowedthatthesamespotsappearedatthesamepositioninthethreesampleswithgoodreproducibility.Conclusion：Theresultslayafoundationforfurtherstudyandqualitystandardresearch.

Keywords：RadixPrunusNivei;CharacterIdentification;MicroscopicIdentification;PhysicalandChemicalIdentification;ThinLayerChromatography

黑鎖梅根為薔薇科懸鉤子屬植物紅泡刺藤RubusniveusThunberg.的根[1]。別名鉤絲刺、栽秧苗、鉆地風、黑黃泡、冒毒紹勞聶（彝族名）、安何肋輕肯（納西族名）。具有祛風除濕、解毒止痢等功效[2-3]。納西族將根用于痢疾、胃痛、急慢性腎炎、附件炎、疝氣、遺精、盜汗。藏族將去皮枝干用于流感、感冒、惡寒發熱、肺結核、頭痛、身痛[4]。研究[5-6]表明，紅泡刺藤含有酚酸類、萜類、黃酮類和維生素等活性成分。黃酮具有抗炎癥、抗過敏、抑制細菌、防治心腦血管疾病和抗腫瘤等作用[7]。黑鎖梅根是我省少數民族常用藥，在云南全省都有分布[8]，資源豐富，開發前景可觀。目前，我國對黑鎖梅根的研究主要集中在種質資源的評價和利用[9];果實的研究主

要有品質評價、生物活性成分的提取和抗氧化性等方面[10-12]。在性狀鑒別、顯微鑒別及理化鑒別方面尚屬空白，為了確保臨床用藥的準確性、有效性和安全性，本實驗對該藥材進行了系統的生學藥研究，為進一步的深入研究和質量標準研究奠定基礎。

1儀器與材料

1.1儀器NikonE100型生物顯微鏡、生物數碼攝影顯微鏡（日本Nikon）、RM223徠卡切片機（LeicaBiosystemsNusslochGmbh）、HI121徠卡攤片機（LeicaBiosystemsNusslochGmbh）、AdobePhotoshop2020簡體中文版圖形處理軟件、電熱恒溫水浴鍋DK98Ⅱ（天津市泰斯特儀器有限公司）、高速萬能粉碎機（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）、標準檢驗篩（浙江上虞市華豐五金儀器有限公司）、AR124CN電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）、KH7200B型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）、D28-2電磁爐（吳川市大昌電器有限公司）。

1.2材料石油醚（60～90℃，西隴科學股份有限公司）、氨水（AR，廣東光華科技股份有限公司）、氯仿（云南楊林工業開發區滇池藥業）、乙酸乙酯（AR，天津市致遠化學試劑有限公司）、甲酸（天津市風船有限公司）、乙醇（AR，四川西隴科學有限公司）、95%乙醇（昆明遠方生物制品有限公司）、無水乙醇（AR，昆明遠方生物制品有限公司）、固綠FCF（國藥集團化學試劑有限公司）、臧紅T（國藥集團化學試劑有限公司）、切片石蠟（上海懿洋儀器有限公司）、蜂蠟（中國醫藥上海化學試劑公司）。其余試劑均為分析純。

本品采自昆明市西山區西山，中國科學院昆明植物研究所經雷立公研究員鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物紅泡刺藤（RubusniveusThunberg.）的根。

2方法

2.1基源鑒別原植物標本送請中科院昆明植物所鑒定，根據標本鑒定結果，描述植物形態并核對《中國植物志》。

2.2性狀鑒定觀察藥材的形狀、大小、顏色、表面特征、質地、折斷面、氣味等外觀性狀特征進行描述并拍攝藥材照片。

2.3顯微鑒定取新鮮藥材藥用部位（根部）切成完整厚度均勻的薄片進行脫水（30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→95%乙醇→無水乙醇→無水乙醇→無水乙醇：TO（3∶1）→無水乙醇：TO（1∶1）→無水乙醇：TO（1∶3）→純TOⅠ→純TOⅡ→純石蠟Ⅰ→純石蠟Ⅱ），按照常規石蠟制片方法制作石蠟切片，然后再進行染色（純TOⅠ→純TOⅡ→95%乙醇→1%番紅→95%乙醇→無水乙醇Ⅰ→無水乙醇Ⅱ→無水乙醇Ⅲ→0.2%固綠→無水乙醇：TO（1∶3）→純TOⅠ→純TOⅡ）、封片。干藥材打粉過60目篩，制成粉末臨時裝片，利用顯微鏡觀察藥材的組織構造、細胞形態等特征來，并描述分析。

2.4理化鑒定將藥材粗粉（過40目篩），分別制備水提取液、乙醇提取液、酸性乙醇提取液、石油醚提取液，并按照天然藥物化學實驗指導中進行化學成分的系統預試驗，初步得出藥材所含的各類成分、并對各類成分進行薄層色譜試驗。

2.4.1系統預實驗

2.4.1.1水提取液稱取黑鎖梅根（根）粗粉5g，置于100mL錐形瓶中，加蒸餾水50mL浸泡放置過夜，過濾，濾出約20mL的濾液，用于檢查氨基酸、多肽、蛋白質等化學成分。將剩下的濾渣同濾液于水浴60℃上熱浸30min，然后趁熱過濾，濾渣舍去，濾液，用于檢查糖、多糖、有機酸、皂苷、苷類、酚類、鞣質等化學成分。

2.4.1.2乙醇提取液稱取黑鎖梅根粗粉10g，置于250mL磨口三角燒瓶中，加入95%乙醇100mL，于水浴上加熱回流1h，稍冷后加入蒸餾水36mL使其含醇量為70%，冷至室溫，過濾，濾渣舍去，濾液轉移至分液漏斗中，用100mL石油醚（60～90℃）萃取，分別萃取兩次，每次50mL，上層液（石油醚）舍去，下層液（乙醇提取液）濃縮至40mL，加95%乙醇50mL溶解后過濾，濾液，用于檢查黃酮、蒽醌、香豆素、萜類、甾體化合物、內酯類化合物、強心苷、有機酸、酚類、鞣質等成分。

2.4.1.3酸性乙醇提取液稱取黑鎖梅根粗粉2g，加0.5%的硫酸乙醇溶液10mL，于水浴上加熱回流10min，過濾，濾渣舍去，濾液，用于檢查生物堿類化學成分。

2.4.1.4石油醚提取液稱取黑鎖梅根粗粉1g，加入石油醚（60～90℃）10mL，室溫浸泡2～3h，過濾，濾渣舍去，濾液用于檢查揮發油、油脂、萜類、甾體化合物等成分。

2.4.2薄層色譜供試液的制備稱取3個不同產地的黑鎖梅根粗粉5g，置于磨口錐形瓶中，加95%乙醇50mL，于水浴上加熱回流1h，稍冷后加入蒸餾水18mL使其含醇量為70%，冷至室溫，過濾，濾液轉移至分液漏斗中;用50mL石油醚（60～90℃）分兩次萃取，每次用石油醚25mL，以除去葉綠素等，分出下層乙醇提取液，濃縮至20mL，加95%乙醇25mL溶解后過濾，適當超聲，濾液作為供試液。

3結果

3.1性狀鑒定本品干燥根呈圓柱形，挺直或稍彎曲，長約70cm，直徑0.3～2.3cm。表面黃棕色，有較密并深陷的細縱皺紋、排列稀疏的須根痕;質地堅硬，不易折斷，斷面略平坦，皮部棕褐色，較厚，木部淡黃色，略呈放射狀，皮部與木部易剝離。氣微，味微甜。如圖1所示。

3.2顯微鑒定

3.2.1根橫切面根橫切面呈類圓形，木栓層由10余列扁平細胞組成，有石細胞散在，外被落皮層。皮層狹窄，排列緊密。韌皮部寬廣，韌皮射線明顯，向外漸彎曲。形成層呈環狀排列。木質部發達，木纖維排列成環，導管單個或數個成群存在，分布較密集，呈放射狀排列。薄壁細胞中含淀粉粒和草酸鈣方晶。如圖2A、B、C所示。

3.2.2粉末特征本品粉末黃棕色。木栓細胞呈多角形，壁略增厚，含黃棕色色素。導管多為具緣紋孔導管，較大，直徑35～120μm。纖維呈長梭形，單個散在或成束，壁厚2～15μm，紋孔明顯，直徑10～35μm。石細胞單個或成群存在，類方形、長方形或類圓形，壁厚2～8μm。胞腔較大，紋孔明顯，直徑15～45μm。淀粉粒類圓形、半圓形或不規則形，直徑2～12μm，臍點點狀、短縫狀、人字形，層紋不明顯;復粒多見，由2～4分粒組成。草酸鈣方晶多，直徑5～18μm。如圖3所示。

3.3理化鑒定

3.3.1主要化學成分化學成分的系統預試驗結果顯示，黑鎖梅根含有多肽、蛋白質、糖類、苷類、有機酸類、酚類化合物、鞣質、黃酮類化合物、香豆素類、揮發油等成分。見表1～表5。

3.3.2薄層色譜分別吸取3個不同產地乙醇提取液4μL，點于同一塊硅膠G薄層板上，乙酸乙酯：甲酸：水（12∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后用10%硫酸乙醇溶液顯色后于105℃左右加熱數分鐘觀察，昆明市西山區碧雞鎮、尋甸回族彝族自治縣功山鎮、嵩明縣阿子營鄉3個不同產地黑鎖梅根藥材供試液在同一塊硅膠G板上的相同位置上顯現相同的斑點，且不同產地對應的斑點顏色相同，重現性較好。如圖4所示。

4討論

本文通過對黑鎖梅根的來源、藥材性狀、顯微及理化鑒別的研究結果表明：黑鎖梅根橫切面及粉末鑒別特征明顯，可作為其真偽鑒別的專屬性特征?；瘜W成分豐富，薄層色譜重現性好，為進一步的深入研究和質量標準研究奠定基礎。

在進行薄層色譜試驗時，采用的是乙醇提取液作為供試液，分別以乙酸乙酯∶甲酸∶水（4∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（8∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（12∶1∶1）等為展開劑展開，但最終以乙酸乙酯∶甲酸∶水（12∶1∶1）展開的成點性及重現性較好，其他比例的展開劑展開效果不佳，因所含成分復雜，拖尾現象嚴重，成點性不好。

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