高毒力肺炎克雷伯菌耐藥情況和分子特征研究

李麗娟，陳丹娜，謝小燕

（東莞市人民醫院 檢驗科，廣東 東莞523000）

肺炎克雷伯菌 （Klebsilla pneumoniae，KP）屬于常見的革蘭氏陰性桿菌，在院內感染和社區感染的致病菌中，肺炎克雷伯菌屬于常見的細菌之一。近年來細菌耐藥監測顯示，肺炎克雷伯菌的分離率在不斷增加，在患者機體免疫力下降的時候，可能會出現病菌的轉移，造成其他系統出現感染的情況［1］。1986年，高毒力肺炎克雷伯菌 （hypervirulentKlebsilla pneumoniae，hvKP）在臺灣被首次報道后，由hvKP引起的患者感染逐年上升，與醫院獲得性感染的 “經典”肺炎克雷伯菌 （classicKlebsiella pneumoniae，cKP）相比，hvKP所致感染區別在于［2］：主要導致流動性、健康人群嚴重感染；易發生感染的遠處轉移和擴散，如脾膿腫、肺炎、眼內炎和腦膜炎等，且患者更容易出現血液感染，不能及時控制將發展成為多臟器衰竭、感染性休克，威脅患者的生命。本研究分析東莞地區高毒力肺炎克雷伯桿菌的耐藥情況和分子分型，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 研究菌株收集2018年6月至12月東莞市人民醫院臨床非重復標本分離的255株肺炎克雷伯菌菌株作為試驗菌株，并剔除同一個患者相同部位的重復菌株。

1.2 拉絲試驗將分離的菌株接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，放置在溫度37℃恒溫箱中孵育24 h，使用接種環在菌落表面輕挑，當挑起過程中出現絲狀物，且絲狀物大于5 mm可判定拉絲試驗陽性，則為hvKP。

1.3 藥敏試驗采用Vitek2 Compact全自動微生物分析系統進行常用抗菌藥物的敏感性檢測，按照美國臨床和實驗室標準協會 （2019版）［3］推薦標準進行判讀。

1.4 血清型檢測采取煮沸法提取DNA，應用PCR技術對肺炎克雷伯菌莢膜血清型進行檢測［4］。莢膜血清型包括K1、K2、K5、 K20、 K54、 K57。

1.5 統計學分析采用SPSS 19.0進行數據分析，計數資料以百分比表示，應用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 hvKP菌株檢出率收集2018年6月至12月本院臨床非重復標本分離的255株肺炎克雷伯菌菌株，拉絲陽性有80株，即hvKP菌株檢出率為31.37%。

2.2 血清分型hvKP菌株中血清型K2型22株 （27.50%），K1型20株 （25.00%），K57型18株 （22.50%），K54型11株（13.75%）， K5型5株 （6.25%）， K20型4株 （5.00%）。 見表1。

表1 肺炎克雷伯菌的血清分型 ［n（%）］

2.3 hvKP與cKP的抗生素敏感性比較除對氨芐西林天然耐藥之外，hvKP對氨芐西林-舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、妥布霉素、環丙沙星、左旋氧氟沙星及復方新諾明的耐藥率均低于cKP，差異均有統計學意義 （均P＜0.05）；hvKP的ESBLs檢出率為 4.9%，低于cKP的27.1%，差異有統計學意義 （P＜0.05）。見表2。

表2 高毒性與經典肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率 （%）

3 討論

在20世紀90年代，臺灣研究者首次發現了一例高致病的肺炎克雷伯菌導致的肝膿腫，高毒力肺炎克雷伯菌 （hvKP）才逐漸被人們認知，該菌株存在高毒性、高侵襲性，患者感染后病情發展迅速，易出現全身轉移性病灶和感染性休克［5］。臨床上hvKP與傳統經典的肺炎克雷伯菌的感染情況類似，均以肺部感染和消化道感染多見。

本研究對我院肺炎克雷伯菌感染的患者進行菌株分離，結果顯示hvKP菌株中檢測出6種血清型，分別為K1、K2、K5、K20、K54、K57，其中以K2型和K1型為主，分別占27.50%（22／80） 和 25.00% （20／80）。 目前研究［6］發現肺炎克雷伯菌有78種血清型，不同區域的肺炎克雷伯菌的血清型有區別，亞洲地區以K1、K2、K54、K57型最常見，其中K1型和K2型具有高毒力；本研究與汪強等［7］的研究一致，hvKP以K2型和K1型為主。K1型和K2型hvKP與其他分型的hvKP相比較，可以更耐受中性粒細胞的水解吞噬等作用，并且K2型菌株產生的莢膜還能發揮逃避吞噬的作用，因此K1型和K2型更容易發生肝膿腫進而轉移誘發全身感染甚至是感染性休克［8］。抗生素敏感性檢測顯示，hvKP除對氨芐西林天然耐藥之外，對氨芐西林-舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、妥布霉素、環丙沙星、左旋氧氟沙星及復方新諾明的耐藥率均顯著低于cKP（P＜0.05）；hvKP的ESBLs檢出率為4.9%，顯著低于cKP的27.1% （P＜0.05）。ESBLs是一種超廣譜β內酰胺酶，研究［9］顯示hvKP產生的ESBLs可以水解青霉素、一代頭孢、二代頭孢、三代頭孢、單環內酰胺類抗生素，發揮耐藥作用。

綜上所述，東莞地區hvKP的血清型以K2型、K1型為主，對常用抗生素敏感，可檢測出ESBLs陽性菌株，臨床上可據此給予hvKP患者早期診斷和治療，改善預后。