食管癌組織中RASSF1A的表達(dá)變化及意義

李秀梅，秦炳照，劉 波

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院，湖北襄陽441000)

食管癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年大約有30萬食管癌新增病例［1，2］。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多因素共同參與的過程。Ras相關(guān)區(qū)域家族1A(RASSF1A)是2000年發(fā)現(xiàn)的新型候選腫瘤抑制基因(TSG)，其在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡方面具有重要作用，在肺、乳腺、腎、消化系統(tǒng)等部位的癌組織中存在不同程度的表達(dá)缺失［3～5］。本研究通過檢測RASSF1A在食管癌組織中的表達(dá)，進(jìn)一步探討其在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年1～12月湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院住院并接受開放手術(shù)治療的120例食管癌患者的癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織(距腫瘤邊緣8 cm以上，并經(jīng)病理檢查排除腫瘤累及)，術(shù)前均未行任何抗癌藥物治療或放療。其中，男94例，女26例;年齡 43～83歲，中位年齡為 63歲;TNM分期(UICC-AJCC，2003)Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期67例;分化程度分為高、中、低分化各40例;均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。

1.2 方法

1.2.1 RASSFIA檢測方法 所有標(biāo)本常規(guī)用甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片;HE染色，光鏡觀察分級和分期。采用免疫組化 SP法，羊抗人RASSF1A多克隆抗體購于北京中山生物技術(shù)公司，按說明書操作。2名醫(yī)師雙盲法觀察切片，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色為RASSF1A陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分:＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)弱計(jì)分:無色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕褐色3分。陽性細(xì)胞百分比與染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積0～2為陰性，3～8分為陽性，9～12分為強(qiáng)陽性。陽性、強(qiáng)陽性均判為陽性表達(dá)。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RASSF1A在食管癌及其癌旁正常組織中的表達(dá) RASSF1A在食管癌及其癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為 50.08%(61/120)、91.60%(110/120)，P ＜0.01。

2.2 RASSF1A表達(dá)與食管癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 RASSF1A陽性表達(dá)與食管癌的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05)，見表1。

表1 RASSF1A表達(dá)與食管癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因改變、多階段變異累積的復(fù)雜病理過程，患者就診時(shí)多屬中、晚期。因此，要改善食管癌患者的預(yù)后，早期診斷是相當(dāng)重要的。RASSF1A是2000年報(bào)道從3號染色體短臂克隆出來的肺癌新型候選抑癌基因，其作為抑癌基因的具體機(jī)制尚不清楚。目前已證實(shí)［6～9］，Ras-GTPase是調(diào)節(jié)增殖與凋亡的分子開關(guān)超家族一員，它的不同功能取決于細(xì)胞外的信號分子;由此，活化的Ras可能因與一系列不同的下游效應(yīng)分子相互作用而發(fā)揮兩種截然不同的功能，既可以促進(jìn)細(xì)胞生長和分化，又可通過誘發(fā)細(xì)胞休眠，誘導(dǎo)終末分化和凋亡來抑制細(xì)胞生長。Lee等［10］用甲基化特定PCR法檢測正常結(jié)腸組織、結(jié)腸腺瘤、結(jié)直腸癌，發(fā)現(xiàn)RASSF1A CpG島甲基化在結(jié)直腸癌灶很頻繁，遠(yuǎn)比癌灶旁及癌遠(yuǎn)隔部位的甲基化概率高。有研究［11～15］發(fā)現(xiàn)，食管癌細(xì)胞、食管癌組織、胃癌細(xì)胞、原發(fā)性胃癌組織及膀胱癌細(xì)胞中RASSF1A明顯甲基化，且甲基化程度與臨床分期相關(guān)，進(jìn)一步表明RASSF1A的表達(dá)失活部分是由RASSF1A啟動子區(qū)CpG島的高甲基化所引起的。本研究顯示，RASSF1A蛋白表達(dá)與食管癌TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05)。因此，該基因有望在多種腫瘤的早期診斷和篩選中發(fā)揮重大作用，為消化道腫瘤早期診斷、預(yù)后判斷和干預(yù)治療提供新思路。

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