不同分級慢性阻塞性肺疾病患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3表達(dá)水平及與炎性因子相關(guān)性研究

宋貝貝 武思羽 敬增 葉麗云 曹敬 劉新秀

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是臨床常見的一種呼吸系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為患者的氣流阻塞為特征的支氣管氣流受限的一類慢性疾病，吸煙是最為常見的相關(guān)危險因素之一[1,2]?；颊甙l(fā)病后表現(xiàn)為不同程度的胸悶、氣促、氣短、咳嗽以及咳痰等臨床表現(xiàn)，病情加重時可明顯影響患者的肺功能，降低患者的生活質(zhì)量，甚至危及患者的生命[3]。目前，對于COPD的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，現(xiàn)有的研究表明COPD的發(fā)病主要與機(jī)體炎性反應(yīng)、免疫系統(tǒng)功能紊亂等有一定的關(guān)聯(lián)。全身或呼吸系統(tǒng)中局部的免疫系統(tǒng)功能障礙介導(dǎo)炎性反應(yīng)均會加重患者呼吸道受感染的概率，同時還可在一定程度上增加患者的疾病進(jìn)程，甚至可直接誘導(dǎo)病情惡化，促使患者死亡，因此COPD患者的免疫應(yīng)答作用以及免疫活性調(diào)節(jié)在其發(fā)病中占有重要地位[4,5]。正常情況下，機(jī)體的免疫反應(yīng)主要受T細(xì)胞亞群的參與，在T細(xì)胞免疫中緊密相關(guān)的是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(Forked transcription factor 3,Foxp3)則是表達(dá)在CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子上的重要標(biāo)記物。當(dāng)前對于COPD患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及標(biāo)記物Foxp3的研究鮮有報道[6,7]。為此，在本研究中嘗試對COPD患者Foxp3表達(dá)及炎性因子水平的檢測，以初步探討COPD患者的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2017年1月來院就診的120例COPD患者納入觀察組，其中男64例，女56例；年齡45～78歲，平均年齡(58.23±8.28)歲。按照病情嚴(yán)重程度分為COPD 1～2級組53例、COPD 3～4級組67例，并選擇同期在我院進(jìn)行健康體檢的健康志愿者50例為對照組，受試者各項生命體征指標(biāo)正常，無COPD疾病史，其中男26例，女24例；年齡43～75歲，平均年齡(56.29±9.21)歲。2組受試者間性別比、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。2組受試者對研究內(nèi)容知情同意簽署知情同意書，研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)診斷確診為COPD，所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)會制定《慢性阻塞性肺疾病診斷指南》(2013版)中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；②所有患者肺功能指標(biāo)第1秒用力呼吸容積和用力肺活量比值≤70%；③患者入組前未服用相關(guān)治療藥物影響本研究檢測指標(biāo)結(jié)果的判斷；④患者自愿加入本研究，并完成隨訪工作。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者合并全身其他部分的炎性反應(yīng)；②合并肝腎功能及凝血功能嚴(yán)重障礙者；③合并自身免疫系統(tǒng)疾病者、其他呼吸系統(tǒng)疾病患者；④精神狀態(tài)異?；颊?、隨訪期間脫落的患者。

1.3 檢查方法 觀察組患者和對照組受試者在入院當(dāng)天采集空腹靜脈血約3 ml，加入到含有肝素的抗凝管中，以TDZ5-BP型高速離心機(jī)(長沙湘銳離心機(jī)有限公司)進(jìn)行離心分離，轉(zhuǎn)速3 000 r/min、離心半徑10 cm、離心10 min得血清和血漿樣本，采用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法測定患者血清C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定患者血清Foxp3蛋白、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平，取離心后血漿采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法測量患者血漿B型腦尿鈉肽(B-type Natriuretic peptide,BNP)水平。

1.4 評價方法 對觀察組患者和對照組受試者的Foxp3水平、炎性因子指標(biāo)(包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP)水平進(jìn)行統(tǒng)計對比。將觀察組患者按照COPD病情分級程度分組，分為COPD 1～2級組共53例患者、COPD 3～4級組共67例患者，對2組患者的Foxp3、CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平進(jìn)行統(tǒng)計比較。最后，采用Pearson檢驗對COPD患者的Foxp3水平與炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平相關(guān)性進(jìn)行分析 探討。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組各項指標(biāo)比較 觀察組Foxp3水平低于對照組，炎性因子包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對照組各項指標(biāo)比較

2.2 COPD 1～2級組與COPD 3～4級組指標(biāo)比較 COPD 3～4級組患者Foxp3水平低于COPD 1～2級組，而CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于COPD 1～2級組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 COPD 1～2級組與COPD 3～4級組各項指標(biāo)比較

2.3 相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗，F(xiàn)oxp3水平與CRP、IL-6、TNF-α、BNP呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 Foxp3與CRP、IL-6、TNF-α、BNP相關(guān)性分析

3 討論

在本研究中，對COPD患者和健康受試者的Foxp3蛋白和炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平進(jìn)行檢測比較，結(jié)果顯示觀察組患者的Foxp3水平低于對照組，炎性因子包括CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于對照組，表明Foxp3蛋白、炎性因子CRP、IL-6、TNF-α、BNP等參與了COPD疾病的發(fā)生過程。這是因為Foxp3蛋白為T淋巴細(xì)胞亞群的特異性標(biāo)記物，其水平的變化直接反映了患者體內(nèi)免疫功能狀態(tài)的變化，當(dāng)其水平降低時提示機(jī)體T淋巴細(xì)胞亞群，尤其是CD4+處于較低的水平，T細(xì)胞免疫水平低下[13,14]。CRP在機(jī)體受到感染或組織損傷時血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)，當(dāng)其在體內(nèi)水平上升時提示患者處于炎性反應(yīng)過程[15]。IL-6則是活化T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，其在機(jī)體內(nèi)水平升高能夠激活中性粒細(xì)胞釋放大量的氧化自由基類物質(zhì)，引起患者的肺部氣道組織的損傷[16]。TNF-α是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，在機(jī)體的全身炎性因子中發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]。BNP為多個氨基酸組成的血管活性肽物質(zhì)，當(dāng)其水平升高時可刺激肺部血管的循環(huán)狀態(tài)的改變，收縮肺部血管和氣道平滑肌，誘發(fā)患者的氣流受限[18]。在進(jìn)一步對不同病情分級患者比較中，COPD3～4級組患者Foxp3水平低于COPD1～2級組，而CRP、IL-6、TNF-α、BNP水平均高于COPD1～2級組，表明各項細(xì)胞因子隨著患者病情的變化而在數(shù)值上呈現(xiàn)規(guī)律性的改變。在相關(guān)性分析中，F(xiàn)oxp3水平與CRP、IL-6、TNF-α、BNP呈負(fù)相關(guān)性，表明Foxp3、CRP、IL-6、TNF-α、BNP均參與到COPD患者的病情發(fā)生發(fā)展過程，且免疫功能、炎性反應(yīng)均在COPD病情進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，免疫功能的降低可能是COPD發(fā)病的一個重要原因，F(xiàn)oxp3可作為COPD發(fā)病的保護(hù)性因素。

綜上所述，在COPD患者體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)水平有降低趨勢，并隨著患者病情分級加重而進(jìn)一步降低，且Foxp3與炎性因子水平呈負(fù)相關(guān)性，通過對COPD患者Foxp3、炎性因子水平監(jiān)測，對于疾病的臨床治療評估有一定的指導(dǎo)作用。