血清ESM-1、miR-498水平變化與肺腺癌患者預后的關系

王麗寧，溫婷

寶雞市人民醫院血液腫瘤內科，陜西 寶雞 721000

肺癌是全球發病率和致死率最高的癌癥，每年約新增180萬例，死亡人數占癌癥的30%[1]。肺腺癌是一種源自于支氣管黏膜上皮的肺癌，是肺癌中較為常見的一種[2]。肺腺癌患者初期并無明顯癥狀，少數可出現咳嗽、痰血、低熱、氣悶等癥狀，導致確診時已到達中晚期[2]。目前常采用肺癌根治術進行治療，治療效果較好，但復發率也較高，嚴重影響患者預后[3]，因此對肺腺癌患者進行預后評估具有十分重要的臨床意義。目前臨床上常用的肺腺癌預后預測血清指標有CY211、SCC、CEA等，但特異度和靈敏度均欠佳。血清內皮細胞特異性分子(endothelial cell specific molecules-1，ESM-1)是一種內皮細胞所生成的可溶性蛋白聚糖，有研究發現其水平在肺癌的胸腔積液中具有較高的表達，且對于肺腺癌患者的預后預測具有一定的意義[4]。微小RNA-498(Microrna，miR-498)屬于抑癌miRNA，可對肺癌相關的抑癌基因和蛋白進行控制，進而起到抑癌的效果，有研究認為miR-498 在肺癌的發生和發展中發揮著重要的作用[5]。ESM-1和miR-498 在國外已被大量運用于患者預后預測中，但在國內研究仍較少。本研究旨在探討血清ESM-1、miR-498水平變化與肺腺癌患者預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取寶雞市人民醫院2017 年5月至2020 年1 月收治的94 例肺腺癌患者作為研究對象。納入標準：(1)符合《臨床肺癌學》[6]中肺腺癌診斷標準；(2)經病理學檢查確診為肺腺癌；(3)精神狀態良好可配合治療者；(4)初次治療者。排除標準：(1)患者出現腦、脊髓癌細胞轉移；(2)患者合并其他類型腫瘤；(3)患者存在嚴重肝腎功能異常；(4)患者臨床資料不完整?；颊叱鲈汉箅S訪一年，如出現轉移、復發、死亡則列入預后較差組，反之則列入預后良好組，其中預后良好組57例，男性30例，女性27例；年齡40～78歲，平均(59.65±5.43)歲；TNM 腫瘤分期：Ⅰ期18 例，Ⅱ期22 例，Ⅲ期17 例；有淋巴結轉移31 例，無淋巴結轉移26 例。預后較差組37 例，男性19 例，女性18 例；年齡41～79 歲，平均(59.42±5.38)歲；TNM 腫瘤分期：Ⅰ期11例，ⅡI 期13 例，Ⅲ期13 例；有淋巴結轉移21 例，無淋巴結轉移16 例。兩組患者的一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理學委員會審核并通過，患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 兩組患者均接受相同的治療方案，在患者治療前和治療結束后抽取患者空腹靜脈血2.5 mL，高速離心，分離血清送至檢驗科。血清ESM-1選取上海信裕生物科技有限公司生產的血清ESM-1試劑盒，使用時首先用50 μL 去離子水稀釋標準品，將蓋子蓋好后靜置10 min，隨后反復搖晃均勻，此時標準品濃度為200 ng/mL，分別稀釋至200 ng/mL、100 ng/mL、50 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、6.25 ng/mL、3.125 ng/mL。將試劑盒內的50 mL 洗滌濃縮液與去離子水混合為500 mL 洗滌液。向抗體原液內加入4 mL抗體稀釋液，隨后再將抗體稀釋液配置為10 mL 抗體工作液，震蕩搖勻。配置空白孔、標準孔和待測樣品孔，向空白孔加入100 μl 去離子水，剩余孔則加入100 μL標準品，期間避免氣泡產生，將樣品加入酶標板孔的底部，不與孔壁接觸，震蕩搖勻，將封板膜覆于酶標板，震蕩2 h。輕輕揭掉封板膜，舍棄液體，甩干，連續洗板5 次并拍干，每個孔內滴加100 uL 抗體工作液，并振蕩孵育2 h。再輕輕揭掉封板膜，舍棄液體，甩干，連續洗板5 次并拍干，孔內加入100 μL 上海源葉生物有限公司的辣根過氧化物酶對親和素工作液進行標記，常溫震蕩45 min。將100 μL 底物顯示液加入孔內，并振蕩搖勻15 min，將50 μL終止溶液加入孔內后，采用德朗醫療設備有限公司的DR-200Βc 酶標儀進行檢測，在450 nm 波長下對每個孔的光密度進行測量。MiRⅡ498 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應進行檢測。

1.3 觀察指標 比較兩組患者治療前和治療3個月后的血清ESM-1、miR-498水平；分析患者不同臨床特征(性別、年齡、TNM類型、是否存在淋巴結轉)與血清ESM-1、miR-498水平關系。

1.4 統計學方法 應用SPSS20.0 統計軟件進行數據統計分析。計量資料符合正態分布，以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對樣本t 檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗，多因素分析采用Logistic 回歸分析檢驗，繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic，ROC)分析血清ESM-1、miR-498對患者預后的預測價值。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較 治療前，兩組患者的血清ESM-1、miR-498水平比較差異均無統計學意義(P＜0.05)；兩組患者治療后的血清ESM-1、miR-498 水平明顯低于治療前，差異均有統計學意義(P＜0.05)；治療后，預后較差組患者的血清ESM-1 水平明顯高于預后良好組，miR-498水平明顯低于預后良好組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較(±s)

表1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較(±s)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

組別預后良好組預后較差組t值P值例數57 37治療前42.21±5.53 42.14±5.42 0.060 0.951治療后32.75±5.42a 38.31±5.54a 4.817 0.001治療前3.63±0.42 3.59±0.39 0.354 0.698治療后2.88±0.41a 2.17±0.53a 3.021 0.002 ESM-1(ng/mL) miR-498(ng/mL)

2.2 不同臨床特征患者的血清ESM-1 水平比較 不同年齡、性別患者的血清ESM-1水平比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；TNM 分期＞Ⅱ期患者的血清ESM-Ⅰ水平明顯高于≤Ⅱ期患者，有淋巴結轉移患者的血清ESM-Ⅰ水平明顯高于無淋巴結轉移患者，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床特征患者的血清ESM-1水平比較(±s，ng/mL)

表2 不同臨床特征患者的血清ESM-1水平比較(±s，ng/mL)

臨床特征年齡(歲)＞65≤65性別男女TNM＞Ⅱ≤Ⅱ是否存在淋巴結轉移是否例數52 42 49 45 31 63 42 52血清ESM-1 34.95±5.46 34.92±5.48 34.89±5.49 34.99±5.41 40.99±5.48 31.96±5.47 39.84±5.42 30.98±5.56 t值0.026 0.189 7.520 7.768 P值0.979 0.568 0.001 0.001

2.3 不同臨床特征患者的血清miR-498 水平比較 不同年齡、性別患者的血清miR-498 水平比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；TNM 分期＞Ⅱ期患者的血清miR-498 水平明顯低于≤Ⅱ期患者，有淋巴結轉移患者的血清miR-498 水平明顯低于無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床特征患者的血清miR-498水平比較(±s，ng/mL)

表3 不同臨床特征患者的血清miR-498水平比較(±s，ng/mL)

臨床特征年齡(歲)＞65≤65性別男女TNM＞Ⅱ≤Ⅱ是否存在淋巴結轉移是否例數52 42 49 45 31 63 42 52血清miR-498 2.64±0.45 2.56±0.40 2.63±0.42 2.57±0.44 2.46±0.47 2.67±0.41 2.38±0.48 2.78±0.38 t值0.900 0.676 2.224 4.510 P值0.370 0.501 0.029 0.001

2.4 影響患者預后的因素 經多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清ESM-1和miR-498是影響患者預后的獨立危險因素(P＜0.05)，見表4。

表4 影響患者預后因素的多因素logistic回歸分析

2.5 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預后的預測價值 經ROC分析結果顯示，血清ESM-1 對肺腺癌患者預后的預測靈敏度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值明顯優于miR-498，而血清ESM-1 與miR-498聯合檢測對患者預后的預測靈敏度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值明顯優于各項指標單獨檢測，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表5和圖1。

表5 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預后的預測價值

圖1 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預后的預測ROC曲線圖

3 討論

肺腺癌具有惡性程度高、轉移性高和侵襲能力強的特點[7-9]。隨著人們醫學技術的進步，對于肺腺癌的治療方法也變得多樣化，包括肺癌根治術、靶向治療、放化療等，療效得到明顯提高，同時有效降低患者不良反應[10-11]。但術后復發和轉移的患者仍較多，中遠期預后效果不佳，所以治療后早期對于患者預后效果預測較為重要[12-13]。近些年來，血清生物學在肺癌的預后預測中研究頗多，為此展開研究，為臨床的診治提供理論基礎。

血清ESM-1 是一種位于人體第5 號染色體上的可溶性蛋白聚糖[14]。其主要分布于肝、腎等組織的血管內皮細胞內，是任意血管內皮細胞功能異常以及細胞增生的特異性標志物。ESM-1 在腫瘤的發生和發展中能夠對腫瘤內部血管進行調控，進而影響體內的炎性反應。有研究發現，ESM-1參與到腫瘤細胞的黏附中，同時在晚期患者患者中明顯增高[15]。本研究發現，治療后，預后較差組患者的血清ESM-1 水平明顯高于預后良好組，與上述研究結論相一致。ESM-1對于細胞黏附的調節和炎性反應的控制都是促進腫瘤進展的關鍵，同時能夠和胰島素樣生長因子起到共同效果，對細胞的生長和發育起到重要的作用[16]。本研究發現，TNM分期＞Ⅱ期患者血清ESM-1顯著高于≤Ⅱ期患者，存在淋巴結轉移患者血清ESM-1顯著高于不存在淋巴結轉移患者，這可能是因為，TNM分期＞Ⅱ期以及淋巴結轉移的患者往往腫瘤已經發展至中晚期，血清ESM-1 水平明顯升高[17]。本研究發現，血清ESM-1是影響肺腺癌患者預后的獨立危險因素，說明血清ESM-1 能夠作為肺腺癌患者預后的預測指標。MiRNAs是一種具有高度保守化的小分子非編碼單鏈RNA。miR-498 作為其中一種，能夠對部分與腫瘤發生、發展及轉移相連的蛋白和抑癌基因進行調控，在癌癥的發生和發展中發揮著重要的作用[18-19]。本研究顯示，治療后miR-498 水平明顯低于預后良好組，國外有學者認為，miRNA-498水平與肺癌患者分期和淋巴結轉移存在明顯的相關性[20]，這與本研究結果一致。血清miRNA-498 是影響肺腺癌患者預后的獨立危險因素，說明血清miRNA-498可作為肺腺癌患者預后的預測指標。本研究發現，血清ESM-1與miR-498聯合檢測對于患者預后的預測靈敏度、特異度、陽性預測值以及陰性預測值明顯優于各項指標單獨檢測(P＜0.05)。說明兩種指標的聯合檢測能夠彌補各指標檢測的不足之處，提高預測價值。但本次研究可能因為研究病例較少，導致實驗存在一定偏差，以后擴大病例的收集以彌補此不足。

綜上所述，血清ESM-1以及miR-498的水平變化與肺腺癌患者預后存在明顯的相關性，兩種指標聯合檢測對肺腺癌患者預后具有較好的評估價值，可有效運用于臨床診治中。