麻風樹JcWRI1基因克隆及功能分析

謝佳彤　孫麗丹　陳曉曼　方彤彤　張苗苗　趙雨凡　楊冉　王琦媛　楊同文　唐躍輝

摘要：WRI1是AP2類轉錄因子的成員，在植物生長發(fā)育和脂肪酸合成途徑中起著重要的調控作用。通過RT-PCR技術從麻風樹中克隆了1個AP2家族基因，將其命名為JcWRI1。JcWRI1基因開放閱讀框全長1 137 bp，編碼378個氨基酸。表達模式分析結果表明，在麻風樹種子胚中沒有檢測到JcWRI1基因的表達，然而該基因在麻風樹種子胚乳中高表達。亞細胞定位結果表明，JcWRI1基因編碼1個核定位蛋白質。表型分析結果表明，提高JcWRI1基因的表達量不影響轉基因水稻的生長發(fā)育，但是改變了轉基因植株葉片、胚乳中脂肪酸組分的含量，并且提高了轉基因水稻葉片、胚乳中的含油量。qRT-PCR結果表明，脂肪酸合成相關基因在JcWRI1轉基因水稻中的相對表達量顯著高于野生型。研究結果為將來研究JcWRI1基因在麻風樹種子胚乳發(fā)育及油脂代謝途徑中的功能提供了理論依據(jù)和新的基因資源。

關鍵詞：麻風樹;JcWRI1;AP2家族;轉基因水稻;胚乳

中圖分類號：S727.32文獻標識碼：A文章編號：1000-4440（2022）02-0334-09

Cloning and functional analysis of JcWRI1 gene from physic nut

XIE Jia-tong，SUN Li-dan，CHEN Xiao-man，F(xiàn)ANG Tong-tong，ZHANG Miao-miao，ZHAO Yu-fan，YANG Ran，WANG Qi-yuan，YANG Tong-wen，TANG Yue-hui

Abstract：WRI1 is a member of AP2 transcription factors and plays an important regulatory role in plant growth and development and fatty acid synthesis. In this study， an AP2 family gene was cloned from physic nut by RT-PCR and named JcWRI1. The open reading frame of JcWRI1 gene was 1 137 bp in length， encoding 378 amino acids. The results of expression pattern analysis showed that the expression of JcWRI1 gene was not detected in the embryo， but it was highly expressed in the endosperm. The subcellular localization results indicated that the JcWRI1 gene encoded a nuclear localization protein. Phenotypic analysis revealed that the increase of JcWRI1 gene expression did not affect the growth and development of transgenic rice， but changed the fatty acid composition in the leaves and endosperm of transgenic plants and increased the oil content in the endosperm and leaves of transgenic rice. The results of qRT-PCR showed that the relative? expression of fatty acid synthesis-related genes in JcWRI1 transgenic rice was significantly higher than that in wild-type rice. The results provide a theoretical basis and new genetic resources for further research on the function of JcWRI1 gene in the endosperm development and lipid metabolism pathway of physic nut.

Key words：physic nut;JcWRI1;AP2 family;transgenic rice;endosperm

江蘇農業(yè)學報2022年第38卷第2期

謝佳彤等：麻風樹JcWRI1基因克隆及功能分析

油不僅是生產食物的原料，也是一種重要的工業(yè)原料，具有巨大的經(jīng)濟價值。在植物種子中，三酰基甘油（TAGs）作為一種主要的儲存化合物，能夠為種子發(fā)育和幼苗生長提供碳源和能量[1]。TAGs是甘油和脂肪酸酯化的產物，通過基因工程的方法提高TAG代謝途徑關鍵酶基因GPAT、LPAT、DGAT的表達量，能夠增加植物種子的含油量[2-4]。近年來，控制脂肪酸合成途徑中多種酶活性的轉錄因子已經(jīng)引起研究者的廣泛關注。

WRI1是AP2類轉錄因子家族成員，包含2個保守的AP2/ERF結構域，首次是從種子表皮有皺紋的擬南芥突變體中分離出來的，命名為WRINKLED1[5]。此外，在種子發(fā)育過程中，WRI1突變體種子不能將葡萄糖、蔗糖轉化為脂肪酸合成的前體，并且種子含油量降低了80%[5]。相反，以WRI1突變體為受體，過表達AtWRI1基因不僅可以恢復突變體正常的種子外觀，而且與野生型相比增加了種子的含油量[6]。在玉米中，過表達ZmWRI1不影響轉基因植株種子萌發(fā)、葉片發(fā)育和作物產量，然而會增加轉基因植株種子的含油量[7]。在大豆中，提高GmWRI1b基因的表達量增加了大豆種子的含油量[8]。此外，在擬南芥中過表達油菜BnWRI1基因后，通過上調脂肪酸合成基因EAR的表達量增加了種子的含油量[9]。綜上所述，盡管不同物種的WRI1基因已經(jīng)被克隆并進行了功能分析，然而這些物種的油脂主要積累在種子胚中，而目前與油脂在植物種子胚乳中積累相關的WRI1基因是否擁有相似功能的研究較少。因此，挖掘與油脂在種子胚乳中積累相關的WRI1基因并對其調控機制進行研究，對于胚乳油脂含量的提高具有重要理論意義。

麻風樹，又名小桐子，是一種多用途的木本植物，具有抗旱、耐鹽堿、耐貧瘠、胚乳含油量高等特點，已被廣泛認為是最適宜用于生產生物柴油的能源植物之一[10]。在本研究中，筆者克隆了1個麻風樹AP2家族轉錄因子基因，將其命名為JcWRI1，并在水稻中分析該基因的功能，以期為麻風樹及其他作物高含油品種的培育提供新的基因資源和理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與試劑

本試驗所用的麻風樹品種為GZQX0401自交系，水稻材料為粳稻中花11（ZH11）。取麻風樹授粉后29 d、35 d、41 d、45 d種子的胚、胚乳用于表達模式分析。本試驗所用高保真酶、T4 DNA連接酶、pMD18-T載體、限制性內切酶等試劑均購自寶生物工程（大連）有限公司。

1.2基因克隆與植物表達載體的構建

按JcWRI1基因序列設計特異性引物，以麻風樹種子cDNA為模板，通過RT-PCR技術克隆獲得JcWRI1基因序列，電泳回收后將用RT-PCR技術擴增得到的目的基因連接到pMD18-T載體上，轉化、擴大培養(yǎng)、提取質粒后送北京奧科鼎盛生物科技有限公司測序，隨后將測序正確的目的基因從pMD18-T載體切下來，最后通過T4 DNA連接酶將回收的目的基因連接到植物表達載體上，再次將構建好的植物表達載體送北京奧科鼎盛生物科技有限公司測序，確保目的基因正確連接到植物表達載體上后，將植物表達載體轉入農桿菌EHA105中保存待用。

1.3JcWRI1基因編碼蛋白質的亞細胞定位分析

以麻風樹種子cDNA為模板，通過RT-PCR技術克隆獲得JcWRI1基因的全長編碼序列（不含終止密碼子），再將測序正確的序列連接到亞細胞定位載體p-GFP上，形成JcWRI1-GFP融合表達載體。然后將空載體和JcWRI1-GFP融合表達載體通過聚乙二醇（PEG）介導的方法轉移到擬南芥原生質體細胞中，在熒光共聚焦顯微鏡下觀察定位結果。

1.4轉JcWRI1基因水稻的獲得

本研究以ZH11愈傷組織為受體，通過農桿菌EHA105介導的轉化法將構建好的JcWRI1表達載體通過轉基因方法轉化到水稻中[11]，通過潮霉素篩選、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）染色初步確定轉基因植株，最后通過RT-PCR技術檢測JcWRI1基因在野生型（WT）、轉基因水稻植株[包括轉JcWRI1基因水稻1號株系（OE1）、轉JcWRI1基因水稻2號株系（OE2）、轉JcWRI1基因水稻3號株系（OE3）]中的表達情況，最終確定有效轉基因植株，并挑選3株用于后續(xù)研究。

1.5轉JcWRI1基因水稻的表型分析

野生型和轉基因水稻種子萌發(fā)后，挑選生長一致的幼苗并將其轉移到水稻營養(yǎng)液中繼續(xù)生長，14 d后進行表型分析，選取30株幼苗，統(tǒng)計其根長和株高。

1.6野生型和轉基因水稻種子脂肪酸、淀粉含量的測定

脂肪酸組分的測定參考前人的研究方法[12]，所選材料為成熟的野生型水稻、轉JcWRI1基因水稻純合體種子和劍葉，首先稱取50 mg種子，用三氯甲烷徹底清洗后放入10 ml玻璃瓶中，隨后加入1 ml 5%（體積分數(shù)）H2SO4甲醇溶液、300 μl甲苯，并補充20 μl 0.2%（質量體積比）丁基羥基甲苯溶液，以C17∶0作為內標（40 μl），然后將玻璃管在90 ℃加熱1.5 h。冷卻至室溫后，加入1 ml 0.9%（質量體積比）NaCl并混合均勻，隨后加入2 ml己烷并混合均勻，并在室溫下4 000 r/min離心5 min，接著將上層溶液轉移到新的玻璃管中，向新的玻璃管中加入2 ml己烷并混合均勻，在室溫、4 000 r/min條件下離心5 min，然后將上層溶液轉移到新玻璃管中，最后使用配備火焰離子化檢測器（FID）的Agilent 7890A GC系統(tǒng)儀器在HP-88色譜柱（30.00 mm×0.25 mm內徑，膜厚0.20 μm）上通過氣相色譜（GC）分析脂肪酸甲酯提取物。用野生型、轉基因水稻植株成熟的種子胚乳檢測淀粉含量，具體操作方法參考淀粉總量試劑盒（萊爾生物醫(yī)藥科技有限公司，貨號：K-TSTA-100A）說明書。

1.7野生型和轉基因水稻植株含油量的測定

所用材料為成熟的野生型、轉基因水稻胚乳和劍葉。首先將胚乳磨碎并于80 ℃烘干，將葉片去除葉綠素后于80 ℃烘干。將去除葉綠素后磨碎的葉片粉末在干燥器中冷卻后稱質量，再將磨碎的粉末放入10 ml離心管中，然后加入2 ml異丙醇且于85 ℃水浴10 min，冷卻至室溫后，加入3 ml正已烷并靜置5 min，然后劇烈振蕩，接著加入2.5 ml 15% Na2SO4上下顛倒后，將上層溶液轉入1個新的玻璃管中，下層再加入5 ml正己烷-異丙醇（體積比7∶2）再次萃取。最后將玻璃管中萃取得到的有機相用氮氣吹干，烘干過夜后在干燥器內冷卻，再次稱玻璃管質量。種子、葉片含油率=（含油玻璃瓶質量-玻璃瓶質量）/種子質量×100%。

1.8RNA的提取及基因表達情況的檢測

本研究所用材料中RNA的提取均采用賽默飛世爾科技（中國）有限公司的RNA提取試劑盒（貨號：12183025），cDNA鏈的合成采用TaKaRa公司的逆轉錄試劑盒（貨號：6215A）。定量PCR采用LightCycler480 Ⅱ實時熒光定量PCR儀和TB Green Fast qPCR Mix試劑盒，具體操作方法參照試劑盒說明書。分別用OsUbiquitin、JcActin作為水稻、麻風樹的內參基因，用2-△△Ct計算基因的相對表達水平，本研究所需引物序列見表1，所有試驗均進行3次生物學重復。

2結果與分析

2.1JcWRI1基因的生物信息學分析

設計特異性引物，以麻風樹種子cDNA為模板，通過RT-PCR技術克隆出JcWRI1基因，隨后進行測序并通過美國國立生物技術信息中心（NCBI）網(wǎng)站的BlastP程序進行比對。比對結果表明，該基因開放閱讀框全長1 137 bp， 編碼378個氨基酸（GenBank登錄號：JCGZ_09727）。多序列比對結果表明，JcWRI1基因編碼的蛋白質含有2個保守的AP2/ERF結構域，且與擬南芥AtWRI1蛋白、水稻OsWRI1蛋白高度同源（圖1）。此外的研究結果表明，在擬南芥中，第1個AP2/ERF結構域中的VYL基序對于維持AtWRI1在調控植物發(fā)育方面的功能是至關重要的[13]。本研究結果表明，VYL基序也存在于JcWRI1蛋白序列中（圖1）。說明，VYL基序在WRI1蛋白中是高度保守的。

字母底色為深色表示保守氨基酸;字母底色為淺色表示不保守氨基酸;劃線部分表示AP2/ERF區(qū)域。

2.2JcWRI1基因的表達模式分析

對麻風樹不同組織及種子不同發(fā)育時期的轉錄組測序結果表明，JcWRI1基因在根、莖和葉中沒有檢測到表達，僅在種子中檢測到高表達。為了驗證轉錄組測序結果的可靠性，通過qRT-PCR技術檢測JcWRI1在麻風樹種子不同發(fā)育時期的胚、胚乳中的表達。結果表明，在麻風樹種子胚中沒有檢測到JcWRI1基因表達，僅在胚乳中檢測到JcWRI1基因的表達，且在授粉后35 d的胚乳中相對表達量最高（圖2）。說明，JcWRI1基因也許在麻風樹種子發(fā)育過程中起重要的調控作用。

2.3JcWRI1基因編碼蛋白質的亞細胞定位分析

為了明確JcWRI1蛋白的特性，通過RT-PCR克隆了JcWRI1開放閱讀框序列（不含終止子），測序后通過酶切連接的方法構建了JcWRI1-GFP融合表達載體。隨后通過PEG介導的擬南芥原生質體轉化的方法將空載體和JcWRI1-GFP融合表達載體分別轉化到擬南芥原生質體細胞中。于25 ℃過夜培養(yǎng)后，將擬南芥原生質體細胞置于熒光共聚焦顯微鏡下觀察定位情況。結果表明，空載體轉化的細胞中所有細胞器中都檢測到了綠色熒光信號，然而在JcWRI1-GFP融合表達載體轉化的細胞中，僅在細胞核中檢測到了綠色熒光信號（圖3）。本研究結果進一步表明，JcWRI1基因編碼1個核定位蛋白質。

2.4轉JcWRI1基因水稻的表型分析

為了研究JcWRI1基因的生物學功能，本研究構建了JcWRI1基因過表達的轉基因水稻植株，并選取3株轉基因水稻（OE1、OE2、OE3）用于后續(xù)功能研究。RT-PCR結果表明，JcWRI1基因在野生型水稻中沒有表達，然而在轉基因水稻中高表達。表型分析結果表明，過表達JcWRI1基因不影響轉基因水稻根、地上部分的生長發(fā)育。統(tǒng)計學分析結果表明，轉JcWRI1基因水稻根長、地上部分的高度與野生型植株相比沒有明顯差異（圖4）。為了分析提高JcWRI1表達量是否會影響轉基因水稻的生長發(fā)育情況，本研究進一步統(tǒng)計了成熟植株的高度，結果表明，野生型、轉基因水稻（OE1、OE2、OE3株系）的株高分別為89.52 cm、88.80 cm、88.62 cm和88.90 cm，進一步表明過表達JcWRI1基因不會影響轉基因水稻的生長發(fā)育。

a.轉JcWRI1基因水稻和野生型植株表型分析;b.轉JcWRI1基因水稻和野生型株高;c.JcWRI1基因在野生型和轉基因水稻中的表達;d.轉JcWRI1基因水稻和野生型根長。WT：野生型;OE1：轉JcWRI1基因水稻1號株系;OE2：轉JcWRI1基因水稻2號株系;OE3：轉JcWRI1基因水稻3號株系。

2.5轉JcWRI1基因水稻胚乳脂肪酸成分分析

為了明確提高JcWRI1基因表達量是否會影響轉基因水稻的脂肪酸成分，通過氣相色譜的方法分析了野生型、轉基因水稻胚乳的脂肪酸成分。由圖5可以看出，水稻胚乳中主要含有C14∶0、C16∶0、C16∶1、C18∶0、C18∶1、C18∶2、C18∶3、C20∶0和C20∶1，其中C16∶0、C18∶1和C18∶2為主要脂肪酸成分，三者占比約為90%。研究結果還顯示，與野生型植株相比，轉JcWRI1基因植株中C14∶0、C18∶0和C20∶0脂肪酸成分的含量顯著低于野生型，然而C16∶1和C18∶1在轉基因水稻中的含量顯著高于野生型。綜上所述，過表達JcWRI1改變了轉基因水稻胚乳中脂肪酸成分。

2.6轉JcWRI1基因水稻葉片脂肪酸成分分析

為了驗證過表達JcWRI1基因是否會影響轉基因水稻葉片脂肪酸組分，筆者進一步分析了野生型和轉JcWRI1基因水稻旗葉中脂肪酸組分。結果表明，C16∶0、C18∶2和C18∶3為水稻旗葉的主要脂肪酸成分，三者占所有組分的比例為89%;與野生型水稻相比，C16∶1在轉基因水稻中的含量顯著提高，然而C18∶0在轉基因水稻中的含量卻顯著低于野生型（圖6）。

2.7轉JcWRI1基因水稻葉片和胚乳中含油量分析

表達模式分析結果表明，JcWRI1基因主要在麻風樹胚乳中表達（圖2）。此外前人研究發(fā)現(xiàn)，麻風樹中的油主要積累在胚乳中，且含量高達50%。因此，為了驗證JcWRI1基因在麻風樹種子胚乳發(fā)育中的功能，首先檢測了轉JcWRI1基因植株種子的千粒質量。圖7b結果表明，與野生型水稻相比，轉基因水稻種子千粒質量沒有顯著差異。隨后，檢測了野生型水稻和轉JcWRI1基因水稻種子胚乳中的含油量、淀粉含量，結果表明，與野生型水稻相比，過表達JcWRI1基因顯著增加了轉基因水稻種子胚乳的含油量（圖7a），但是降低了轉基因水稻種子胚乳中淀粉含量（圖7c）。進一步檢測水稻葉片中含油量，結果表明，轉JcWRI1基因水稻葉片的含油量明顯高于野生型水稻（圖7d）。

2.8過表達JcWRI1基因改變脂肪酸合成相關基因的表達

為了闡明JcWRI1基因參與水稻胚乳含油量調控的分子機制，通過qRT-PCR技術進一步檢測了脂肪酸合成相關基因在野生型、轉基因水稻中的表達情況。結果表明，與野生水稻相比，脂肪酸合成相關基因（KASIII、PDH-E1 β、ENR1、PDH-E2、ACP和PDH-E1α）在轉 JcWRI1基因水稻中的相對表達量顯著高于在野生型（圖8）。表明過表達JcWRI1基因增加了轉基因水稻胚乳含油量的部分原因可能是因為上調了脂肪酸合成相關基因的表達量。

3結論與討論

AP2家族是一類至少包含1個保守AP2/ERF結構域的轉錄因子，該家族成員在植物生長發(fā)育及油脂合成中起重要的調控作用[14-15]。盡管一些物種的AP2轉錄因子已經(jīng)被克隆和進行功能分析，但是關于麻風樹AP2家族成員的生物學功能研究未見報道。在本研究中，克隆了油脂合成關鍵調控因子編碼基因WRI1在麻風樹中的同源基因，將其命名為JcWRI1，并分析了該基因的功能，結果表明，在水稻中過表達JcWRI1基因增加了轉基因植株葉片、胚乳中的含油量。

前人研究發(fā)現(xiàn)，在玉米中過表達ZmWRI1基因不影響轉基因植株葉片的發(fā)育[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)，異位表達JcWRI1基因對轉基因植物葉片發(fā)育也沒有明顯影響，且過表達JcWRI1增加了轉基因植株葉片的含油量。另外，在擬南芥中異位表達AtWRI1基因增加了轉基因擬南芥葉片的含油量，且WRI1突變體對葉片發(fā)育沒有影響[13]。以上結果表明，JcWRI1基因在調控葉片脂肪酸和三酰基甘油（TAG）合成中的功能是相對保守的。綜上所述，WRI1的異位表達可以用來作為提高植物營養(yǎng)器官含油量的有效路徑。與野生型相比，擬南芥WRI1突變體胚、胚乳中的含油量都明顯降低[5，16-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，提高JcWRI1基因的表達量增加了轉基因植株胚乳中的含油量。可見，WRI1在種子油脂合成中的功能也是相對保守的。

盡管轉JcWRI1基因水稻胚乳、葉片的含油量與野生型相比都顯著增加，但是胚乳、葉片中的脂肪酸組分差異很大。本研究結果表明，在轉基因水稻胚乳中，約30%的脂肪酸被用來合成C18∶1，然而C18∶3含量低于2%。形成鮮明對比的是，在葉片中，含量最高的脂肪酸組分是C18∶3（約為68%），然而C18∶1含量僅為2.8%。本研究為進一步研究麻風樹種子發(fā)育和作物高油品種的培育提供了新的基因資源和理論依據(jù)。

參考文獻：

[1]FEI W J， YANG S Q， HU J， et al. Research advances of WRINKLED1 （WRI1） in plants[J]. Functional Plant Biology， 2020， 47（3）：185-194.

[2]SHOCKEY J， REGMI A， COTTON K， et al. Identification of Arabidopsis GPAT9 （At5g60620） as an essential gene involved in triacylglycerol biosynthesis[J]. Plant Physiology， 2015， 170（1）：163-179.

[3]MISRA A， KHAN K， NIRANJAN A， et al. Heterologous expression of two GPATs from Jatropha curcas alters seed oil levels in transgenic Arabidopsis thaliana[J]. Plant Science， 2017， 263（2）：79-88.

[4]ZHENG P Z， ALLEN W B， ROESLER K， et al. A phenylalanine in DGAT is a key determinant of oil content and composition in maize[J]. Nature Genetics， 2008， 40（3）：367-372.

[5]FOCKS N， BENNING C. WRINKLED1： a novel， low-seed-oil mutant of Arabidopsis with a deficiency in the seed-specific regulation of carbohydrate metabolism[J]. Plant Physiology， 1998， 118（1）：91-101.

[6]BAUD S， WUILLME S， TO A， et al. Role of WRINKLED1 in the transcriptional regulation of glycolytic and fatty acid biosynthetic genes in Arabidopsis[J]. Plant Journal， 2009， 60（6）：933-947.

[7]SHEN B， ALLEN W B， ZHENG P Z， et al. Expression of ZmLEC1 and ZmWRI1 increases seed oil production in maize[J]. Plant Physiology， 2010， 153（3）： 980-987.

[8]GUO W， CHEN L M， CHEN H F， et al. Overexpression of GmWRI1b in soybean stably improves plant architecture and associated yield parameters， and increases total seed oil production under field conditions[J]. Plant Biotechnology Journal， 2020， 18（8）： 1639-1641.

[9]LIU J， WEI H， ZHAN G M， et al. Increasing seed mass and oil content in transgenic Arabidopsis by the overexpression of wri1-like gene from Brassica napus[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2010， 48（1）：9-15.

[10]EWUNIE G A， MORKEN J， LEKANG O I， et al. Factors affecting the potential of Jatropha curcas for sustainable biodiesel production： a critical review[J]. Renewable and Sustainable Energy Reviews， 2020，137（2）：1-18.

[11]AKHTER D， QIN R， NATH U K， et al. A rice gene， OsPL， encoding a MYB family transcription factor confers anthocyanin synthesis， heat stress response and hormonal signaling[J]. Gene， 2019， 699：62-72.

[12]WEI Q， LI J， ZHANG L， et al. Cloning and characterization of a β-ketoacyl-acyl carrier protein synthase Ⅱ from Jatropha curcas[J]. Journal of Plant Physiology， 2012， 169（8）：816-824.

[13]LI D L， HE Y J， LI S H， et al. Genome-wide characterization and expression analysis of AP2/ERF genes in eggplant （Solanum melongena L.）[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2021， 167（3）：492-503.

[14]MA W， KONG Q， VINCENT A， et al. WRINKLED1， A ubiquitous regulator in oil accumulating tissues from Arabidopsis embryos to oil palm mesocarp[J]. PLoS One， 2013， 8（7）：1-13.

[15]王玲，劉曉偉，江納，等.蔓花生AP2基因家族的生物信息學分析[J].江蘇農業(yè)科學，2020，48（14）：65-77.

[16]BAUD S， MENDOZA M S， TO A， et al. WRINKLED1 specifies the regulatory action of LEAFY COTYLEDON2 towards fatty acid metabolism during seed maturation in Arabidopsis[J]. Plant Journal， 2007， 50（5）：825-838.

[17]BATES P D， STYMNE S， OHLROGGE J. Biochemical pathways in seed oil synthesis[J]. Current Opinion in Plant Biology， 2013， 16（3）：358-364.

[18]BATES P D， FATIHI A， SNAPP A R， et al. Acyl editing and headgroup exchange are the major mechanisms that direct polyunsaturated fatty acid flux into triacylglycerols[J]. Plant Physiology， 2012， 160（3）：1530-1539.

[19]BATES P D， BROWSE J. The significance of different diacylgycerol synthesis pathways on plant oil composition and bioengineering[J]. Frontiers in Plant Science， 2012， 3：147.

（責任編輯：徐艷）

收稿日期：2021-11-05

基金項目：2020年度河南省自然科學基金青年項目（202300410520）;2020年度河南省高等學校重點科研項目（21A180028）;2021年度河南省周口師范學院大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（S202110478032）;周口師范學院大學生科研創(chuàng)新基金項目（ZKNUD2021073）

作者簡介：謝佳彤（2000-），女，河南信陽人，本科，主要從事麻風樹基因功能研究。（E-mail）2230439874@qq.com

通訊作者：唐躍輝，（E-mail）yhtang2005@163.com