副豬嗜血桿菌病的診治

孫嘉嚀 王志悅 王許剛 李獻華 徐明舉 徐彤*

（1，河北北方學院動物科技學院預防獸醫學重點實驗室 075000；2，河北省張家口市萬全區農業農村局 075000）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌引起的、主要對豬群生長發育帶來嚴重危害的細菌性傳染疾病，一年四季均可發生[1]。該病可導致豬場死淘率明顯提高，使生豬養殖產業的經濟效益下降。該病主要表現為發熱、精神沉郁、食欲減退、咳嗽、關節腫脹、跛行、步態僵硬和共濟失調。病豬和帶菌豬是該病的傳染源，由受污染的空氣經呼吸道、消化道和破損的皮膚傳播。當豬抵抗力下降或受到應激反應時，潛伏的細菌將在體內大量繁殖，導致該病發生。

1 發病情況

2020 年7 月某規模化養豬場保育豬陸續出現一種以被毛粗亂，體溫升高可達41℃，食欲減退、呼吸困難、腹式呼吸、共濟失調為特征的疫病。部分病豬走路緩慢，出現神經癥狀，雙側或單側肢體不平衡，關節腫脹；四肢和耳朵發紺，為藍紫色；臀部及腹下皮膚出現紫紅色斑塊。期間約70 多頭發病豬出現死亡，病死率約為80%。

2 臨床剖檢

病理剖檢以漿液性、纖維素性滲出為特征，喉管內有大量黏液；胸腔內有較多淡黃色或紅色積液，胸膜脂肪輕度黃染；肺臟水腫淤血，表面有大量出血斑點、部分區域呈現實變；肝臟變性出血；脾腫大、質地柔軟且邊緣增厚，有大小不等的梗死灶；心包積液、有纖維素滲出，呈現“絨毛心”；腎有出血點；膝關節、肘關節腫脹，有波動感，關節腔內有漿液性纖維蛋白滲出物。

3 實驗室診斷

3.1 豬瘟、圓環和繁殖與呼吸綜合征病毒實時定量PCR 檢測

為確定是否有豬瘟病毒、圓環病毒及繁殖與呼吸綜合征病毒感染，無菌采取6 頭病死豬的脾臟、肺臟、腎臟及淋巴結樣本共19 個，按照病毒DNA/RNA 提取與純化試劑盒說明書提取所需核酸。根據湖南國測生物科技有限公司生產的豬瘟病毒通用型實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒、繁殖與呼吸綜合征病毒通用型實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒、圓環病毒通用型實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒說明書進行檢測。

3.2 細菌檢測

3.2.1 細菌分離培養

從上述病料釣菌劃線接種于巧克力瓊脂培養基和含5%無菌胎牛血清及過濾除菌的1%煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的TSA 固體培養基，于37 ℃恒溫培養24h 后進行觀察。

3.2.2 染色鏡檢

挑取典型、單個菌落進行革蘭氏染色、鏡檢。

3.2.3 生化鑒定

挑單個菌落接種到過氧化酶、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、甘露醇、甘露糖、木糖、尿素、蛋白胨水生化反應試劑管中，37 ℃、24h 培養，觀察生化反應結果。

3.3 小鼠致病性試驗

將8 只SPF、C57B 小鼠隨機分為對照組和實驗組。用生理鹽水洗下含NAD 的TSA 瓊脂培養基上分離純化的細菌，將菌液稀釋成1.0×109CFU/ml，每只鼠0.2ml 的劑量注射到小鼠腹腔內，對照組采用相同劑量和途徑注射滅菌的生理鹽水，觀察臨床表現，統計死亡率。

3.4 藥敏試驗

挑取純化后的分離菌，用涂布棒均勻接種在含有NAD 的TSA 培養基平板上，采用藥敏片擴散法進行藥敏試驗。37 ℃、24h 后觀察結果。

4 結果

4.1 豬瘟、圓環和繁殖與呼吸綜合征病毒實時定量PCR 檢測結果

上述病料經實時定量PCR 檢測結果顯示，內參、陽性及陰性對照均符合標準，但檢測樣品中均未檢測到豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和圓環病毒核酸表達。熒光定量RT-PCR 特異擴增曲線及內參曲線結果如圖1、2、3 所示。

圖1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光定量RT-PCR 特異擴增曲線及內參曲線

4.2 細菌檢測結果

巧克力瓊脂培養基上生長出細小、灰色、針尖狀的小菌落，無溶血現象；在含有NAD 的TSA 固體培養基上生長出針尖大小、光滑、無色的圓形菌落。選取典型單個菌落革蘭氏染色鏡檢結果為菌體大小不等、雜亂分布、形態不一、無鞭毛無芽孢的短桿菌，出現少量球狀革蘭氏陰性菌。其生化特點為過氧化酶、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖呈陽性，甘露醇、甘露糖、木糖、尿素、蛋白胨水呈陰性。

實驗小鼠均在接種后逐漸表現為精神沉郁、行動緩慢、蜷縮在鼠籠一側，被毛粗亂，呼吸急促，感染小鼠在24h 內全部死亡并進行細菌分離鑒定，從小鼠臟器內分離得到與接種菌相同特征的革蘭氏陰性菌。對照組小鼠狀態良好、無異常表現。

藥敏試驗結果見附表。該分離菌對氨芐西林、頭孢噻肟、氨芐西林等高敏。

附表 藥敏試驗結果

5 治療與防控

經過臨床癥狀、病理剖檢及實驗室診斷確定導致該豬群死亡的原因為副豬嗜血桿菌感染所致。因此，建議及時將有臨床癥狀的病豬進行隔離，加強環境消毒。發病豬采取注射青霉素或頭孢噻肟混懸劑，并在飼料中用阿莫西林與環丙沙星進行治療，同時添加多種維生素和微量元素，提高豬群免疫力。為發病的其他豬群推薦使用阿莫西林和環丙沙星，阿莫西林及環丙沙星單獨飲水或拌料；或者將阿莫西林和環丙沙星拌料使用。經過5d 的治療，死亡逐步減少，得到有效控制。

鑒于該豬場從年初就陸續出現生長發育緩慢、氣喘及陸續出現死亡現象，結合剖檢變化初步懷疑可能是豬瘟或圓環病毒為主同時繼發呼吸道細菌感染。但經過查閱該場免疫程序及第三方抗體檢測結果顯示免疫合格率較高。經過現場豬場檢查發現，該場由于處于建設初期，部分場所尚未完成，因此，不同日齡豬群在同一豬舍分區飼養，跨度較大，通風不良導致舍內氨氣濃度較高，因此，環境因素可能是導致副豬嗜血桿菌感染的主要原因。建議治療的同時修繕通風設施，加強消毒，改善環境成為重中之重。

通過這個病例在養殖生豬中應注意以下幾點：（1）嚴格執行全進全出、自繁自養的原則，避免不同階段的豬只混養，保持合理的飼養密度[2]。（2）加強飼養環境管理，保持豬舍干燥衛生，及時清理糞便，做好消毒[3]，并做好通風，避免氨氣含量過高，以免刺激豬群呼吸道而誘發疾病。嚴格按照無害化處理程序處理病死豬，防止病原擴散污染。（3）由于大多數疾病往往會混合感染，因此，要制定科學合理的免疫程序，并定期進行疫病免疫排查工作，并在疫苗使用過程中添加增強免疫力的藥物。（4）減少仔豬斷奶、轉群時的應激，在飲水中添加適量抗應激藥物[4]。（5）在后續檢測過程中發現該豬群在用藥后病死情況得到有效控制，但在8 月份再次發生相同感染，因此，在加強管理的同時要進行副豬嗜血桿菌免疫，尤其是鑒于該場的飼養管理條件下尤為重要。鑒于副豬嗜血桿菌血清型較多，多采用自家滅活菌苗進行免疫預防。

圖2 豬瘟病毒熒光定量RT-PCR 特異擴增曲線及內參曲線

圖3 圓環病毒熒光定量RT-PCR 特異擴增曲線及內參曲線