規(guī)模豬場非洲豬瘟監(jiān)測凈化技術(shù)的研究與應(yīng)用

許崇友 韓勇

(1，山東省日照市東港區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心 276800；2，山東省日照市動物疫病預(yù)防控制中心 276800）

非洲豬瘟（African Swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus,ASFV）感染家豬和野豬引起的一種出血性病毒病[1]。ASFV 感染豬的臨診表現(xiàn)為呼吸障礙、皮膚及臟器廣泛出血等，對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，被納入世界動物衛(wèi)生組織(OIE) 通報性疾病名錄中[2]。非洲豬瘟于1921 年被肯尼亞首次報道，并在幾十年的時間里陸續(xù)傳播到葡萄牙、南美洲、高加索、俄羅斯等29 個國家，是一種被世界各國重視的疫病，也被世界動物衛(wèi)生組織規(guī)定需將疫病問題及時上報[3]。自2018年8 月中國發(fā)生第一例非洲豬瘟疫情以來，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

自2014 年以來，為推動我國豬凈化工作，提高動物疫病防控條件和管理水平，中國動物疫病預(yù)防控制中心印發(fā)了《規(guī)模化種豬場主要動物疫病凈化技術(shù)指南》，要求在全國范圍內(nèi)開展“規(guī)模化養(yǎng)殖場主要動物疫病凈化示范場”“規(guī)模化養(yǎng)殖場動物疫病凈化創(chuàng)建場”評估認(rèn)證工作。2021 年8 月，山東省畜牧獸醫(yī)局印發(fā)《山東省重點動物疫病監(jiān)測凈化工作方案（2021 版）》，要求開展非洲豬瘟等主要豬病監(jiān)測凈化工作，推動動物疫病防控從穩(wěn)定控制到凈化。

為做好規(guī)模場非洲豬瘟防控工作，課題組選取日照原種豬場、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等大型規(guī)模豬場，開展非洲豬瘟監(jiān)測凈化技術(shù)研究。本課題通過對非洲豬瘟采樣方法、檢測儀器和試劑、獸醫(yī)實驗室布局等進(jìn)行研究，探索適合日照市的非洲豬瘟規(guī)模場監(jiān)測凈化方法。本方法應(yīng)用于日照原種豬場、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等規(guī)模場非洲豬瘟凈化場的創(chuàng)建，成效顯著。

1 規(guī)模豬場非洲豬瘟監(jiān)測凈化技術(shù)研究

1.1 技術(shù)總路線

本研究建立了一套完整的規(guī)模豬場生物安全監(jiān)測凈化體系。主要技術(shù)路線是建設(shè)適合規(guī)模場的獸醫(yī)實驗室，建立相應(yīng)的實驗室質(zhì)量管理體系，篩選檢測設(shè)備和試劑，開展場外場內(nèi)采樣方法研究，通過實驗室檢測及時發(fā)現(xiàn)陽性進(jìn)行預(yù)警。

1.2 采樣方法

根據(jù)規(guī)模場風(fēng)險因素分析，建立采樣方案，將采樣對象分為場外采樣、場內(nèi)采樣。

1.2.1 場外采樣

分析規(guī)模場外風(fēng)險因素，確定需要監(jiān)測的對象，主要包括車輛、物資、食材、藥品、消毒站、無害化處理點、外部隔離點7 大類，對采樣內(nèi)容、數(shù)量、頻率和檢測要求進(jìn)行研究，建立規(guī)模場場外采樣方法（表1）。

表1 規(guī)模場場外采樣方法

1.2.2 場內(nèi)采樣

分析規(guī)模場內(nèi)風(fēng)險安全風(fēng)險因素，確定需要監(jiān)測采樣的對象，主要包括進(jìn)場人員、豬場區(qū)舍內(nèi)、飼料點、污水、水樣、場內(nèi)車、豬群6 大類，對采樣內(nèi)容、數(shù)量、頻率和檢測要求進(jìn)行研究，建立規(guī)模場場內(nèi)采樣方法（表2）。

表2 規(guī)模場場內(nèi)采樣方法

1.3 采樣處理

1.3.1 環(huán)境采樣

可在屋子四周的4 個點和中間采集，相同點位的樣品合樣為1 個。

1.3.2 飼料采樣

每天生產(chǎn)結(jié)束和裝料結(jié)束后，在混合機下料流管和散裝倉下料口內(nèi)壁，同一位置多個取樣點做好編號。

1.3.3 進(jìn)場車輛

輪胎、車體、車底、駕駛室、原料車廂內(nèi)部。采集外表車廂5 個位點、底盤3 個位點、輪胎2 個位點、駕駛室2 個位點，合為1 個樣檢測。

1.3.4 外來人員

在換衣間外采樣，員工在入場后更換工作服后采樣，采集面部皮膚、手部皮膚、頭發(fā)、衣物、鞋底，為1 個樣品。

1.3.5 物資采樣

去除外包裝，放入物資消毒間后，每批次物資隨機選取5個位點采樣，采樣放到離心管，為1 個樣品。

1.4 檢測儀器和試劑

針對日照市規(guī)模場實際，結(jié)合當(dāng)前非洲豬瘟病原學(xué)和血清檢測儀器，日照市動物疫病預(yù)防控制中心開展了屠宰場和部分規(guī)模豬場非洲豬瘟檢測能力比對試驗，對非洲豬瘟檢測儀器和試劑準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、特異性進(jìn)行研究，篩選出適合的檢測儀器和試劑（表3 和4）。

表3 非洲豬瘟檢測儀器

表4 非洲豬瘟檢測試劑

1.5 檢測方法

對豬全血、眼鼻拭子、肛拭子、扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、環(huán)境樣品等采用熒光實時PCR 方法檢測非洲豬瘟病原。抗體監(jiān)測檢測采用ELISA 方法。

1.6 規(guī)模場獸醫(yī)實驗室布局和工作質(zhì)量控制

非洲豬瘟分子生物學(xué)實驗室設(shè)置配液室、核酸提取室和熒光PCR 擴增區(qū)3 個功能室。另外，配置接樣室、樣品保存室、血清室、無害處理室等功能操作室，做好生物安全措施。

獸醫(yī)實驗室要建立《質(zhì)量手冊》 《生物安全管理手冊》《規(guī)章制度》 《程序文件》 等體系文件，參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》 規(guī)定的考核細(xì)則，購置實驗室設(shè)施設(shè)備，完善各類檔案建立。

2 應(yīng)用

自2018 年以來，日照市聯(lián)合區(qū)縣動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)聯(lián)合開展技術(shù)研究，并將技術(shù)在日照原種豬場、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等規(guī)模場應(yīng)用，較好的防控了非洲豬瘟等豬病，取得了顯著的成效。2020 年日照原種豬場通過省級“偽狂犬病、豬瘟和豬藍(lán)耳病凈化創(chuàng)建場”驗收，2021 年9 月，上述3 家企業(yè)已申報非洲豬瘟凈化創(chuàng)建場。

3 討論與分析

（1）抽樣方法的選擇對非洲豬瘟監(jiān)測非常重要。對豬群進(jìn)行抽樣，流行病學(xué)采樣方式是按照群內(nèi)陽性率，置信水平和試驗敏感性進(jìn)行抽樣。本研究按照每個單元5 頭進(jìn)行采樣，未按照流行病學(xué)采樣方式，不能最大限度地反映豬場非洲豬瘟感染情況。下一步要繼續(xù)完善抽樣方式、盡最大限度反應(yīng)豬群的健康狀況。

（2）非洲豬瘟防控是一個綜合、系統(tǒng)的生物安全體系，而日常監(jiān)測與監(jiān)控對生產(chǎn)具有關(guān)鍵性的指導(dǎo)作用，監(jiān)測是否準(zhǔn)確是非瘟防控的重點環(huán)節(jié)，但大規(guī)模、高頻率的采樣監(jiān)測增加了豬群應(yīng)激和感染風(fēng)險。因此，非洲豬瘟防控尤其要把握好豬場進(jìn)出口及周邊環(huán)境監(jiān)測，同時提升監(jiān)測技術(shù)的靈敏度和特異性。每個豬場需要根據(jù)自身疫病壓力和條件制定合理的監(jiān)測體系[4]。

（3）加強豬場生物安全綜合防控，單靠監(jiān)測來防控豬瘟有一定的困難。由于非洲豬瘟沒有特效疫苗和特效藥，切斷傳播途徑是防控非洲豬瘟的關(guān)鍵，因此，建立豬場生物安全體系尤為重要。非洲豬瘟防控的關(guān)鍵措施是要加強生物安全體系建設(shè)，加強飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行消毒，選擇敏感消毒藥，制定科學(xué)的消毒程序。對病豬進(jìn)行嚴(yán)格的隔離和淘汰，對死亡生豬做好無害化處理。

（4）推動動物疫病防控從穩(wěn)定控制到凈化。本課題研究了非洲豬瘟凈化技術(shù)，探索適合日照地區(qū)的凈化路線，以凈化創(chuàng)建場為抓手，以點帶面，以點促面，推進(jìn)非洲豬瘟凈化向無疫小區(qū)和無疫區(qū)發(fā)展。