黑木耳菌種培養基優化

王旭，胡志強，亢學平，杜忠偉，李健，王鑫

(延邊朝鮮族自治州農業科學院，吉林 延吉 133000)

黑木耳 [Auriculariaauricula-judae(Bull.) Quél.]，別名木耳、黑耳、細耳、木蛾，隸屬于真菌界真菌門異擔子菌綱木耳目木耳科木耳屬[1-2]。黑木耳味道鮮美、營養豐富，享有“素中之葷”、“菌中瑰寶”的美譽；《本草綱目》中記載木耳性平、味甘、補氣血、止血活血，有滋潤、潤肺、通便之功能，也是一種價值很高的藥用菌[3]。

近年來，食用菌已成為農業產業結構調整的主力軍，是脫貧攻堅的抓手，也是鄉村振興的推手[4]。由于黑木耳具有可食、可藥的特點，其市場需求量日益增長，黑木耳栽培規模不斷擴大。隨著食用菌栽培品種和栽培方式多元化發展，品牌發展與種質資源的不斷創新，以及設施化、集約化程度的提高，優質的“中國造”菌種和質量標準已成為限制企業、合作社以及菇農發展的首要因素[5-7]。為此，通過對黑木耳菌種培養基配方進行篩選、優化，為黑木耳菌種培養和種質資源保育[8-10]及深層發酵提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種為“延農科1號”，由延邊州農業科學院食用菌研究所提供。

1.2 供試培養基

配方1. PDA培養基(CK)：馬鈴薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1000 mL，pH自然。

配方2. CPDA培養基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂0.5 g，維生素B110 mL，水1000 mL，pH自然。

配方3. 黃豆粉、麥麩培養基：黃豆粉5 g(用浸出液)，麥麩10 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方4. 木屑浸出液培養基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，闊葉樹木屑50 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方5. 黑木耳菌絲培養基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，黑木耳廢菌包(配方：78%木屑，20%豆粕，1%石灰，1%石膏，用浸出液)50 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1000 mL，pH自然。

1.3 試驗方法

使用 PDA 培養基對供試菌種進行活化培養。分別以PDA、CPDA、黃豆粉、麥麩浸、木屑、黑木耳菌絲為試驗材料，開水煮30 min，紗布過濾，留其浸出液備用。

1.3.1 固體菌種培養方法。固體培養基按上述配方加入瓊脂20 g，煮至瓊脂溶化。分別將供試培養置于三角瓶中，121 ℃高壓滅菌30 min。將不同試驗培養基分別倒入培養皿(0～9 cm)中，每個培養皿裝 15 mL，冷卻后接種(接種塊大小 0～0.7 cm)，置于恒溫培養箱中暗光培養10天，每組 5 個重復。

1.3.2 液體菌種培養方法。液體菌種培養基制作時，按上述配方制做供試培養基，250 mL三角瓶中灌裝150 mL培養基，121 ℃高壓滅菌30 min。冷卻后接種5塊接種快(接種塊大小 0～0.2 cm)，置于 25 ℃搖床中培養7天，每組5個重復。

1.3.3 測量、分析方法。固體培養自接種24 h后，間隔24 h觀察、記錄菌絲長勢、菌落顏色及菌落邊緣整齊度，利用游標卡尺十字交叉法測量，并記錄菌落的生長直徑；液體培養自接種24 h后，間隔24 h觀察、記錄培養液顏色、菌落顏色、菌絲球均勻度，測定不同培養基配方黑木耳液體培養基菌絲體生物量。將培養好的菌絲體用蒸餾水洗滌、沉淀3次，真空抽濾，收集菌絲體，置于85 ℃烘箱中干燥，至恒重用電子天平稱重,記錄分析。相關數據采用 Excel 2007、SPSS進行數據處理和統計分析。

2 結果與分析

2.1 固體培養基對黑木耳菌絲生長的影響

固體培養基對黑木耳菌絲生長情況的影響見表 1。由表1可知，黑木耳菌絲對供試培養基有較好的適應性，菌落邊緣整齊、潔白；黑木耳菌絲對黑木耳廢菌包及黃豆粉、麥麩浸出液培養基的長勢較快，且稠密、粗壯，木屑浸出物和CPDA次之(較密)，均高于對照；且黑木耳菌絲生長速度結果與菌絲長勢結果相似。綜合對比，配方4和配方5，黑木耳菌絲生長優于其它。

表1 固體培養基對黑木耳菌絲生長的影響

2.2 液體培養基對黑木耳菌絲生長的影響

液體培養基對黑木耳菌絲生長情況的影響見表 2。由表可知，黑木耳菌絲體在不同培養基質中略有差別，配方1、2、5菌絲培養液顏色澄清，菌絲球顏色潔白，配方3、4略有渾濁，配方4菌絲球顏色淺黃，配方3菌絲球顏色潔白，各培養基菌絲球均勻；黑木耳菌絲體對黑木耳廢菌包及黃豆粉、麥麩浸出液培養基的菌絲體生物量高于其它對照。結果表明，配方3和配方5綜合表現良好，黑木耳液體菌絲生物量和菌絲球均勻度及顏色略好于其它配方。

表2 液體培養基對黑木耳菌絲生長的影響

3 結論與討論

黑木耳菌種的固體和液體培養過程中，不同配方對黑木耳菌絲及菌絲體的生長略有不同。試驗結果表明，配方3和配方5黑木耳菌絲綜合長勢更好，為黑木耳菌種培養的最佳培養基。

黑木耳廢棄菌包仍具有充分營養物質，供黑木耳菌絲利用；黃豆粉、麥麩浸出液為黑木耳菌絲生長提供充足的營養物質。供試菌種的菌絲對黃豆粉、麥麩、木屑等物質的吸收效果較好，黑木耳廢菌包和黃豆粉、麥麩浸出液對黑木耳菌種培養效果最佳。同時，其它配方下黑木耳菌絲長勢略有差別，但也是值得參照的黑木耳菌種培養的配方。

通過對比實驗表明，培養條件和培養物質也是黑木耳菌種制作與培養的重要因素，研究不同接種量、溫度、濕度、pH對黑木耳菌種培養的共同作用，對黑木耳的種質資源保育提供參考，也是今后研究“中國造”優質菌種和質量標準及深層發酵等相關工作的重點和方向。