奶牛隱性乳房炎診斷方法的研究進展

李桂偉

摘要：奶牛隱性乳房炎是奶牛中的常見疾病之一，對奶牛健康生產(chǎn)危害很大。文章對奶牛隱性乳房炎的診斷方法進行了總結(jié)，對乳汁體細胞診斷方法、酶學診斷方法和血清學炎性蛋白指標診斷方法等3種常見的診斷方法進行了詳細的分析，可使各奶牛養(yǎng)殖場根據(jù)實際情況選擇相應(yīng)的檢測方法，更好地控制奶牛群中隱性乳房炎的發(fā)生，減少經(jīng)濟損失。

關(guān)鍵詞：奶牛;隱性乳房炎;診斷方法

中圖分類號：S857.2+6文獻標志碼：A

乳房炎是造成奶牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟損失最為嚴重的疾病之一。奶牛發(fā)生乳房炎后不僅其產(chǎn)奶量、乳汁品質(zhì)均有不同程度的下降，治療費用增加，而且炎性乳汁還危害著公共衛(wèi)生和消費者的健康，重癥乳房炎患牛因產(chǎn)乳量的明顯減少甚至失去泌乳能力而被淘汰，因此，做好奶牛乳房炎精確診斷與早期預警對乳房炎防控具有重要意義。長期以來，一些學者一直致力于奶牛乳房炎的診斷研究，一些新的診斷方法不斷涌現(xiàn)，文章綜合了近年來有關(guān)奶牛乳房炎診斷的研究成果，為奶牛乳房炎診斷提供參考。

1 乳汁體細胞診斷方法

乳腺內(nèi)體細胞（somatic cell，SCC）為免疫細胞及其它細胞的統(tǒng)稱。健康奶牛乳汁中的體細胞數(shù)較少，主要由巨噬細胞（macrophage cell）、淋巴細胞（lymphocyte）、嗜中性白細胞（Neutrophil，PMN）和乳腺上皮細胞等組成，其中，巨噬細胞約占60%～88%，主要起保護功能并發(fā)起炎性反應(yīng)，淋巴細胞約占10%～30%，中性白細胞約占1%～15%，上皮細胞約小于7%。當奶牛發(fā)生乳腺感染時，炎癥因素能夠?qū)е氯橹械捏w細胞數(shù)急劇增多，而且乳汁內(nèi)的體細胞種類及其數(shù)量發(fā)生很大的變化[1]，其中中性粒細胞占絕大多數(shù)，占95%～99%。由于乳腺炎病原、病癥，以及感染階段的不同，乳汁中體細胞種類與數(shù)量也存在著明顯的差異，其中，尤為嗜中性白細胞、淋巴細胞和巨噬細胞的變化明顯[2，3]。一般情況下，乳汁中巨噬細胞的增多預示乳房發(fā)生慢性炎癥、非化膿性炎癥;淋巴細胞的增多預示為慢性炎癥或發(fā)生病毒性感染;嗜中性白細胞增多則預示為急性炎癥及炎癥早期[4，5]。

奶牛乳汁體細胞數(shù)能相對準確地反映乳腺炎癥的嚴重程度，并被廣泛作為奶牛乳腺炎的診斷指標。IDF推薦使用體細胞檢測和細菌學檢測作為判定奶牛乳房炎的方法。隨著DHI技術(shù)在國內(nèi)牧場的逐漸普及，體細胞數(shù)的快速檢測在奶牛乳房炎診斷，特別是隱性乳房炎診斷中發(fā)揮了重要作用。在十二烷基磺酸鈉（C12H25SO3Na）等陰離子表面活性劑和堿性物質(zhì)的作用下，脂類物質(zhì)乳化，乳中體細胞的細胞膜被破壞，并釋放出細胞DNA，DNA與其作用使乳汁產(chǎn)生沉淀或形成凝膠狀。根據(jù)沉淀或凝膠的多少，能夠間接判定體細胞數(shù)的數(shù)量[1]，從而診斷乳房的感染嚴重程度。根據(jù)此原理相繼建立了顯微鏡直接計數(shù)法、體細胞儀計數(shù)法、熒光電子細胞計數(shù)法、粒子計數(shù)法、白細胞分類計數(shù)法等直接計數(shù)檢驗法，以及加利福尼亞乳房炎試驗、苛性鈉凝乳試驗法、過氧化物酶試驗等體細胞間接檢驗法，并用于隱性乳房炎的診斷。

隨著研究深入，一些新的診斷方法相繼出現(xiàn)。體細胞分型指數(shù)（DSCC）是指淋巴細胞與嗜中性粒細胞總數(shù)占體細胞數(shù)的比例，安朋朋等[5]研究了DSCC的變化規(guī)律，以及乳房炎致病菌對DSCC的影響，結(jié)果表明：體細胞評分與DSCC存在極顯著相關(guān)性，且隨著體細胞評分值的升高，DSCC波動范圍逐漸減小;頭胎牛、四胎以上奶牛的DSCC值顯著高于二至三胎牛;細菌感染陽性樣品DSCC（77.21%）極顯著高于陰性樣品（69.33%），但傳染性致病菌感染與環(huán)境性致病菌感染的樣品間DSCC無顯著差異。由此表明，DSCC對于診斷乳房炎具有一定價值。

2 酶學診斷方法

在奶牛乳腺發(fā)生病原性感染后，致病病原會引起乳腺組織發(fā)生一系列的炎性變化，并動員大量免疫細胞至乳腺組織內(nèi)，其中90%為嗜中性多形核白細胞，大量嗜中性多形核白細胞進入炎性乳腺，并吞噬入侵的病原，致使體細胞數(shù)持續(xù)升高。奶牛發(fā)生乳房炎時，乳腺內(nèi)的炎性細胞釋放的炎性成分將造成乳腺微血管的通透性增加，破壞血乳屏障，血液中的體細胞、溶酶體酶和急性期蛋白等成分滲入至牛乳中，并導致N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）等一些酶的生物活性升高。NAG存在于乳腺組織和白細胞中，當乳腺細胞受到損傷或白細胞數(shù)升高時，NAG活性會顯著升高[6]，因此，NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)生密切相關(guān)，其活性能夠反應(yīng)乳腺是否存在感染的風險。NAG能夠預示分泌型細胞的狀態(tài)及乳腺炎發(fā)病程度，目前，已有商業(yè)化的NAG測定試劑盒，并用于隱性乳房炎的診斷中[7-9]。

髓過氧化物酶（myeloperoxidasedeficiency，MPO）是氧依賴性殺菌系統(tǒng)的重要組成部分。堿性磷酸酶（AKP）是機體防御感染的因子之一[10]。劉小倩等[6]在研究長期飼喂高精料可否致奶牛發(fā)生內(nèi)源性乳房炎的試驗中，應(yīng)用ELISA試劑盒測定了乳及乳腺組織中NAG、AKP、MPO、NAG及LPS炎性指標，試驗表明，牛乳中NAG、AKP活性顯著上升，LPS含量極顯著升高，其它指標差異不顯著，結(jié)果說明NAG、LPS和AKP可作為隱性乳房炎的診斷指標。印度學者建立了一種斑點試驗，根據(jù)奶樣中胰蛋白酶抑制劑的檢測結(jié)果診斷隱性乳房炎，該方法敏感性和特異性分別為88.2%和89.8%。Ball等通過檢測N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶檢測隱性乳房炎;黃權(quán)利等認為乳房炎乳的LDH、ACP、GOT和GPT活性均增加。葛影影等[11]也證實，奶牛血清ALB水平及NAG活性的顯著變化與乳房炎的感染和發(fā)生關(guān)系密切，故這些指標可作為診斷奶牛乳房炎和乳腺組織損傷程度的血清學敏感指標。

髓過氧化物酶是PMN、單核細胞、巨噬細胞釋放的嗜天青顆粒的主要成分，已經(jīng)證實，MPO可作為乳房炎的診斷指標。瑞典學者制備了奶牛MPO單克隆抗體，建立了針對牛乳MPO的MPO-ELISA方法。牛國慶等[12]選取隱性乳房炎牛，進行奶樣MPO測定試驗。結(jié)果奶樣中SCC和MPO濃度的相關(guān)系數(shù)值為0.257，隨著SCC增高，MPO水平也增高，兩者具有正相關(guān)性。MPO與CMT的相關(guān)系數(shù)為0.546，相關(guān)顯著。結(jié)果表明，奶液中MPO可作為隱性乳房炎指示物，利用ELISA方法檢測奶樣中MPO的方法快速、簡便，可對奶牛隱性乳房炎作出早期診斷。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C

3 血清學炎性蛋白指標診斷方法

炎癥會激發(fā)動物機體產(chǎn)生急性炎性反應(yīng)。在炎癥過程中急性期蛋白含量將顯著升高。奶牛發(fā)生隱性乳腺炎后，結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）、α1-酸性糖蛋白（α1-accelerated graphics port，AGP）、淀粉樣蛋白 A（serum amyloid A protein，SAA）等會隨著炎癥的發(fā)展而增加，且C-反應(yīng)蛋白（C-creative protein，CRP）也與SCC具有一定相關(guān)性。在急性炎癥反應(yīng)期，動物在肝臟中血合成清淀粉樣A蛋白、結(jié)合珠蛋白（Hp）等急性期蛋白抵御感染。Eckersall等報道，急性反應(yīng)期最顯著的特征是肝臟中合成急性期蛋白水平升高，其中SAA、Hp是目前認為最敏感的指標。

結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp），又稱觸珠蛋白，是一種酸性糖蛋白。健康牛血清Hp濃度低于20mg/L，乳房炎牛2d內(nèi)升至2 g/L。Hp還可作為子宮炎、腸炎、肺炎等指征。血清淀粉樣蛋白A（Serum amyloid，SAA）在急性炎癥刺激下，血清SAA1、SAA2水平在5hrs～6hrs升高約1000倍。α1-酸性糖蛋白（α1-Acid，glycoprotein，α1-AGP），又稱類黏蛋白，蔣磊[13]選取健康奶牛和不同發(fā)病程度隱性乳房炎患牛，采用α1-酸性糖蛋白ELISA試劑盒測定各組乳清樣品中α1-酸性糖蛋白的含量，結(jié)果顯示，隱性乳房炎組奶牛乳清中α1-酸性糖蛋白的含量顯著或極顯著高于健康組奶牛，且隨著奶牛隱性乳房炎病情的加重及乳中體細胞數(shù)的增加，乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈現(xiàn)出遞增趨勢。研究證實，乳腺炎癥引發(fā)的乳腺損傷及乳中體細胞數(shù)增加與乳清中α1-酸性糖蛋白的含量呈正相關(guān)性。研究證實，乳房炎期間乳清中轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白含量升高，而α乳清蛋白和β乳球蛋白含量降低。程郁昕等研究表明，奶牛血清中α乳蛋白與體細胞計數(shù)相關(guān)性為0.60，血清中乳蛋白可作為乳房炎診斷依據(jù)。奶牛血清或乳汁中結(jié)合珠蛋白、血清淀粉樣蛋白和α-酸性糖蛋白等在乳房炎診斷中具有重要價值[14]。

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Research progress on diagnostic methods of recessive mastitis in dairy cows

LI Guiwei

（Animal Husbandry and Veterinary Branch， Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences， Qiqihar 161005， Heilongjiang China）

Abstract：Recessive mastitis is one of the common diseases in dairy cows， which is very harmful to the healthy production of dairy cows. Articles on recessive mastitis cows diagnostic methods are summarized， the milk somatic cell diagnostics， enzymology diagnosis method and serological inflammatory protein diagnostic methods of three common methods of indicators has carried on the detailed analysis， can make each cow farms according to actual situation to choose the corresponding detection methods， better control the occurrence of recessive mastitis in dairy herd， reduce economic loss.

Keywords：dairy cow; Latent mastitis; Diagnostic methods第41卷第2期2022年4月 黑龍江水產(chǎn)Northern Chinese Fisheries研究報告The research report

作者簡介：李桂偉（1979.3-），女，黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)分院助理研究員。研究方向：預防獸醫(yī)學。郵箱：lgwzll123@163.com。40766C9D-955F-457E-A670-A79A9F94D75C