HMGB1 在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

時紅萍，劉洪敬，葛欣，黃姝，陳友山，時黎明

1.菏澤市立醫院腫瘤科，山東菏澤 274000；2.菏澤市立醫院檢驗科，山東菏澤 274000

非小細胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要類型，由于早期缺少典型的癥狀表現， 部分患者僅表現為咳嗽、胸部悶痛、低熱等癥狀，所以約75%的患者確診時已步入疾病的中晚期，生存時間較短[1-2]。 因此，盡早診斷與積極治療NSCLS 對于改善患者的預后具有至關重要的作用。 高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是存在于真核生物細胞中的非組蛋白染色體結合蛋白，可以增強腫瘤抗原與樹突狀細胞的傳遞，促進腫瘤新生血管形成，減慢腫瘤細胞的凋亡速度[3]。一些研究發現，HMGB1 與腫瘤發生、發展及細胞浸潤、轉移密切相關[4-5]。 該研究通過回顧性分析2020年1月—2021年1月期間菏澤市立醫院97 例NSCLC 患者的臨床資料，探討HMGB1 在NSCLC 患者中的表達與臨床意義， 旨在為該病的診療方案提供可靠的參考與借鑒。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析菏澤市立醫院97 例NSCLC 患者的臨床資料，其中男58 例，女39 例；年齡42～79 歲，平均（60.54±7.52）歲；腫瘤直徑0.5～6.8 cm，平均（3.20±1.52）cm；組織學類型為鱗癌52 例，腺癌45 例；分化程度為低分化32 例，中分化35 例，高分化30 例；原發腫瘤局部-淋巴結-遠處轉移（TNM） 分期為Ⅰ期20 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期39 例，Ⅳ期11 例；有淋巴結轉移52 例，有血管浸潤53 例。納入標準：符合《中華醫學會肺癌臨床診療指南(2019 版)》[6]中對于NSCLC的診斷標準，且經病理檢查證實；肺癌術中切除的肺癌組織與癌旁組織完整；首次診斷為NSCLC；預計生存期>3 個月。 排除標準：有放化療治療史；合并其他惡性腫瘤； 嚴重心腦血管疾病與其他器官功能性障礙；免疫系統與血液系統疾??；患有急性或慢性感染性疾??；資料不全。 此外，所有患者或其家屬對該次研究知情同意； 該次研究方案取得菏澤市立醫院倫理委員會的批準。

1.2 方法

選取患者術中切除的肺癌組織與癌旁組織，采用免疫組化法檢測HMGB1 的表達情況， 具體方法如下：①免疫組化。通過福爾馬林對患者的腫瘤組織進行固定，以梯度乙醇脫水，并在石蠟中包埋，蠟處理后形成連續切片。 選取切片，烘烤60 min 后由二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟，用100%、95%、80%、70%梯度酒精水化，再經自來沖洗5 min，上述操作重復2 次。滴加3%醫用雙氧水，避光孵育10 min，由磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3 次，30 min/次。 在枸櫞酸鈉緩沖液中浸泡， 以高壓鍋給予抗原熱修復。 封閉在山羊血清中15 min。 通過濾紙將血清吸除， 滴加已稀釋完的一抗，在4℃環境中過夜，室溫下放置60 min，經PBS沖洗操作2 次，5 min/次，加入生物素化二抗，環境溫度37℃，反應20 min，經PBS 沖洗操作2 次，5 min/次，滴加辣根酶標記生物素試劑+鏈霉卵白素，在環境溫度37℃下靜置20 min，PBS 沖洗操作2 次，5 min/次。 二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木素溶液復染，時間為10 min， 予以酒精分化處理。 用80%、95%、100%、100%梯度酒精脫水，經二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明處理，適量加入中性樹膠，封片晾干。②評價結果。由兩名病理學專家進行結果評價， 以隨機方式在每個切片中選取8 個視野，400 倍高倍鏡下觀察，HMGB1通常在腫瘤細胞中著色為褐色細顆粒。 陽性細胞表達率[7]≥30%為陽性，<30%為陰性。

1.3 觀察指標

①比較NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達情況與陽性率； ②分析NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征 （性別、年齡、腫瘤直徑、組織學類型、分化程度、TNM 分期、淋巴結轉移情況、血管浸潤）的關系；③針對NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征進行Logistic 回歸分析。

1.4 統計方法

采用SPSS 23.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料采用[n(%)]表示，組間比較進行χ2檢驗，影響因素進行多因素Logistic 回歸分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1表達情況對比

NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽性率高于癌旁組織陽性率，差異有統計學意義（P＜0.001），見表1。

表1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達情況對比[n（%）]

2.2 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達情況

HMGB1 主要在NSCLC 患者細胞的胞核與胞質中表達，呈淡黃色或褐色，少量表達于癌旁細胞中，見圖1。

圖1 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達

2.3 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征關系

該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移患者的HMGB1 陽性率顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。 不同性別、年齡、腫瘤直徑、組織學類型與血管浸潤患者的HMGB1 陽性率對比差異無統計學意義 （P＞0.05），見表2。

表2 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征的關系[n（%）]

2.4 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征Logistic 回歸分析

經多因素Logistic 回歸分析發現，分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結轉移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05），見表3。

表3 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征Logistic 回歸分析

3 討論

NSCLC 是肺癌的主要類型，約占所有肺癌患者的80%，包括大細胞癌、腺癌、鱗癌，其癌細胞較小細胞癌生長分裂更為緩慢[8-9]。 然而，早期NSCLC 缺少典型性，往往在出現浸潤、局部生長，壓迫組織引起特異性癥狀后才被發現， 此時多數患者已步入中晚期，失去了最佳治療機會[10]。 目前，生物學技術發展迅速，腫瘤分子標志物對于NSCLC 的診斷價值也得到了臨床的廣泛關注[11]。 探尋一種與NSCLC 相關的分子標志物，及時且準確診斷患者的病情，對于改善預后具有重要的意義。

HMGB1 是在哺乳動物細胞中廣泛分布的高度保守核蛋白， 同時也是高遷移率族蛋白家族中的重要成員，當細胞核中HMGB1 結合于DNA 后可以參與DNA 的修飾與轉錄， 而由單核-巨噬細胞、 粒細胞、 淋巴細胞等免疫細胞形成的HMGB1 能夠參與炎癥反應[12]。 有研究發現，HMGB1 結合于特異性細胞膜受體后利于腫瘤細胞的浸潤、增殖與轉移[13]。 目前，臨床已發現HMGB1 在甲狀腺癌、結腸癌與前列腺癌組織中呈過表達現象[14]。 馮為[15]對90 例肺癌患者應用免疫組化HMGB1 檢測， 發現肺癌組織HMGB1 陽性表達率63.33%顯著高于癌旁組織的30.00%（P＜0.05）。該文研究結果與上述結果相近，該組NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽性率（81.44%）高于癌旁組織陽性率 （25.77%）（P＜0.001）。 同時，HMGB1 主要在NSCLC 患者細胞的胞核與胞質中表達，呈淡黃色或褐色，少量表達于癌旁細胞中。結果說明，HMGB1 在NSCLC 患者肺癌組織中呈高表達狀態，究其原因可能與NSCLC 細胞轉移與進展時血管生長迅速， 而在血管生長期間能夠與正常細胞產生營養競爭，正常細胞因缺少營養物質而死亡，細胞死亡后被動分泌出HMGB1 有關，繼而導致肺癌組織內HMGB1 明顯升高，而癌旁細胞中呈少量表達[16]?？惾锏萚17]對確診的81 例NSCLC 患者進行HMGB1檢測發現，TNM 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移患者中HMGB1 陽性率93.18%、89.80%高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者的64.86%、31.25%。 該文研究發現，該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移患者的HMGB1 陽性率為93.75%、94.00%、96.15%，顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、 無淋巴結轉移患者的75.38%、68.09%、64.44%（P＜0.05）。 同時， 經多因素Logistic 回歸分析發現， 分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結轉移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05）。結果說明，HMGB1 與NSCLC 患者的病理特征及預后具有密切的相關性， 即患者病情越重，HMGB1 陽性率越高， 究其原因可能為HMGB1 可以提高組織纖溶原激活物活性，增強腫瘤細胞的侵襲能力，同時HMGB1 結合于相關配體糖基化終產物受體后進一步增強了細胞外基質降解作用， 繼而促進腫瘤發生轉移[18]。

綜上所述，HMGB1 在NSCLC 中呈高表達，在肺癌組織中的陽性表達與分化程度、TNM 分期、 淋巴結轉移情況有關，對于NSCLC 診斷與預后具有一定的指導意義。