系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人外周血B細(xì)胞中CD72的表達(dá)及臨床意義

劉亞，賈超，范秋玉，萬琦兵，楊薇，楊惠琴

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是常見的風(fēng)濕病，其主要致病機(jī)制為自身免疫系統(tǒng)功能紊亂，以免疫性炎癥反應(yīng)為主要表現(xiàn)，從而引起消化道、腎臟及心血管系統(tǒng)的損傷［1］。最新的流行病學(xué)調(diào)查顯示全球的風(fēng)濕病病人已超過了3.55 億人，而SLE 的發(fā)病率則為750/10 萬，所有年齡段皆可發(fā)病，女性群體為常見發(fā)病人群［2］。目前研究顯遺傳、化學(xué)因素、心理壓力等均可誘發(fā)此病。此外，隨著環(huán)境的變化及工業(yè)化的進(jìn)程及可見的靜態(tài)生活方式，導(dǎo)致了系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重影響了病人的生活質(zhì)量，同時(shí)增加了病人及社會的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［3］。足見其是影響公共健康的主要疾病種類。目前SLE尚無徹底治愈的醫(yī)療方法，臨床主要以控制為主，且隨著醫(yī)療水平的快速進(jìn)展，各種規(guī)范化的治療指南在一定程度控制了此類病人的急性發(fā)作癥狀，大大降低了死亡率，病人的長期生存率大大提高［4-6］?？v然如此，SLE依然存在反復(fù)發(fā)作，僅僅依靠的病人的癥狀評分而缺乏準(zhǔn)確的客觀指標(biāo)，而時(shí)下的血液學(xué)檢測僅僅作為輔助診斷之能［7］。既往的研究已證實(shí)B 淋巴細(xì)胞參與了SLE的發(fā)生發(fā)展，而CD72淋巴B細(xì)胞則被證實(shí)了通過其下游的JNK 參與了這一病理生理過程［8-9］。因此，監(jiān)控上述兩因素可有效且準(zhǔn)確評估病人的病情?；诖?，本研究從SLE外周血CD72淋巴B 細(xì)胞及JNK 的表達(dá)，從而為完善SLE 的診療提供良好的研究靶向。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016 年1 月至2017 年12 月武漢市第一醫(yī)院收治的SLE 病人48 例為觀察組，根據(jù)選取年齡、性別相匹配于武漢市第一醫(yī)院健康體檢的正常人48 例為健康對照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合2017 年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）/美國風(fēng)濕病學(xué)（ACR）共同推出的SLE 診斷新標(biāo)準(zhǔn)以及2010 年中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會制定的《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診治指南》中病情輕重程度評估標(biāo)準(zhǔn)者［10］；（2）年齡范圍為18～70 歲；（3）SLE 第一次發(fā)現(xiàn)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他自身免疫系統(tǒng)疾病者；（2）合并腫瘤；（3）其它重大器官功能損傷者；（4）存在家族史者。兩組均對此研究知情同意并簽署同意書，本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)通過（W202008-3）。

1.2 方法

1.2.1 研究對象外周血的抽取獲取兩組研究對象空腹時(shí)晨外周靜脈血6～8 mL，置抗凝管中，然后放入離心機(jī)，以3 000 r/min 的速度離心，離心10 min，分離上清液，然后將上清液置入EP 管中放入-80 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 外周血B 淋巴細(xì)胞CD72 測定首先用淋巴細(xì)胞分離液分離出部分外周細(xì)胞團(tuán)，調(diào)整上機(jī)濃度為每毫升105 個(gè)。采用CD19 抗體標(biāo)記淋巴B 細(xì)胞（IR354，Abcam 公司，美國），CD72 抗體（IR473，Abcam公司，美國）獲取目標(biāo)淋巴數(shù)量。

1.2.3 外周血JNK 含量測定應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（酶聯(lián)免疫分析儀：Infinite F50，帝肯公司，瑞士；試劑盒，Santa公司美國）檢測P-JNK的血清含量，具體操作方法按照試劑盒的方法操作。

1.2.4 SLE 疾病活動指數(shù)評分（SLEDAI-2000） 主要從神經(jīng)系統(tǒng)（癲癇、精神癥狀、器質(zhì)性改變、視覺

受損、顱神經(jīng)異常、狼瘡性頭痛、腦血管意外，各8分）、脈管炎（8 分）、關(guān)節(jié)炎、泌尿系統(tǒng)（管型尿、血尿、蛋白尿、膿尿，各4 分）、皮膚表現(xiàn)（新出現(xiàn)皮疹、脫發(fā)、黏膜潰瘍，各2 分）、胸膜炎以及感染指標(biāo)（發(fā)熱、血小板降低以及白細(xì)胞減少，各1 分），統(tǒng)計(jì)總分，≤4 分為無活動；5～9 分之間為輕度活動；10～14分之間為重度活動，≥15分為重度活動。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件對其進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用±s表示，采用獨(dú)立t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較；計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，采取Pearson相關(guān)分析評價(jià)SLE疾病活動指數(shù)評分及JNK之間的相關(guān)性。同時(shí)采用以α=0.05 為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較本研究結(jié)果顯示，兩組在年齡、性別、高血壓、糖尿病等方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡組及健康對照組一般資料比較

2.2 兩組外周血B 淋巴細(xì)胞、CD72 陽性率及PJNK 含量比較觀察組外周血B 淋巴細(xì)胞及P-JNK含量明顯高于健康對照組，而CD72 陽性率低于健康對照組（P=0.000）。見表2。

表2 系統(tǒng)性紅斑狼瘡組及健康對照組外周血B淋巴細(xì)胞及CD72陽性率比較/±s

表2 系統(tǒng)性紅斑狼瘡組及健康對照組外周血B淋巴細(xì)胞及CD72陽性率比較/±s

組別健康對照組觀察組t值P值例數(shù)48 48外周血B淋巴細(xì)胞/個(gè)277±65 781±134 3.27 0.000 CD72陽性率/%69.5±10.7 58.7±9.9 30.22 0.000 P-JNK/（ng/L）18.25±2.67 22.67±3.01 14.50 0.000

2.3 觀察組SLE 疾病活動指數(shù)評分及P-JNK 含量與CD72 淋巴細(xì)胞陽性率的相關(guān)性分析觀察組SLE 疾病活動指數(shù)評分為（19.68±3.68）分，SLE 疾病活動指數(shù)評分與CD72 陽性率存在負(fù)相關(guān)，同時(shí)血清P-JNK與CD72陽性率也存在負(fù)相關(guān)。見表3。

表3 觀察組SLE疾病活動指數(shù)評分及P-JNK含量與CD72陽性率相關(guān)性分析

3 討論

SLE 是風(fēng)濕疾病中影響機(jī)體系統(tǒng)最重的疾病，也是全球面臨的重大健康問題，雖然現(xiàn)在的醫(yī)療水平已經(jīng)將SLE從以往的爆發(fā)性、難控性、高致死率的急性疾病逐步轉(zhuǎn)為慢性、可控性疾?。?1］。但目前也僅僅依靠免疫抑制劑而無徹底治療疾病的藥物，導(dǎo)致了其的不愈性。加之其急性-緩解-急性反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)給病人帶來了不同程度精神及經(jīng)濟(jì)壓力。研究顯示了SLE 病人均存在焦慮、抑郁等心理不良情緒［12］。因此，完善SLE 的疾病發(fā)病機(jī)制及精準(zhǔn)評估病情對此類病人具有重要的意義。

本研究采用CD19 標(biāo)記淋巴細(xì)胞，結(jié)果顯示了SLE 病人的淋巴細(xì)胞B 數(shù)量明顯高于健康對照組，初步說明了淋巴B 細(xì)胞可能參與了SLE 的發(fā)生發(fā)展。其相關(guān)機(jī)制如下：淋巴細(xì)胞通過表面表達(dá)的B細(xì)胞表面受體及各類表面抗原的作用，影響了自身的活化及程度，控制B 細(xì)胞亞群的分化及各類抗體的產(chǎn)生，而B 細(xì)胞的雙向調(diào)控失衡可導(dǎo)致機(jī)體B 細(xì)胞免疫功能異常，最終導(dǎo)致了SLE的發(fā)生［13］。

本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示SLE 病人的淋巴細(xì)胞CD72 的陽性表達(dá)率低于健康者，可見CD72 可能參與了SLE 的病理生理過程。CD72 是一種45 kDaⅡ型糖蛋白，是B 細(xì)胞常見的研究載體，其作為BCR的共受體的B 細(xì)胞表達(dá)，在機(jī)體內(nèi)起到抑制B 細(xì)胞的過度活化的生理機(jī)制，最終抑制SLE病情的進(jìn)展。因此，其含量水平變化對SLE 的診斷及病情的判斷具有重要意義，佐證了既往關(guān)于CD72 可能參與了SLE的發(fā)生發(fā)展過程的研究結(jié)論［14］。

本研究在探究CD72 與下游的JNK 的關(guān)系時(shí)結(jié)果顯示SLE 病人外周血P-JNK 含量表達(dá)高于健康對照組，同時(shí)CD72 與JNK 之間存在負(fù)向相關(guān)性，可能與CD72 可能通過控制JNK 通路調(diào)控下游傳導(dǎo)系統(tǒng)，從而導(dǎo)致JNK 途徑異常表達(dá)，最終引起了血液中P-JNK量異常表達(dá)有關(guān)。從而驗(yàn)證了既往研究關(guān)于CD72-JNK 途徑可能參與SLE 的發(fā)生及發(fā)展的研究結(jié)論［15-17］。

SLEDAI-2000 是目前應(yīng)用最為廣泛的SLE 病人疾病活動情況評估系統(tǒng)。此量表包括9個(gè)臟器系統(tǒng)的24 項(xiàng)臨床指標(biāo)，從而客觀全面地評估SLE 的疾病活動情況?？偡衷礁逽LE 活動性越強(qiáng)，病情越重。本研究采用了Person 分析了SLEDAI-2000 與CD72之間的關(guān)系進(jìn)一步證實(shí)CD72 與SLE 之間的關(guān)系結(jié)果顯示SLEDAI 評分與CD72 陽性率存在相關(guān)性。可見CD72陽性率可以準(zhǔn)確評估SLE病人的病情，在臨床具有精確評估疾病嚴(yán)重程度的良好指標(biāo)的潛在可能，與之前的研究結(jié)果相似［18-19］，但CD72 陽性率的診斷效能值有待大樣本的研究來進(jìn)一步完善。

綜上所述，SLE 病人外周血B 細(xì)胞中CD72 的表達(dá)可輔助臨床疾病的診斷及相關(guān)病情評估，同時(shí)具有成為靶向治療實(shí)現(xiàn)精確醫(yī)療提高臨床治療效果的作用位點(diǎn)。但本研究為單中心研究且研究個(gè)體較少，需多中心的大樣本研究來完善臨床驗(yàn)證。此外，CD72-JNK 途徑的具體作用機(jī)制也是下一步研究待闡述的重點(diǎn)。