清金保肺湯聯合針灸輔助治療非小細胞肺癌的臨床及網絡藥理學研究

凌綿聰　樊偉　熊婷　王天磊　潘嘉欣　莫燕麗　劉建浩

〔摘要〕 目的 探討清金保肺湯聯合針灸輔助治療非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）的臨床效果，并借助網絡藥理學方法建立清金保肺湯多成分-多靶點-多通路的中藥復方調控網絡與關系網絡，結合小鼠實驗驗證其對于NSCLC的作用機制。方法 選取三亞市中醫院2019年1月至2020年12月收治的NSCLC患者80例作為研究對象，分為對照組40例（常規治療）與觀察組40例（在對照組基礎上應用清金保肺湯聯合針灸治療），治療1個月后觀察兩組治療效果及評估兩組不良反應，監測淋巴細胞亞群百分比及絕對計數的變化情況。通過GEO數據庫篩選肺癌腫瘤樣本與正常樣本的差異基因;運用中藥系統藥理數據庫搜索清金保肺湯藥物有效活性成分以及藥物作用靶點，運用Cytoscape 3.7.2軟件構建成分-靶點基因網絡和蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）網絡;利用R語言進行京都基因與基因組百科全書（KEGG）代謝通路富集分析、基因本體論（GO）富集分析。采用NSCLC細胞株A549右腋下接種建立NSCLC荷瘤模型，蛋白質免疫印跡法對網絡藥理學篩選的關鍵作用靶點進行驗證。結果 觀察組有效率顯著高于對照組（P<0.05），不良反應率顯著低于對照組（P<0.05），CD3⁺T、CD4⁺T細胞的絕對計數顯著上升（P<0.05），B細胞的絕對計數顯著下降（P<0.05）。網絡藥理分析共篩選得到35個靶點基因、59個有效活性成分;PPI網絡及拓撲網絡分析顯示，絲裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）、EFGR-酪氨酸激酶抑制劑、核因子κB（nuclear factor-κB， NF-κB）等可能是清金保肺湯治療NSCLC的重要靶點。KEGG通路富集分析顯示，清金保肺湯治療NSCLC主要與酪氨酸激酶受體信號通路、白細胞介素17、MAPK等多條信號通路有關。動物實驗結果證實，給藥后清金保肺湯低、高劑量組小鼠腫瘤組織中NF-κB和B淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）蛋白表達水平均降低（P<0.01），Bcl-2相關X蛋白表達水平升高（P<0.01），驗證了網絡藥理學結果。

結論 本研究基于網絡藥理學并結合小鼠體內實驗，初步探究了清金保肺湯治療肺癌的基因靶向作用以及通路蛋白等信息，為進一步深入研究清金保肺湯對于肺癌的治療機制奠定了理論基礎。

〔關鍵詞〕 肺癌;清金保肺湯;作用機制;臨床效果;網絡藥理學;信號通路;小鼠

〔中圖分類號〕R285? ? ? ?〔文獻標志碼〕B? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.04.012

Clinical and network pharmacology study of Qingjin Baofei Decoction combined with

acupuncture in the adjuvant treatment of non-small cell lung cancer

LING Miancong， FAN Wei， XIONG Ting， WANG Tianlei， PAN Jiaxin， MO Yanli， LIU Jianhao*

（Sanya Hospital of Traditional Chinese Medicine， Sanya， Hainan， 572000 China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the clinical effect of Qingjin Baofei Decoction combined with acupuncture in the adjuvant treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC）. By means of network pharmacology， the regulation network and relationship

network of Qingjin Baofei Decoction with multi-component， multi-target and multi-pathway were established， and its mechanism of action on NSCLC was studied in vivo in mice. Methods 80 NSCLC patients admitted to Sanya Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2019 to December 2020 were selected as the research objects， and they were divided into control group 40 cases （routine treatment） and observation group 40 cases （on the basis of control group， Qingjin Baofei Decoction combined with acupuncture treatment was applied）. After one month of treatment， the therapeutic effect and adverse reactions of the two groups were observed， and the percentage and absolute count of lymphocyte subsets were monitored. GEO database was used to screen the differential genes between lung cancer samples and normal samples. The traditional Chinese medicine systems pharmacology （TCMSP） were used to search the active ingredients and drug targets of Qingjin Baofei Decoction. Cytoscape 3.7.2 software was used to construct the component-target gene network and protein-protein interaction （PPI） network. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG） metabolic pathway enrichment analysis and Gene Ontology （GO） enrichment analysis were performed using R language. NSCLC line A549 was inoculated under the right axilla to establish a tumor bearing model. The key targets screened by network pharmacology were verified by Western blot. Results The effective rate of observation group was significantly higher than that of control group （P<0.05）， and the adverse reaction rate was significantly lower than that of control group （P<0.05）. The absolute count of CD3⁺T， CD4⁺T cells were significantly increased （P<0.05）， but the absolute count of B cells was significantly decreased （P<0.05）. A total of 35 target genes and 59 active ingredients were screened by network pharmacology analysis. PPI network and topological network analysis showed that mitogen-activated protein kinase （MAPK）， EGFR tyrosine kinase inhibitor resistance and nuclear factor-κB （NF-κB） may be important targets of Qingjin Baofei Decoction in the treatment of NSCLC. KEGG pathway enrichment analysis showed that the treatment of NSCLC by Qingjin Baofei Decoction was mainly related to tyrosine kinase receptor signaling pathway， interleukin 17， MAPK and other signaling pathways. Animal experimental results confirmed that， after administration， the expression levels of NF-κB and B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） in tumor tissues of mice in Qingjin Baofei Decoction low-dose and high-dose groups decreased （P<0.01）， the expression level of Bcl-2 related X protein increased （P<0.01）， which verified the results of network pharmacology. Conclusion Based on network pharmacology and in vivo experiment in mice， this study preliminarily explores the gene targeting effect and pathway protein of Qingjin Baofei Decoction in the treatment of lung cancer， which lays a theoretical foundation for further verifying the therapeutic mechanism of Qingjin Baofei Decoction for lung cancer.

〔Keywords〕 lung cancer; Qingjin Baofei Decoction; mechanism of action; clinical effect; network pharmacology; signaling pathway; mice

現今，肺癌的發病率與死亡率一直呈上升態勢，是增長速度最快、威脅人類健康和生命安全的常見惡性腫瘤之一，分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）兩個亞型[1]。有資料顯示，約75%的肺癌患者確診時已處于晚期[2]，且約85%為NSCLC[3]。目前，西醫治療肺癌仍然以化療為主，會產生惡心嘔吐、脫發等不良反應，同時，患者需承受腫瘤復發、轉移帶來的焦慮等負面心理，影響治療效果以及癌癥預后，故傳統療法越來越被臨床所采用[4-5]。

清金保肺湯記載于《萬氏家抄方》，具有滋陰清熱、宣散肺氣、止咳平喘等作用。本院多用于治療肺炎、肺癌、肺結核等肺部疾病，療效佳且無不良反應，患者容易接受，但治療機制尚不明確。針灸療法是中醫藥特有的一種非藥物治療手段，在呼吸道疾病中的療效較為突出，可以減輕放療、化療對人體產生的不良反應，提高患者的生活質量。針灸治療肺癌的具體機制包括增加免疫功能、發揮抗炎作用、抑制腫瘤轉移及生長等方面，針藥聯合也是目前中醫臨床治療的常見方法[6]。

網絡藥理學可揭示疾病-靶蛋白-藥物之間的緊密聯系，對于深入研究多途徑、多靶點、多成分的中藥復方提供了借鑒和思路，有效解決了中醫藥復方研究的困難[7-8]。因此，本文針對NSCLC，對比觀察清金保肺湯聯合針灸輔助治療的臨床效果，同時借助網絡藥理學的方法探討清金保肺湯對肺癌的作用機制并進行實驗驗證，為中醫藥治療肺癌提供新思路，也為清金保肺湯的臨床應用提供了一定依據，同時有利于針灸療法這一中醫藥特有的非藥物治療手段的推廣使用。

1 資料與方法

1.1? 臨床分析

1.1.1? 一般資料? 80例研究對象均為2019年1月至2020年12月于三亞市中醫院腫瘤科住院的意識清晰、未經過放化療、無糖尿病史及免疫系統疾病、生存預期>6個月的NSCLC患者，排除妊娠期或哺乳期婦女和患有血液系統疾病、嚴重心肝腎功能不全及精神疾病者。應用隨機數字表法將患者分為對照組（40例，常規治療）和觀察組（40例，在對照組基礎上應用清金保肺湯聯合針灸治療），兩組患者性別、年齡、體質量一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）（見表1），本實驗通過三亞市中醫院倫理委員會批準（倫理號：ZYYLL201901023）。

1.1.2? 治療方法? （1）對照組對癥應用常規化療治療，靜脈滴注順鉑（75 mg/m²）。（2）觀察組在對照組基礎上應用清金保肺湯聯合針灸治療。清金保肺湯組方：麥冬（去心）6 g，桔梗9 g，天冬（去心）9 g，黃芩9 g，荊芥9 g，知母9 g，杏仁6 g，天花粉12 g，玄參12 g，牛蒡子9 g，五味子4 g。文火煎熬40 min，水煎液500 mL，早晚服用，1劑/d。針灸：選取患者壓痛點和天泉穴、風門穴、肺俞穴、尺澤穴、膏肓穴、心俞穴、中府穴進行針灸，每次留針30 min，1次/d。觀察兩組治療1個月后的治療效果。

1.1.3? 觀察指標? 臨床療效評定包括治療效果評估、不良反應評估和免疫功能評估。（1）治療效果評估：以隨訪1個月內腫瘤病灶縮小程度作為評判指標。進展（progress degree， PD）：腫瘤病灶未縮小或面積擴大表示惡化;無變化（no change， NC）：腫瘤病灶發生縮小但縮小未超過50%表示穩定;部分緩解（part relief， PR）：腫瘤病灶縮小超過50%，隨訪1個月內未發生復發情況表示部分緩解;完全緩解（complete relief， CR）：腫瘤病灶完全消失，隨訪1個月內未發生復發情況表示完全緩解。（2）不良反應評估：主要觀察患者惡心、嘔吐、白細胞降低的發生情況。（3）免疫功能評估：選用四色淋巴細胞亞群分析試劑盒（美國BD公司），使用FACSCanto Ⅱ流式細胞儀（美國BD公司），檢測外周血中淋巴細胞亞群CD3+、CD4+細胞、自然殺傷（natural killer cell， NK）細胞、B細胞百分比及絕對計數。

1.1.4? 統計學方法? 采用SPSS 20.0進行統計分析，計數資料采用“例（%）”表示，行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

1.2 網絡藥理學研究

1.2.1? 正常樣本與肺癌樣本的差異基因篩選? 在美國國家生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information， NCBI， https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/），選定GEO DataSets通過搜索庫肺癌相關的文章，并以“Entry type”下的“Series”“Top Organisms”下的“Homo sapiens”“Study type”下的“Expression profiling by array”為限定條件，以便篩選文章引用文章中的數據，下載獲得同一篇文章的相關文件。利用R語言軟件，以logFCfilter=1且adjPfilter=0.05為篩選條件，最終得到差異基因，并分別取出上調最顯著的20個基因和下調最顯著的20個基因制作差異熱圖及差異火山圖。

1.2.2? 清金保肺湯中藥相關基因篩選? 在中藥系統藥理數據庫（traditional chinese medicine systems pharmacology， TCMSP， https：//tcmspw.com/tcmsp.php）中根據口服生物利用度（OB>30%）和類藥性（DL>0.18）篩選清金保肺湯組方中各味中藥的活性化合物。

1.2.3? 清金保肺湯有效成分的靶基因和肺癌差異交集基因? 通過Perl（http：//Strawberryperl.com/）軟件，用清金保肺湯有效成分的靶基因在肺癌的差異基因中進行篩選，以便得到有效成分與部分差異基因的對應關系。

1.2.4? 中藥復方調控網絡的構建? 借助Cytoscape 3.7.2（the cytoscape consoritum， http：//cytoscape.org）軟件構建清金保肺湯與肺癌的“有效成分-靶點-疾病”交互網絡。

1.2.5? 交集基因的蛋白相互作用核心網絡（protein-protein interactions， PPI）的構建 使用Cytoscape 3.7.2軟件中的Bisogenet插件進行PPI網絡繪制。結合Cytoscape 3.7.2軟件中的CytoNCA插件對PPI網絡進行網絡拓撲結構分析，篩選標準為選擇節點度值（degree centrality）大于61，構建一個子網絡;接下來以介數中心度（betweenness centrality）大于100為篩選標準，構建另一個子網絡。

1.2.6? 基因功能富集（GO）及通路富集分析（KEGG）

利用R軟件，選擇生物過程（biological process）、細胞組分（cellular component）和分子功能（molecular function）3個模塊進行基因功能富集分析;利用R軟件對清金保肺湯與肺癌的交集基因做KEGG信號通路分析，同時利用Cytoscape 3.7.2將KEGG通路與其相關基因構建關系網絡。

1.3? 動物實驗

1.3.1? 實驗材料? C57BL/6小鼠，SPF級，7周齡，體質量18～22 g，雄性。動物房飼養，溫度（23±2） ℃，相對濕度50%±10%，照明條件為12 h光照/12 h暗循環，自由攝食飲水，所用小鼠實驗前均適應性飼養1周。

NSCLC細胞株A549（批號：C1002，杭州亦博生物科技有限公司）;注射用順鉑（規格：10 mg/支，國藥準字H37021356，齊魯制藥有限公司），使用時用無菌生理鹽水配制成濃度為0.4 mg·mL-1的順鉑溶液;核因子-κB（nuclear factor kappa-B， NF-κB）、B淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bcl2-associated X， Bax）、肌動蛋白（β-actin）單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗兔免疫球蛋白G、增強型RIPA裂解液、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、廣譜磷酸酶抑制劑混合物（100×）（批號：BOS113213951、16D16B02、B031132BP51、AA？鄄64132、BST14B25C15I27、14K16B06、025B1050、16L？鄄

21C83，博士德生物工程有限公司）;Tris-HCl緩沖鹽溶液（TBST）（批號：20201125，北京索萊寶科技有限公司）。

GeneGnome成像系統（基因有限公司）;ImageJ軟件（ImageJ2，美國國立衛生研究院）。

清金保肺湯藥液的制備：取清金保肺湯文火煎熬40 min，制成生藥濃度為8、16 mg·mL-1的藥液，置于4 ℃冰箱保存。

1.3.2? 模型的制備、分組與給藥? 取非小細胞肺癌A549細胞株于37 ℃、5%CO2培養箱內培養，待其生長至對數生長期，用0.25%胰蛋白酶消化，離心（1200 r/min，10 min，離心半徑8.359 6 cm），制成單細胞懸液（細胞濃度為1×10⁷/mL）。所有小鼠編號，隨機分為正常組10只和造模組40只。造模組小鼠皮下接種單細胞懸液0.2 mL，正常組小鼠皮下注射無菌生理鹽水0.2 mL。待皮下結節長徑生長至8 mm左右，即成功建立非小細胞肺癌荷瘤模型，本研究中造模組所有小鼠均造模成功[9-10]。

將造模成功的小鼠隨機分為模型組、清金保肺湯低劑量組、清金保肺湯高劑量組和順鉑組，各10只。模型組和正常組均腹腔注射無菌生理鹽水5 mL·kg^-1，灌胃給予蒸餾水5 mL·kg^-1;清金保肺湯低、高劑量組分別腹腔注射無菌生理鹽水5 mL·kg^-1，灌胃給予8、16 mg·mL^-1清金保肺湯藥液5 mL·kg^-1;順鉑組腹腔注射0.4 mg·mL^-1順鉑溶液5 mL·kg^-1，灌胃給予蒸餾水5 mL·kg^-1。均每天1次，連續14 d。

1.3.3? 標本采集與處理? 末次給藥次日，注射過量1%戊巴比妥鈉處死小鼠，取出腫瘤組織（正常組取正常組織）稱重，切成3 mm×3 mm左右碎塊，-80 ℃凍存，備用。

1.3.4? Western blot法檢測小鼠腫瘤組織NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表達水平[11]? 取“1.3.3”中備用組織，使用T-PER組織蛋白提取試劑提取蛋白，Bradford法測定蛋白含量，SDS-PAGE法分離30 μg蛋白，并轉移到硝酸纖維素膜上，用5%脫脂奶粉室溫封閉NC膜1 h;TBST洗膜后，用NF-κB、Bcl-2、Bax、β-actin一抗工作液室溫震蕩孵育1 h;TBST洗膜后，HRP標記山羊抗兔灌胃G二抗室溫孵育1.5 h。GeneGnome成像系統曝光，ImageJ軟件分析，所得灰度值即為蛋白相對表達量。

1.3.5? 統計學分析? 所有計量資料數據均以“x±s”表示。各組實驗數據進行方差齊性檢驗，兩組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1? 臨床效果分析

觀察組總有效率達80%，顯著高于對照組的52.5%（P<0.05）。同時，觀察組呈現更少的不良反應，發生率僅為52.5%，顯著低于對照組的90%（P<0.05）。見表2-3。對比兩組治療前淋巴細胞亞群百分比、絕對計數，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后與對照組相比，觀察組CD3⁺T、CD4⁺T細胞的絕對計數顯著上升（P<0.05），B細胞的絕對計數顯著下降（P<0.05）。見圖1。

2.2? 網絡藥理分析

經過對數據處理，共得到正常樣本20組、腫瘤樣本30組，以R語言為平臺，以logFC=0.01、P=0.05為閾值對正常樣品和肺癌樣品進行差異分析，共得到肺癌疾病差異基因4212個，其中對于正常組上調的差異基因共計有2315個，對于正常組下調的差異基因總共有1897個，并將其繪制差異熱圖（圖2A） 和差異火山圖（圖2B）。

通過TCMSP平臺，得到128個活性成分（經過OB>30%，DL>0.18%篩選得到），藥物作用靶點8322個，經OB與DL篩選重復項后得1845個藥物作用靶點。運用Perl軟件對藥物有效成分和相關靶點進行整理，共篩選出35個靶點基因、59個有效活性成分。

將藥物有效成分與交集靶基因數據導入Cytoscape軟件構建成分-靶點基因網絡，即中藥復方調控網絡，如圖3所示。藥物分子中槲皮素（quercetin）（Degree=19）、木犀草素（luteolin）（Degree=11）、甲基原薯蕷皂苷元-qt（methylprotodioscin-qt）（Degree=8）、山柰酚（kaempferol）（Degree=6）度值（degree centrality， DC）較大，作用靶點較多，說明這幾個活性成分在肺癌治療過程中起著主要作用。交集基因中環加氧酶1（prostaglandin endoperoxide synthase 1， PTGS1）（Degree=40）、檢查點激酶1（checkpoint kinase 1， CHEK1）（Degree=14）、毒蕈堿型膽堿能受體1（cholinergic receptor muscarinic 1， CHRM1）（Degree=14）、孕激素受體（progesterone receptor， PGR）（Degree=14）、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase3β， GSK3β）（Degree=11）度值較大，說明藥物分子主要作用于這些靶點而對肺癌起到一定的治療效果。

將交集靶基因數據導入Cytoscape軟件，借助Bisogenet插件制作PPI網絡，得到2484個節點（圖4A），根據網絡節點的拓撲特征值，利用度值與介度中心數（betweenness centrality， BC）計算進行拓撲分析，并以DC>61為篩選條件進行拓撲結構分析得到471個節點（圖4B），以BC>600為篩選條件進行拓撲結構分析得到核心網絡，其中包含84個節點（圖4C）。

探討清金保肺湯對肺癌的治療機制，以P<0.05為條件對交集靶基因進行GO富集分析，共得到314個生物信息有關術語，其中生物過程相關術語274條、細胞組分相關術語9條、分子功能相關術語31條。選擇P值較低的點進行可視化分析，其可視化分析所得到得柱狀圖如圖5所示。

將交集靶基因以P<0.05為篩選條件進行KEGG通路富集分析，得到102條KEGG信號通路，選擇其中P值較小的20條信號通路進行可視化分析，主要信號通路為酪氨酸激酶受體信號通路（ErbB）、白細胞介素17信號通路（IL-17）、焦點粘連（Focal adhesion）、絲裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）、EFGR絡氨酸激酶抑制劑耐藥等，其可視化分析柱狀圖如圖6A。并篩選出前20條通路用Cytoscape軟件繪制KEGG關系網絡（圖6B）。

2.3? 各組小鼠腫瘤組織NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表達水平比較

與正常組相比，模型組小鼠腫瘤組織NF-κB、Bcl-2蛋白表達水平升高（P<0.01），Bax、Bax/Bcl-2蛋白表達水平降低（P<0.01）。與模型組相比，清金保肺湯低、高劑量組及順鉑組小鼠腫瘤組織中NF-κB、Bcl-2蛋白表達水平降低（P<0.01）;Bax、Bax/Bcl-2蛋白表達水平升高（P<0.01）。與清金保肺湯低劑量組相比，清金保肺湯高劑量組NF-κB、Bcl-2蛋白表達水平降低（P<0.01）;Bax、Bax/Bcl-2蛋白表達水平升高（P<0.01）。以上結果表明，清金保肺湯可調節小鼠腫瘤組織中NF-κB、Bcl-2、Bax的表達水平，對肺癌起到一定的治療作用。見圖7。

3 討論

本實驗結合針灸及現代藥理學探究臨床效果的同時，運用網絡藥理學方法探究清金保肺湯對肺癌的作用機制，并結合小鼠體內實驗，采用清金保肺湯對非小細胞肺癌荷瘤模型小鼠進行干預，對網絡藥理學所得結果進行驗證，以期為臨床應用中醫藥治療肺癌提供一定的思路與方向。TCMSP平臺篩選出槲皮素、木犀草素、山柰酚等活性成分對于肺癌治療有較強的靶向作用。槲皮素能降低MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白和轉化生長因子-β1蛋白的表達而誘導肺癌腫瘤細胞株A549凋亡[12-13]。木犀草素可促使A549肺癌細胞凋亡、阻礙A549肺癌細胞的侵襲[14]。山柰酚能夠阻礙雌激素相關受體α（ERRα）效應的發揮而降低非小細胞肺癌A549細胞侵襲和遷移能力[15]。

通過PPI網絡的構建以及拓撲分析得到清金保肺湯治療肺癌的關鍵靶點。P53腫瘤抑制因子（tumor protein 53， TP53）基因可以抑制細胞增殖、誘發細胞凋亡而起到抗腫瘤的作用[16-17]。鼠雙微體2（murine double minute 2， MDM2）是TP53腫瘤抑制蛋白的一個靶基因，其過度表達可導致TP53因子徹底失活而引起癌變[18]。

GO富集分析得到清金保肺湯治療肺癌的相關靶點功能，主要包括機械刺激反應、生長因子結合、蛋白激酶調節活性等。KEGG富集分析結果顯示，清金保肺湯作用于肺癌的通路主要為ErbB信號通路、IL-17信號通路、MAPK信號通路等。進一步分析發現，上述通路涉及免疫調節、腫瘤與炎癥等方面。ErbB通路靶點最多，表明清金保肺湯最有可能通過該通路發揮作用。MAPK通路的異?；罨c腫瘤的增殖、轉移和侵襲密切相關，因此可作為抗肺癌靶點[19]。

NF-κB可抑制細胞凋亡，在人類肺癌組織和細胞中，其異常激活且不受控制，被認為是治療非小細胞肺癌的新靶點[20]。其中Bax為促凋亡因子，Bcl-2為抗凋亡因子，二者相互拮抗，在腫瘤細胞的凋亡過程中發揮作用[21]。NF-κB可通過調控Bcl-2、Bax的表達而抑制細胞凋亡。本實驗在網絡藥理學所得結果基礎上，通過人非小細胞肺癌A549細胞株右腋下接種建立非小細胞肺癌荷瘤模型，對小鼠腫瘤組織中NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表達水平進行檢測，發現清金保肺湯可通過抑制NF-κB信號通路，調節細胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達，進而促進腫瘤細胞的凋亡，這一結果與網絡藥理研究相佐證，為肺癌的中醫藥治療提供了參考。

本實驗創新性地將針灸療法應用于非小細胞肺癌的輔助治療，通過網絡藥理學方法探究清金保肺湯對肺癌的作用機制，并結合小鼠體內實驗驗證網絡藥理學所得結果，為肺癌的臨床治療提供了新思路。

4 結論

清金保肺湯聯合針灸組療效明顯高于對照組，清金保肺湯治療肺癌的有效成分很有可能是槲皮素、木犀草素、山柰酚等活性成分，這些成分通過ErbB、IL-17等通路作用于TP53、MDM2、EFGR、MAPK1、MAPK8等關鍵靶點，調控蛋白激酶活性與調節細胞對于機械刺激的反應等，從而發揮抑制腫瘤細胞生長、誘導肺癌組織細胞凋亡等作用，從而對肺癌起到一定的治療作用。

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