口腔清潔護(hù)理用品 牙膏中綠原酸含量的測定 高效液相色譜法

前言

本文件按照GB/T 1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。

請注意本文件的內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由中國口腔清潔護(hù)理用品工業(yè)協(xié)會提出。

本文件由全國口腔護(hù)理用品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會牙膏分技術(shù)委員會(SAC/TC492/SC1)歸口。

本文件主要起草單位：無限極(中國)有限公司、柳州兩面針股份有限公司、重慶登康口腔護(hù)理用品股份有限公司、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院。

本文件主要起草人：高艷、陳杰鋒、肖蕾、黃華來、管弋铦、夏澤敏。

本文件為首次發(fā)布。

1 范圍

本文件規(guī)定了采用高效液相色譜法測定口腔清潔護(hù)理用品牙膏中綠原酸含量，包括試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計算、檢出限和定量限、允許差。

本文件適用于碳酸鈣基質(zhì)、二氧化硅基質(zhì)、磷酸氫鈣基質(zhì)牙膏中綠原酸含量的測定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3 術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4 試劑和材料

除非另有規(guī)定，所有試劑均為分析純。水為符合GB/T 6682中規(guī)定的一級水。

4.1 乙腈:色譜純。

4.2 甲醇:色譜純。

4.3 磷酸:優(yōu)級純。

4.4 50%(體積分?jǐn)?shù))甲醇水溶液。

4.6 甲醇-磷酸混合溶液：甲醇(4.2)+磷酸(4.3)+水=50+2+48(體積比)。

4.7 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥95%，CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式參見附錄A表A.1。

4.8 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1

稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(4.7)10mg(精確至0.01mg，純度修正)于50mL棕色容量瓶中，用50%甲醇水溶液(4.4)溶解并定容至刻度，此溶液濃度為0.20mg/mL。該溶液于棕色瓶中在0℃～4℃冰箱避光可保存30天。

4.9 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液2

吸取0.20mg/mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1(4.8)5.0mL于100mL棕色容量瓶中，用50%甲醇水溶液(4.4)定容至刻度，此溶液濃度為10.00μg/mL。該溶液于棕色瓶中在0℃～4℃冰箱避光可保存7天。

4.10 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

分別吸取10.00μg/mL 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液2(4.9)0.3mL、0.5mL、1.0mL、2.0ml、5.0mL于10mL棕色容量瓶中，再用50%甲醇水溶液(4.4)稀釋至刻度，配制成濃度為0.30μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。現(xiàn)配現(xiàn)用。

總而言之,替格瑞洛應(yīng)用于急性冠脈綜合征治療中具有重要意義,能夠在發(fā)揮顯著療效的基礎(chǔ)上降低不良反應(yīng)發(fā)生率,值得應(yīng)用及推廣。

4.11 石英砂

40～80目，含量≥99.0%。

5 儀器和設(shè)備

5.1 高效液相色譜儀：配備二極管陣列(或紫外)檢測器。

5.2 分析天平：感量為0.1mg、 0.01mg。

5.3 棕色容量瓶：10mL、 50mL、 250mL。

5.4 具塞刻度離心管：50mL。

5.5 超聲波儀:功率不小于300W。

5.6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于5000r/min。

5.7 微孔濾膜：孔徑0.22μm。

5.8 渦旋振蕩器：功率不小于15W。

5.9 移液管或移液器：1mL、 2mL、 5mL。

6 分析步驟

6.1 試樣處理

稱取試樣1g(精確至0.1mg)于具塞刻度離心管(5.4)中，加入約1g石英砂(4.11)，再準(zhǔn)確加入甲醇-磷酸混合溶液(4.6)20mL，稱定重量，渦旋振蕩2min， 35℃水浴中超聲提取30min，冷卻至室溫后用甲醇-磷酸混合溶液(4.6)補(bǔ)足損失重量， 5000r/min離心分離10min，取上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機(jī)待測。

6.2 測定條件

高效液相色譜測定參考條件如下：

a)色譜柱規(guī)格：C18色譜柱：250mm × 4.6mm(粒徑5μm)，或等效色譜柱；

b)流動相：A 乙腈(4.1)，B 0.1%磷酸溶液(4.5)，梯度洗脫，見表1；

表1 流動相梯度洗脫表

c)流量：1.0mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進(jìn)樣量：20μL；

f)檢測波長：327nm。

6.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

按6.2色譜條件檢測，以綠原酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.10)的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖參見附錄B中的圖B.1。

6.4 測定

按6.2的色譜條件，取6.1步驟中的待測試樣溶液進(jìn)樣，得到試樣溶液的峰面積，根據(jù)保留時間和二極管陣列的光譜圖定性，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的DAD光譜圖參見附錄B中的圖B.2。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣溶液中綠原酸的含量。

試樣溶液中綠原酸的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)將提取液稀釋后測定或增加提取溶液的濃度重新檢測。

6.5 空白試驗

除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

6.6 平行試驗

樣品中的綠原酸含量應(yīng)根據(jù)兩次獨立的平行試驗結(jié)果的算術(shù)平均值確定。

7 結(jié)果計算

試樣中的綠原酸含量按公式(1)計算：

(1)

式中：

X——試樣中綠原酸的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出的綠原酸濃度(扣除空白值)，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

計算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

8 檢出限和定量限

當(dāng)樣品稱樣量為1g，混合溶液加入量為20mL時，本方法綠原酸的檢出限為0.52mg/kg，定量限為1.04mg/kg。

9 允許差

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。

附錄A

(資料性)

綠原酸的CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式

綠原酸的CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式，見表A.1。

表A.1 綠原酸的CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式

附錄B

(資料性)

參考譜圖

綠原酸酸標(biāo)準(zhǔn)品的參考色譜圖和光譜圖，見圖B.1和圖B.2。

注：綠原酸參考保留時間6.7min。

圖B.2 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的DAD光譜圖