多發性骨髓瘤患者骨髓活檢組織中IL-8、CD56的表達及臨床意義

黃裕林

重慶市開州區人民醫院檢驗科，重慶 405400

多發性骨髓瘤(MM)為惡性血液系統疾病，其臨床發病機制主要與骨髓微環境、DNA甲基化、基因突變等有關[1]。近年來，隨著MM新興療法的臨床運用，該類患者的生存率得到顯著提高，但該病仍難以治愈[2]。因此，尋找其早期診斷標志物意義重大。目前，臨床對于MM的診斷主要依據骨髓細胞檢驗、血清指標檢驗聯合影像學檢查[3]。有研究顯示，CD56可介導骨髓瘤細胞的黏附，其在漿細胞上呈高表達[4]。另有研究報道，白細胞介素-8(IL-8)能夠促進腫瘤進展，其可誘導血管生成[5]。為進一步探討IL-8、CD56與MM的關系，本文對67例MM患者進行了研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2021年5月本院收治的67例MM患者作為MM組。納入標準：均為初發病例，經骨髓形態學、X線、免疫球蛋白(Ig)檢查，符合《中國多發性骨髓瘤診治指南(2015年修訂)》[6]中的診斷標準。排除標準：合并自身免疫性疾病、嚴重感染性疾病、其他惡性腫瘤及近期接受放化療治療等患者。MM組中男41例，女26例；年齡46～73歲，平均(55.26±3.54)歲；Durie-Salmon(D-S)分期[7]：Ⅰ期17例，Ⅱ期38例，Ⅲ期12例。另選取同期于本院就診的35例骨髓象檢查正常的患者作為對照組，其中男18例，女17例；年齡43～75歲，平均(56.15±2.89)歲。2組性別構成、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 收集2組骨髓組織，經石蠟包埋備用，應用免疫組織化學法檢測標本中IL-8、CD56的表達。具體操作步驟：(1)將骨髓切片脫蠟后水化，經溫室孵育15 min后，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗骨髓切片3次，每次2 min，滴加一抗(兔抗人IL-8單抗、鼠抗人CD56單抗)，于37 ℃孵育2 h；(2)用吸水紙擦干切片后滴加聚合物輔助劑，于室溫下孵育20 min；(3)滴加辣根酶標記的二抗(羊抗兔IgG)，于室溫下孵育20 min，采用PBS沖洗骨髓切片3次，每次2 min，經二氨基聯苯胺染色后清洗切片；(4)經蘇木精復染、脫水、封固后，于顯微鏡下進行觀察。

1.3評價標準[8]隨機選取10個高倍視野(×400)進行觀察，每個視野計數100個細胞。細胞陽性表達評分：陽性細胞占比<10%計0分，陽性細胞占比10%～25%計1分，陽性細胞占比>25%～50%計2分，陽性細胞占比>50%計3分。細胞染色強度評分：無染色計0分，呈淡黃色計1分，呈黃色或棕黃色計2分，呈棕褐色計3分。以細胞陽性表達評分與細胞染色強度評分之和為總分，總分≤1分為陰性(-)，總分2～3分為弱陽性(+)，總分4～5分為中強陽性(++)，總分≥6分為強陽性(+++)。

2 結 果

2.12組骨髓組織中IL-8、CD56表達情況比較 與對照組比較，MM組骨髓組織中IL-8和CD56的陽性表達率明顯更高(P<0.05)，見表1。

表1 2組骨髓組織中IL-8、CD56表達情況[n(%)]

表2 IL-8、CD56與MM患者臨床特征的關系

2.3IL-8和CD56對MM的診斷效能 根據漿細胞表面免疫表型表達情況對MM進行診斷，以1-特異度為橫坐標，以靈敏度為縱坐標，繪制IL-8及CD56診斷MM的ROC曲線，結果顯示，IL-8單獨檢測診斷MM的AUC為0.788(95%CI：0.621～0.907，P=0.027)，靈敏度為87.43%，特異度為80.15%；CD56單獨檢測診斷MM的AUC為0.754(95%CI：0.596～0.879，P=0.041)，靈敏度為85.03%，特異度為77.93%；IL-8和CD56聯合檢測診斷MM的AUC為0.836(95%CI：0.711～0.953，P=0.008)，靈敏度為91.14%，特異度為83.29%，見圖1。

圖1 IL-8、CD56單獨及聯合診斷MM的ROC曲線

3 討 論

MM患者常伴發腎功能異常、骨骼受損、免疫功能低下等癥狀，目前，臨床對于該病的治療，雖可改善患者預后，但完全治愈較為困難[9]。臨床資料顯示，MM患者存在B、T細胞免疫缺陷，尤其是在B細胞向漿細胞分化過程中，存在細胞膜表面Ig、表面抗原大量丟失現象[10]。CD56為跨膜Ig，其在細胞的生長、遷移過程中發揮重要作用[11]。有研究報道，CD56在MM腫瘤細胞中表達水平較高，可能成為髓外病變的預測指標[12]。IL-8為炎癥趨化因子，臨床資料顯示，IL-8表達于MM患者骨髓基質細胞中，可誘導骨髓瘤細胞趨化[13]。

本研究發現，與對照組比較，MM組骨髓組織中IL-8和CD56的陽性表達率明顯更高(P<0.05)，提示IL-8和CD56在MM患者骨髓組織中呈高表達。通過分析IL-8和CD56與MM患者臨床特征關系，本研究發現，不同D-S分期的MM患者骨髓組中IL-8、CD56的陽性表達率不同，Ⅱ期和Ⅲ期MM患者骨髓組織中IL-8、CD56的陽性表達率均高于Ⅰ期(P<0.05)，Ⅲ期MM患者骨髓組織中CD56的陽性表達率高于Ⅱ期(P<0.05)，提示骨髓組織中IL-8、CD56陽性表達率隨MM的D-S分期增高而升高。分析其機制可能為：(1)IL-8可能通過影響骨髓瘤漿細胞增殖及骨髓環境，刺激漿細胞繁殖、遷移；(2)CD56可能在骨髓瘤細胞分化過程中脫落，致使骨髓瘤細胞與基質細胞不能黏附，骨髓瘤細胞進入血漿，致骨髓瘤細胞轉移。陳思衍等[14]研究發現，MM患者骨髓組織中IL-8的陽性表達率較高，且骨髓瘤分期越高，IL-8陽性表達率越高。張彩霞等[15]研究報道，CD56在MM細胞表面呈陽性表達。孫歡等[16]研究發現，CD56的表達與MM患者臨床分期有關。以上研究結果提示，IL-8和CD56對評估MM的病情變化、臨床分期等具有一定參考價值。

本研究顯示，IL-8和CD56聯合檢測診斷MM的AUC為0.836，高于IL-8、CD56單獨檢測診斷MM的0.788、0.754，提示IL-8和CD56聯合檢測診斷MM的效能更高，IL-8、CD56可作為MM的臨床診斷評價指標。黃垚等[17]研究報道，CD56與MM的免疫特征、臨床分期有關，其可作為評價MM Ig分型的指標。

綜上所述，MM患者骨髓組織中IL-8、CD56的陽性表達率較高，且其表達與MM的D-S分期有關，IL-8和CD56聯合檢測可用于MM的臨床診斷。