從2名幼兒的血液中培養出空腸彎曲菌空腸亞種的分離與鑒定

聶娟娟，馬 爽，林 鏗，王槐堂

1.廣東省廣州市花都區婦幼保健院檢驗科，廣東廣州 510800；2.湖北健康職業學院醫學技術系，湖北咸寧 437000

血液細菌培養是診斷血流感染的重要依據，其中的病原菌有許多種，但文獻報道的空腸彎曲菌空腸亞種少見。本院分別在2020年3月2日、4月9日從2例住院幼兒血液中培養出空腸彎曲菌空腸亞種菌株，現報道如下。

1 臨床資料

病例1，女，23 d，因“腹脹2 d”于2020年3月2日16時5分入住新生兒科。體格檢查：體溫36.8 ℃，脈搏136次/分，呼吸頻率50次/分，血壓72/36 mm Hg。神志清醒、反應可，無脫水征，全身皮膚欠紅潤，中度黃染，前囟平軟，張力不高。呼吸不促，雙肺呼吸音粗，未聞及啰音。心率136次/分，律齊，各瓣膜未聞及雜音。腹脹明顯，見腹壁靜脈顯露，未捫及包塊，肝肋下3 cm，脾觸診不滿意，腸鳴音正常。四肢肌張力正常。輔助檢查：入院后查胸片示心肺未見明顯異常，腹部平片示腸功能紊亂。血常規：白細胞計數(WBC) 9.38×109/L，中性粒細胞比例(NEUTR) 15.9%，淋巴細胞比例(LYMPHR) 64.1%，單核細胞比例13.5%，嗜酸性粒細胞比例5.8%，嗜堿性粒細胞比例0.2%，未成熟粒細胞比例0.5%。血清總膽紅素228.7 μmol/L，直接膽紅素29.4 μmol/L，間接膽紅素199.3 μmol/L，免疫球蛋白G(IgG) 6.07 g/L，偏低(正常7.0～15.0 g/L)，大便常規正常，大便潛血陰性，輪狀病毒陰性。患兒腹脹明顯，警惕敗血癥，同時間送檢血培養，培養出空腸彎曲菌空腸亞種。臨床使用哌拉西林/舒巴坦抗感染治療，患兒3月5日、10日2次血培養均陰性，病情好轉，于2020年3月17日辦理出院手續。

病例2，男，1歲4個月，因“發熱39 ℃半天，抽搐1次”于2020年4月9日8時52分入住兒科。體格檢查：神志清醒，反應尚可，呼吸平順，全身皮膚黏膜無黃染，淺表淋巴結未捫及腫大，前囟平軟，口唇紅，咽充血，雙扁桃體無腫大，雙肺呼吸音粗，未聞及啰音，心律齊，心音有力，無雜音，腹平軟，肝脾觸診不大，腸鳴音正常，雙下肢肢端暖，四肢肌力、肌張力正常，神經系統檢查未見陽性體征。血常規：WBC 8.95×109/L，NEUTR 78.9%，LYMPHR 14.5%，C反應蛋白(CRP) 5.79 mg/L。血氣分析：二氧化碳(CO2)分壓36.6 mm Hg，氧分壓125.9 mm Hg。甲型流感病毒抗原陰性，乙型流感病毒抗原陰性。降鈣素原(PCT)3.28 ng/mL(<0.5 ng/mL為陰性)，乳酸1.79 mmol/L，葡萄糖9.12 mmol/L，肝功、腎功、心功、免疫五項結果未見異常。腦脊液生化及常規未見異常。4月10日查血常規：WBC 7.35×109/L、NEUTR 60.40%、LYMPHR 31.00%，CRP 42.72 mg/L，PCT 13.38 ng/mL，呼吸道核酸十五項示卡他莫拉菌、人類皰疹病毒陽性。4月14日復查，CRP<0.50 mg/L，WBC 5.15×109/L、NEUTR 23.50%，PCT 0.57 ng/mL。臨床根據發熱、炎癥指標升高，提示細菌感染，采用頭孢曲松治療、補液、退熱及對癥處理。4月9日的血培養結果回報，培養出空腸彎曲菌空腸亞種。患兒退燒，癥狀好轉，家長要求辦理出院手續。因患兒家長拒絕再次抽血送檢，僅有1次血培養結果。

2 細菌培養、鑒定及藥物敏感試驗

2.1細菌培養 血培養采用Auto BC120血培養儀(鄭州安圖生物工程股份有限公司)。取陽性瓶內懸液直接涂片革蘭染色(珠海貝索公司)，鏡下可見革蘭陰性、形態彎曲、螺旋樣菌體；轉種血瓊脂平板(廣州市迪景微生物科技有限公司)和巧克力瓊脂平板(鄭州安圖生物工程股份有限公司)，放置在37 ℃及5% CO2(CO2產氣袋，杭州濱和微生物試劑有限公司)環境中，培養24 h無肉眼可見菌落，取原始劃線處生長物涂片革蘭染色，鏡下見形態彎曲、螺旋樣革蘭陰性菌。繼續5% CO2環境中孵育至48 h，血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板上出現針尖大小、圓形、濕潤菌落，涂片革蘭染色，見形態彎曲、螺旋樣陰性菌。平板生長物在42 ℃的5% CO2環境中培養生長良好，在25 ℃的5% CO2環境中培養48 h不生長。

2.2菌種鑒定 2株菌在血平板、巧克力平板(無添加抗菌藥物)生長，菌落圓形、凸起、不溶血，48 h菌落細小，延長孵育時間菌落增大。觸酶試驗和氧化酶試驗均陽性，馬尿酸鹽試驗陽性，經Api CAMPY條(法國生物梅里埃公司)鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種，Vitek 2 Compact全自動生化鑒定儀(法國生物梅里埃公司)使用NH卡鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種，用Vitek MS全自動微生物質譜檢測系統(法國生物梅里埃公司)鑒定為空腸彎曲菌空腸亞種[1]。2株菌在25 ℃不生長，在42 ℃生長良好。

2.3藥物敏感試驗 根據文獻[2]，采用紙片擴散法對紅霉素、環丙沙星和四環素進行藥物敏感試驗。用生理鹽水直接菌落懸液法制備0.5麥氏標準菌懸液，使用含5%綿羊血的MH培養基(采用杭州濱和微生物試劑有限公司生產的MH干粉，加入綿羊血自制)，在5% CO2、42 ℃環境下孵育24 h。病例1菌株，其紅霉素抑菌環直徑19 mm為敏感(敏感≥16 mm)；病例2菌株，其紅霉素抑菌環直徑40 mm為敏感，2株菌四環素和環丙沙星均無抑菌環，為耐藥(四環素抑菌環≤22 mm為耐藥；環丙沙星抑菌環≤20 mm為耐藥)。而多西環素的藥物敏感試驗需使用最小抑菌濃度法檢測，此2株菌未作檢測。

3 討 論

空腸彎曲菌是一種革蘭陰性的微嗜熱細菌，也是一種常見的食源性致病菌。彎曲菌在發展中國家常常從有/無腹瀉的患者中分離到，大部分有癥狀的彎曲菌感染發生在嬰兒和兒童早期，發病率隨年齡增長而降低。嬰幼兒時期發病率最高，感染者可能無癥狀，新生兒僅50%出現發熱，腋溫>37.8 ℃，且發熱可能與脫水等有關。幼兒反復接觸細菌會導致炎癥，在短期內，導致吸收不良、口服疫苗失敗、認知延遲和5歲以下兒童病死率增加[3]。彎曲菌感染以胃腸道最常見，其引起腹瀉的具體過程未完全明確，多發生于<5歲兒童或青少年中，尤其是嬰幼兒[4]。

空腸彎曲菌是引起細菌性腹瀉的主要因素，它作為一種人畜共患病的病原菌在動物身上流行，分布于大多數溫血動物，因此主要的傳播途徑是食源性感染，通過肉類產品特別是家禽，也可通過污染食物、牛奶和水經口傳播，被感染的人和動物糞便中的活菌可污染環境，常因食品、牛奶或水的污染而引起爆發，人際傳播罕見，死亡也很罕見，可能會發生在年齡小或者免疫功能低下的患兒[5-6]。空腸彎曲菌腸炎可引起發熱、腹部絞痛和腹瀉，還可引起腸外感染，如菌血癥、尿路感染等，免疫功能低下者可能發生持續性腹瀉和菌血癥[7],但在免疫功能正常的患者中通常具有自限性。一般從感染到出現癥狀的潛伏期長達72 h，感染通常在1周內消退[3]。同時空腸彎曲菌的感染是致命的，尤其是在幼兒中，而空腸彎曲菌罕見血流感染為遷延性，伴反復發熱，感染來源不明確，主要侵犯免疫缺陷患者。此次本院檢出的2例患兒，1例患兒發熱抽搐，另1例患兒腸功能紊亂并有低IgG血癥，可能因為2例患兒年齡小，機體抵抗力差，免疫功能低下，從而導致空腸彎曲菌趁機而入引起菌血癥。菌血癥發生率占腸道感染患者的1.5‰，老年人發病率最高，由空腸彎曲菌感染導致的死亡不常見[8]。

短期內從2例幼兒血液中培養出空腸彎曲菌空腸亞種，比較少見，需要重視此菌引起的血流感染。由于細菌培養鑒定需要時間，臨床采用了經驗用藥，需要注意如患兒家長拒絕抽血做細菌培養復查，應重視與患兒家屬的溝通。病例1入院后經驗性給予紅霉素抗感染治療后，病情未加重，情況好轉，血培養陽性后予以“哌拉西林/舒巴坦”抗感染對癥治療，癥狀也無反復，狀況良好；病例2入院后在兒科重癥監護病房給予頭孢曲松抗感染、補液、退熱等對癥處理，病情未加重，之后轉入兒科一區繼續頭孢曲松抗感染及對癥治療后患兒熱退，病情好轉。從這2例患兒癥狀好轉看出，空腸彎曲菌血流感染及時診治效果較好。臨床上空腸彎曲菌引起的感染性疾病，往往由于病原菌檢測困難、診斷不明確而延誤治療。同時，也提示了臨床微生物室應具備鑒定的條件，充分考慮到部分自動化鑒定系統不能鑒定此菌，藥物敏感試驗也需要手工完成，才能為臨床提供明確的鑒定結果。

藥物敏感試驗對于流行病學監測、感染經久不愈、嚴重感染治療有指導作用，空腸彎曲菌大多數菌株對多種抗菌藥物敏感，尤其是慶大霉素、紅霉素和氯霉素[9-10]，其對紅霉素的耐藥率較低。