血清miR-483-5p和miR-532-5p水平對卵巢癌手術后復發的預測價值

王又方，夏 璇，郁雅芳，劉曉慶，孫姍姍，黃艷冰

復旦大學附屬婦產科醫院重癥監護室，上海 200090

卵巢癌是常見的惡性腫瘤，由于早期癥狀不明顯，常常伴有尿頻、腹痛和進食困難等臨床表現，往往與其他疾病容易混淆，目前有75%患者在確診時已經屬于卵巢癌晚期，其病死率呈逐年升高，給患者的生命健康帶來嚴重威脅[1]。卵巢癌患者循環微小RNA(miRNAs)能夠與目標mRNA結合，導致該mRNA沉默，從而引起一系列的生物學效應，有研究認為miRNA水平是卵巢癌診斷和預后判斷的重要生物學指標[2-3]。現有研究證實，與健康對照組比較，卵巢癌患者的miR-483-5p水平明顯升高，而miR-532-5p水平明顯降低，二者被認為是卵巢癌潛在的臨床運用指標[4]，但能否用于卵巢癌手術后預后的預測仍不清楚。本研究通過檢測血清miR-483-5p和miR-532-5p水平，觀察二者對卵巢癌手術后2年內出現復發的預測價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2019年6月在本院手術且經病理學檢查證實的116例卵巢癌患者為卵巢癌組。納入標準：臨床資料完整；年齡在43～79歲；自愿加入本組研究。排除標準：手術前已行放療、化療和激素治療者；血液性和免疫性疾病者；智力障礙或者精神疾病者；心肝腎等重要臟器功能不全者。另選擇同期本院75例診斷為卵巢良性腫瘤患者為良性腫瘤組，45例體檢健康女性為健康對照組。卵巢癌組年齡45～79歲，平均(58.97±11.73)歲；組織學類型：漿液性囊腺癌59例，子宮內膜樣癌35例，混合型上皮癌22例；腫瘤組織分化程度：高分化45例，中分化50例，低分化21例；臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期19例，Ⅲ期67例，Ⅳ期18例；淋巴結轉移：有38例，無78例。良性腫瘤組年齡43～79歲，平均(58.18±12.73)歲；組織學類型：畸胎瘤15例，卵巢囊腫35例，卵巢纖維瘤17例，其他良性腫瘤8例。健康對照組年齡45～79歲，平均(58.72±12.72)歲。3組年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核通過，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血液標本收集 卵巢癌組于入院次日和手術后7 d時，良性腫瘤組于入院次日，健康對照組于體檢當日抽取肘靜脈血5 mL左右，室溫下靜置約20 min，然后采用離心半徑15 cm、3 000 r/min離心10 min，取上清液約3 mL，置于-80 ℃冰箱中待測。

1.2.2實時熒光定量聚合酶鏈反應(q-PCR) 采用TaqMan miRNA試劑盒提取細胞總RNA，采用q-PCR儀檢測血清miR-483-5p和miR-532-5p水平。根據目標基因的mRNA序列，設計引物，用設計軟件Primer express 3.0軟件設計反轉錄產物為模板，miR-483-5p擴增引物正向：5′-ACACTCCAGCTGGGAAGACGCGAGGAAGAA-3′，反向：5′-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3′；miR-532-5p擴增引物正向：5′-CAU GCCUUGAGUGUAGGACCGU-3′，反向：5′-GGUCCUACACUCAAGGCAUGUU-3′；U6擴增引物正向：5′- GGTTAGAAGTCATACG -3′，反向：5′-TGTCA TGAATGATCC-3′。反轉錄后以反轉錄產物為模板，采用q-PCR儀上間隙擴增，反應條件：85 ℃反應3 min，85 ℃反應20 s，42 ℃反應40 s，總共循環35次。采用2-ΔΔCt計算miR-483-5p和miR-532-5p的相對表達量。

1.2.3隨訪 按照手術后第1年每月隨訪1次，手術后第2年每3個月隨訪1次，采用電話、微信或QQ對卵巢癌患者隨訪2年。根據是否復發將卵巢癌患者分為復發組和無復發組。

1.2.4觀察指標 比較各組血清miR-483-5p和miR-532-5p水平，觀察血清miR-483-5p和miR-532-5p水平與臨床指標的關系，分析miR-483-5p和miR-532-5p對卵巢癌2年內復發的預測價值。

2 結 果

2.1各組血清miR-483-5p和miR-532-5p水平比較 卵巢癌組手術前血清miR-483-5p水平高于良性腫瘤組和健康對照組(P<0.05)，良性腫瘤組血清miR-483-5p高于健康對照組(P<0.05)；卵巢癌組手術前血清miR-532-5p水平低于良性腫瘤組和健康對照組(P<0.05)，良性腫瘤組血清miR-532-5p低于健康對照組(P<0.05)。手術后7 d時卵巢癌組血清miR-483-5p水平較手術前降低(P<0.05)，而血清miR-532-5p水平較手術前升高(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比較

2.2卵巢癌患者血清miR-483-5p和miR-532-5p水平與臨床病理特征的關系 血清miR-483-5p和miR-532-5p水平在不同腫瘤組織分化程度、臨床分期及有無淋巴轉移的卵巢癌患者中差異均有統計學意義(P<0.05)，在不同年齡、腫瘤最大徑和組織學類型的卵巢癌患者中差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者血清miR-483-5p和miR-532-5p表達與臨床病理特征的關系

2.3卵巢癌患者血清miR-483-5p水平與miR-532-5p的相關性 卵巢癌患者血清miR-483-5p水平與miR-532-5p呈負相關(r=-0.684，P<0.05)。

2.4卵巢癌手術后2年內復發組與無復發組血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比較 經隨訪2年，復發組49例，無復發組67例。卵巢癌復發組血清miR-483-5p水平高于無復發組(P<0.05)，而miR-532-5p水平低于無復發組(P<0.05)。見表3。

表3 卵巢癌手術后復發組與無復發組血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比較

2.5血清miR-483-5p和miR-532-5p檢測對卵巢癌手術后2年內復發的預測效能 ROC曲線分析顯示，血清miR-483-5p和miR-532-5p聯合檢測預測卵巢癌手術后2年內復發的靈敏度為77.6%，特異度為88.1%，曲線下面積(AUC)為0.907，其AUC明顯高于miR-483-5p、miR-532-5p單獨檢測的0.819、0.828(Z=2.784、2.286，P<0.05)，而miR-483-5p、miR-532-5p單獨檢測的AUC差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 血清miR-483-5p和miR-532-5p檢測對卵巢癌手術后2年內復發的預測效能

3 討 論

卵巢癌發病比較隱匿，在確診時大多數已處于晚期，患者的病死率較高，5年生存率低于30%,嚴重影響患者的預后。卵巢癌進展與基因的調控異常具有明顯的關系，檢測與卵巢癌患者血清相關的基因可為腫瘤治療提供依據。血清學指標由于無創，患者的依從性高和可以重復檢測等優勢，被學者用于對腫瘤患者復發和轉移的預測，為患者的治療方案提供有價值的參考[5-6]。現已知30%的人類基因受到長鏈非編碼miRNAs的調控，通過對mRNA的靶向降解調控，抑制靶基因蛋白的翻譯，從而達到調控目的基因的目的[7]。現已知多種腫瘤細胞功能與miRNA關系密切，miRNA對腫瘤細胞的增殖、侵襲、凋亡和代謝等功能均有一定影響[8]。miRNAs是腫瘤領域新型的研究點之一，其血清的異常表達與腫瘤的發生、發展、復發和預后等多種病理生理過程有關[9]，在腫瘤領域的診斷應用具有較好的發展前景。

本研究顯示，卵巢癌組血清miR-483-5p水平明顯高于卵巢良性腫瘤組和健康對照組(P<0.05)，并發現卵巢癌手術后血清miR-483-5p水平較治療前明顯降低(P<0.05)，說明miR-483-5p與卵巢癌關系密切，這與文獻[10]報道的miR-483-5p在胃癌中高表達的結果一致。本研究還顯示，血清miR-483-5p水平在不同的臨床分期、腫瘤組織分化程度和有無淋巴轉移的卵巢癌患者中差異有統計學意義(P<0.05)，與文獻[11]報道的結果一致，說明miR-483-5p與卵巢癌的病理特征具有一定的關系，卵巢癌組織分化程度低、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴轉移的患者，其血清miR-483-5p水平更高，說明血清miR-483-5p能夠準確地反映病情變化及疾病的發生、發展進程。現已知miR-483-5p在乳腺癌和肺癌中有促癌基因的作用，對腫瘤的發生、發展具有促進作用[12-13]。本研究發現卵巢癌手術后2年內復發組血清miR-483-5p水平明顯高于無復發組(P<0.05)，當血清miR-483-5p水平>3.09時，其預測卵巢癌手術后2年內復發的靈敏度為67.3%，特異度為85.1%，AUC為0.819，說明血清miR-483-5p對卵巢癌手術后2年內復發具有較高的預測效能，可作為卵巢癌預后評估的重要指標。有研究證實，在食管癌中miR-483-5p高表達的患者生存期明顯縮短，miR-483-5p是患者總體生存期和無瘤生存期的獨立預后因素[14]；而在肝內膽管癌患者的研究中發現，miR-483-5p高表達患者5年生存期明顯低于低表達的患者[15]，故目前認為miR-483-5p表達與腫瘤患者預后關系密切。

本研究顯示，卵巢癌組血清miR-532-5p水平明顯低于良性腫瘤組和健康對照組(P<0.05)，卵巢癌組手術后血清miR-532-5p水平明顯高于手術前(P<0.05)，說明miR-532-5p類似于抑癌基因，對卵巢具有一定的保護作用，與文獻[16]報道的結果類似。現已知miR-532-5p在多種腫瘤細胞中具有生物學調節功能，研究發現胃癌組織中的miR-532-5p表達水平明顯低于癌旁組織，并且在有遠處轉移的癌組織中其表達水平明顯下調[17]。本研究還顯示，卵巢癌組織分化程度低、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴轉移的患者血清miR-532-5p水平更低(P<0.05)，說明血清miR-532-5p水平與腫瘤組織分化程度、臨床分期和淋巴轉移有關，可作為卵巢癌病情評估的指標。現有的診斷技術對腫瘤的臨床分期很難在治療前做到準確的判斷，不利于做出最佳的治療方案選擇，結合生物學指標的診斷，才能做到個體化和精準的治療。本研究發現卵巢癌復發組血清miR-532-5p水平明顯低于無復發組(P<0.05)，當血清miR-532-5p≤1.01時，其預測卵巢癌手術后2年內復發的靈敏度為100.0%，特異度74.6%，AUC為0.828，說明血清miR-532-5p可以作為卵巢癌病情評估和預后判斷的潛在選擇指標，與相關研究報道的miR-532-5p可以作為結腸癌預后評價指標的結果一致[18]。

本研究還顯示，血清miR-483-5p和miR-532-5p聯合檢測預測卵巢癌手術后2年內復發的AUC為0.907，明顯高于單個指標檢測預測的AUC(P<0.05)，說明兩個指標之間存在某種互補性，相關性分析證實了血清miR-483-5p水平與miR-532-5p呈負相關(r=-0.684，P<0.05)。miR-483-5p類似于促癌基因，對卵巢癌的發生、發展具有促進作用，而miR-532-5p類似于抑癌基因，對卵巢具有保護作用，二者的表達平衡被打破則會導致腫瘤的發生、發展，但二者在卵巢癌中相互作用的確切機制仍需進一步研究。

綜上所述，miR-483-5p和miR-532-5p與卵巢癌關系密切，對卵巢癌手術后2年內復發具有較高的預測價值。