長鏈非編碼RNA SChLAP1表達(dá)水平在前列腺癌組織中的臨床意義及預(yù)后關(guān)系

吳昊明, 傅廣波, 2

(1.徐州醫(yī)科大學(xué), 江蘇 徐州, 221004; 2.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬淮安市第一人民醫(yī)院, 江蘇 淮安, 223300)

前列腺癌是一種常見的男性泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率較高，由于發(fā)病隱匿，多數(shù)患者確診時已是晚期，嚴(yán)重威脅男性生命健康[1-2], 其發(fā)病率和死亡率近年來呈逐年增加趨勢[3-4]。目前，有關(guān)前列腺癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未十分明確，隨著分子生物及病理學(xué)研究的深入，長鏈非編碼RNA(LncRNA)已被證實(shí)在癌癥腫瘤的發(fā)生發(fā)展中參與調(diào)節(jié)重要細(xì)胞信號通路。LncRNA是可通過多種途徑調(diào)控基因表達(dá)的非編碼單鏈RNA[5], 對機(jī)體的生長、發(fā)育及細(xì)胞的分化等起到廣泛的調(diào)控作用，與包括惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[6]。研究[7]證明，LncRNA可作為癌基因或抑癌基因調(diào)控前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡等活動。LncRNA SChLAP1在前列腺癌中可發(fā)揮促癌作用，與前列腺癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后緊密相關(guān)[8]。但目前關(guān)于LncRNA SChLAP1在前列腺癌中表達(dá)的臨床意義及預(yù)后關(guān)系的研究相對較少。本研究對98例前列腺癌患者腫瘤組織中LncRNA SChLAP1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，并分析LncRNA SChLAP1與腫瘤病理及臨床預(yù)后的關(guān)系，以期為前列腺癌的臨床診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2017年1月—2018年12月接受治療的98例初診前列腺癌患者納入本研究(前列腺癌患者組)。另外按年齡匹配的原則選擇同期接受治療的98例良性前列腺增生患者為對照組。前列腺癌患者年齡48～72歲，平均(59.30±7.12)歲; 前列腺增生患者年齡49～71歲，平均(60.24±6.85)歲, 2組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn): 初診患者且臨床診斷符合《前列腺癌診斷治療指南(2014)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn); 治療前未接受過抗腫瘤治療的患者，如化療、放療、激素治療等; 合作性較好，能配合長期隨訪的患者。排除標(biāo)準(zhǔn): 合并其他惡性腫瘤的患者; 并發(fā)嚴(yán)重心腦血管疾病或肝腎功能不全的患者; 合作性差，不能配合隨訪的患者; 未能簽署知情同意書的患者。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，并且所有患者和家屬均知情同意。收集前列腺癌患者的年齡、腫瘤直徑、Gleason評分、TNM病理分期、組織分化、轉(zhuǎn)移情況等。

1.2 方法

1.2.1 組織標(biāo)本的收集: 收集術(shù)中癌癥患者手術(shù)切除的前列腺癌組織和癌旁正常組織，以及良性前列腺增生患者的增生組織，術(shù)后立即于液氮速凍，然后放置于-80 ℃冰箱中保存待測。所有組織標(biāo)本均經(jīng)2名以上病理科專家確診。

1.2.2 實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)測定病理組織中LncRNA SChLAP1的表達(dá): 取出待測組織約50～100 mg, 用4 ℃預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，然后將組織置于Cryomill全自動冷凍研磨儀，加入液氮維持低溫，研碎組織成為微細(xì)顆粒狀，加入PE離心管。使用MiniBEST Plant RNAExtraction Kit試劑盒(日本TaKaRa公司)，根據(jù)說明書提供各組織樣本的總RNA。使用Nano Drop 2000分光光度計(jì)測定260、280 nm的吸光度(A)值，控制A260/A280在1.9～2.1, RNA 電泳檢測其完整性。以總RNA為模板，使用Fast Quant RT Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司]合成第一鏈cNDA。取出2 μL產(chǎn)物進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。qRT-PCR反應(yīng)體系: cDNA 1 μL, 2×Super Real Pre Mix Plus(SYBR Green)10 μL, 上下游引物各1 μL，補(bǔ)純凈水至20 μL。qRT-PCR反應(yīng)條件: 94 ℃ 預(yù)變性4 min, 94℃變性30 s, 60 ℃退火20 s, 72 ℃延伸60 s, 循環(huán)40次，采用2-△△Ct法計(jì)算待測樣本LncRNA SChLAP1的相對表達(dá)量。引物由天根生化科技(北京)有限公司合成，引物序列見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 治療與隨訪: 所有患者均行前列腺癌根治性切除術(shù)，并且根據(jù)《前列腺癌診斷治療指南(2014)》推薦的前列腺癌治療方案進(jìn)行術(shù)后對癥治療，包括化療、放療及不良反應(yīng)防控等。所有患者術(shù)后每3個月進(jìn)行電話隨訪，收集患者的總生存期(OS)和無病生存期(DFS)信息，隨訪截止日期為2021年6月30日或患者死亡。截至隨訪時，前列腺癌患者組共有56例患者生存, 42例患者死亡。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié) 果

2.1 前列腺癌組織、癌旁正常組織及良性前列腺增生組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平

前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平高于癌旁正常組織和良性前列腺增生組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 癌旁正常組織和良性前列腺增生組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

與前列腺癌組織比較, **P<0.01。

2.2 前列腺癌患者術(shù)后生存情況

98例患者術(shù)后隨訪時間為30～54個月，隨訪中位數(shù)為41個月。1、2、3年的無疾病生存率分別為84.69%(83/98)、65.31%(64/98)和46.94%(46/98), 總生存率分別為89.80%(88/98)、76.53%(75/98)和58.16%(57/98)。

2.3 LncRNA SChLAP1表達(dá)水平與前列腺癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平與患者腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Gleason評分相關(guān)(P<0.05), 而與患者的年齡和腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 LncRNA SChLAP1表達(dá)水平與前列腺癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

2.4 LncRNA SChLAP1表達(dá)水平對前列腺癌患者DFS和OS的影響

前列腺癌患者腫瘤組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平的中位值為3.565, 以LncRNA SChLAP1表達(dá)水平≥3.565為高表達(dá), <3.565為低表達(dá)。LncRNA SChLAP1高表達(dá)患者的FDS和OS低于LncRNA SChLAP1低表達(dá)患者(FDS:χ2=10.584,P<0.001; OS:χ2=17.964,P<0.001)。見圖2。

A: 不同LncRNA SChLAP1表達(dá)水平前列腺癌患者的DFS; B: 不同LncRNA SChLAP1表達(dá)水平前列腺癌患者的OS。

2.5 前列腺癌患者DFS和OS的影響因素

腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Gleason評分和LncRNA SChLAP1表達(dá)水平均為前列腺癌患者DFS和OS的影響因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 前列腺癌患者DFS影響因素的Cox回歸分析

表4 前列腺癌患者OS影響因素的Cox回歸分析

3 討 論

LncRNA是一類由超過200個核苷酸組成的RNA, 由于缺乏開放閱讀框而不能編碼蛋白質(zhì)，最初被認(rèn)為不具有生物學(xué)功能[9]。LncRNA 可通過與DNA、RNA或蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控基因的表達(dá)[10-11]。LncRNAs可以干涉調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和翻譯、調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、調(diào)控細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控、染色質(zhì)修飾和細(xì)胞核-細(xì)胞質(zhì)之間的運(yùn)輸?shù)榷喾N過程。LncRNA在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12], 并且在作為臨床預(yù)后標(biāo)志物及預(yù)測治療模式風(fēng)險(xiǎn)等方面起著非常重要的作用[13]。LncRNA在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，目前發(fā)現(xiàn)與前列腺癌相關(guān)的LncRNA主要包括PSLNR、GASL1、PANDAR和FEZF1-AS1等。

LncRNA SChLAP1, 也稱LINC00913, 位于2號染色體基因座，在前列腺癌呈現(xiàn)出高表達(dá)[14]。LncRNA SChLAP1的高表達(dá)與前列腺癌的臨床預(yù)后高度相關(guān)，可以作為患者預(yù)后不良的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測指標(biāo)[8, 15]。高表達(dá)LncRNA SChLAP1的患者更容易發(fā)展成致死性前列腺癌[16], 包括腫瘤的轉(zhuǎn)移和前列腺癌特異性死亡。李萍等[17]研究顯示, SChLAP1可以調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞的凋亡，而微小RNA-101-5p(miR-101-5p)是其下游的靶點(diǎn)之一。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1的表達(dá)水平較癌旁正常組織和良性前列腺增生組織顯著增加，與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。前列腺癌組織中LncRNA SChLAP1表達(dá)水平與患者腫瘤分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Gleason評分有關(guān)，提示LncRNA SChLAP1可能參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示, LncRNA SChLAP1高表達(dá)患者的FDS和OS較LncRNA SChLAP1低表達(dá)患者均顯著降低; Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析發(fā)現(xiàn), LncRNA SChLAP1表達(dá)水平均為前列腺癌患者DFS和OS的影響因素，表明LncRNA SChLAP1可作為前列腺癌臨床預(yù)后的評價(jià)指標(biāo)。

綜上所述, LncRNA SChLAP1在前列腺癌患者組織中呈高表達(dá)，并且可能與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其可作為前列腺癌的臨床預(yù)后評價(jià)指標(biāo)。