干濕生化分析系統檢測野生動物血液生化指標的比較分析

張秀秀，黃淑芳，鄭應婕，劉龍海，應志豪，龔利洋

(杭州動物園，浙江 杭州 310008)

隨著獸醫臨床檢測技術的不斷發展，越來越多的檢測儀器被用于獸醫實驗室檢測，大大豐富了實驗室檢測手段，但方法、儀器的多樣性必然導致檢測結果的差異[1]，給圈養野生動物檢測結果的解釋、臨床診斷及病情分析帶來了諸多不便。目前國內很多的醫院都同時擁有干濕化學分析儀[2-5]，干化學分析儀操作簡便 、試劑穩定[6]深受廣大動物園的歡迎。干化學法[7-8]是指將樣品(血清、血漿、尿液、腦脊液等)直接加入到固定的特定干載體的干試劑上，并以樣品中的水作為溶劑使樣品中的待測成分與試劑進行化學反應，從而進行分析的方法；濕化學法[9-10]即普通的化學反應則是在反應容器中加入液態試劑和樣品，混合后發生的化學反應。

杭州動物園于2020年2月購入愛德仕生化儀一臺，此前圈養野生動物生化檢測均送醫院用貝克曼濕式生化儀檢測，為了進一步了解和探究兩種檢測體系生化檢測結果的差異性和相關性，采集杭州動物園5種圈養野生動物的43個血清標本同時進行干式和濕式生化檢測，對部分檢測結果進行差異性和相關性比較分析，探究兩種檢測結果的可比性，積累杭州園圈養野生動物干式生化檢測數據。

1 材料和方法

1.1儀器與試劑 IDEXX Catalyst One生化分析儀(干式)，化學紙片由愛德士緬因生物制品貿易(上海)有限公司指定代理商上海華澍生物科技有限公司提供。BACKMAN Coulter AU5800生化分析儀(濕式)，化學試劑由上海科華生化技術股份有限公司提供。

1.2研究對象 采集杭州動物園亞洲象、羊駝、黑猩猩、梅花鹿、小熊貓等5種圈養野生動物的新鮮血清樣本43份，分別在IDEXX Catalyst One生化分析儀和BACKMAN Coulter AU5800生化分析儀上測定ACT、AST、GGT、AKP、LDH、GLU、TP、ALB、TBIL、UREA、CREA、CK、CA、PHOS、MG、K、Na、CL等18項生化指標。

1.3統計學處理 采用SPSS 21.0軟件進行數據分析。對43個血清樣本用獨立樣本t檢驗進行差異性分析，以干式生化檢測結果(y)和濕式檢測結果(x)為雙變量得出相關系數并進行相關分析，用直線回歸方法得出回歸系數及回歸方程。

2 結果

2.1小熊貓血清樣本比較 對6只小熊貓11個血清樣本進行了分析比較，除LDH、ALB、GLOB、FRU、CREA、MG、K、NA等8項檢測結果顯著差異(P<0.05)或極顯著差異(P<0.001)外，其余10項檢測結果均無顯著差異(表1)。相關性分析中LDH、GLOB、NA、CL等4項檢測結果無顯著相關，其余14項檢測結果在0.01水平(雙側)或0.05水平(雙側)極顯著相關(表2)，ALT、AST、ALB、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等8項檢測結果線性擬合度較高(R2>0.90)；ALT、AST、CK、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等9項檢測結果無顯著差異并且顯著相關。

表1 小熊貓血清樣本兩種不同檢測方法的差異性比較

表2 小熊貓血清樣本兩種不同檢測方法的相關及回歸分析

2.2黑猩猩血清樣本比較 4只黑猩猩7個血清樣本的分析比較，除GGT、CK顯著差異(P<0.05)外，其余18項檢測結果均無顯著差異(表3)；相關性比較中可見CK、CA、ALB、TBIL、CA、ALT、AST等7項檢測結果無顯著相關，其中ALT、AST呈負相關且不顯著，其余13項檢測結果均顯著相關(表4)；AKP、K線性擬合度較高；AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、CREA、TRIG、CA、PHOS、MG、K、NA等13項檢測結果無顯著差異并且顯著相關。

表3 黑猩猩血清樣本兩種不同檢測方法的差異性比較

2.3亞洲象血清樣本比較 1頭亞洲象7個血清樣本的分析比較，16項生化檢測結果差異性分析中GGT、ALB、GLOB、TBIL等4項檢測結果顯著或極顯著差異，其余12項檢測結果均為無顯著差異(表5)；相關分析中TBIL、CREA無顯著相關，其余14項檢測結果均顯著或極顯著相關(表6)；AKP、TP、ALB、GLU、UREA、CA、MG等7項檢測結果線性擬合度較好；AKP、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS、MG、K、NA、CL等11項檢測結果無顯著差異并且顯著相關。

表4 黑猩猩血清樣本兩種不同檢測方法的相關性分析

表5 亞洲象血清樣本兩種不同檢測方法的差異性比較

表6 亞洲象血清樣本兩種不同檢測方法相關性分析

2.4羊駝血清樣本比較 對3只羊駝9個血清樣本16個檢測項目的檢測結果分析，差異性比較中除LDH顯著差異外，其余15項檢測結果均無顯著差異(表7)；相關比較中TP、GLOB、CA、MG、NA、CL等6項檢測結果無顯著相關外，其余10項檢測結果均顯著相關(表8)；AST、AKP、GLU、UREA、PHOS等5項檢測結果線性擬合度較好；AST、GGT、AKP、ALB、GLU、CREA、UREA、PHOS、K等9項檢測結果無顯著差異并且顯著相關。

表7 羊駝血清樣本兩種不同檢測方法的差異性比較

表8 羊駝血清樣本兩種不同檢測方法相關性分析

2.5梅花鹿血清樣本比較 7只梅花鹿9個血清樣本15項檢測結果中，差異性比較可見CREA、NA、CL檢測結果差異極顯著，其余12項檢測結果無顯著差異(表9)；相關分析中ALT、ALB、CREA、CA、NA、CL等6項檢測結果無顯著相關，其余9項檢測結果均為極顯著相關(表10)；GGT、AKP、TP、GLOB、GLU、UREA、PHOS等7項檢測結果線性擬合度較好；GGT、AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、UREA、PHOS、K等9項檢測結果無顯著差異并且顯著相關。

表9 梅花鹿血清樣本兩種不同檢測方法的差異性比較

表10 梅花鹿血清樣本兩種不同檢測方法相關性分析

3 討論

本實驗的研究結果表明：同種動物同一血清樣本的干式和濕式生化檢測結果半數及以上檢測結果無顯著差異并且顯著相關，其中GLU、UREA、PHOS在5種動物的干濕生化比較中均無顯著差異并且顯著相關。這與有關報道關于人的干、濕化學法生化檢測結果無顯著相關性[11-12]有所差異，與豬的血清干、濕式生化12項檢測結果中有6項檢測結果間無顯著差異[13]一致。

本次實驗的生化檢測結果顯示干、濕生化檢測體系的部分檢測結果具有可比性，小熊貓的檢測結果中ALT、AST、CK、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等9項檢測結果具有可比性，黑猩猩的檢測結果中AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、CREA、TRIG、CA、PHOS、MG、K、NA等13項檢測結果具有可比性，亞洲象的檢測結果中AKP、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS、MG、K、NA、CL等11項檢測結果具有可比性，羊駝的檢測結果中AST、GGT、AKP、ALB、GLU、CREA、UREA、PHOS、K等9項檢測結果具有可比性，梅花鹿的檢測結果中GGT、AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、UREA、PHOS、K等9項檢測結果具有可比性， GLU、UREA、PHOS此三項的干濕生化結果在亞洲象、羊駝、黑猩猩、梅花鹿、小熊貓5種動物之間均具有可比性。在進行病情分析和疾病診斷時可參考具有可比性生化指標，但為了準確分析生化檢測結果，建議使用動物用生化儀進行生化檢測，同時建立干、濕生化檢測結果參考范圍，以便應用于臨床診斷和疾病的治療。

部分檢測項目差異顯著，無顯著相關，分析原因可能是：一是本次實驗僅采集到了43個血清樣本，同種動物的血清樣本量依然偏少，少量的樣本量不足以反映總體的真實情況；二是干式生化結果是在動物園內完成生化檢測，而濕式生化結果則是在醫院內完成，兩臺儀器所處的環境不同，可能造成實驗結果的不同，有研究顯示不同溫度和濕度會造成生化檢驗結果的差異[14-15]；三是干式生化儀與濕式生化儀的各檢測項目的工作原理及方法不同[16]，動物的血清樣本與人的血清樣本之間存在某些差異，部分野生動物的血清生化檢測項目需要進一步探討完善。

在以后的工作中要進一步做針對性的探究，通過增加同種實驗動物的血清樣本數量、評估兩種分析系統常規生化項目批內及批間精密度、對比參考動物血清干濕生化分析結果、改變統計方法等方式，減少實驗誤差和系統誤差，盡可能反映樣本的真實情況。