木棉花水提物的急性毒性試驗

陳雯玲，楊 斌，謝仕源

（廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西 南寧 530021）

木棉花（Kapok）又名班枝花、瓊枝、攀枝花，是木棉科植物木棉[Gossampinusmalabarica（DC.）Merr.]的花。藥性甘、淡、涼，具有保肝、抗腫瘤的作用，以及清熱、利濕的功效。木棉花主要產(chǎn)于云南、廣東等地[1]，是我國南方地區(qū)及東南亞國家民間常用藥材[2]。現(xiàn)代藥化、藥理研究表明[3，4]，木棉花富含黃酮、碳水化合物、甾醇、糖苷、生物堿、揮發(fā)油、酚類化合物，其保健價值較高，并且在安全性方面具有明顯的優(yōu)勢，其應用前景廣闊。雖然目前已有文獻證明木棉花安全無毒[3]，但鮮有文獻報道木棉花水提物的最大用藥劑量。藥物需通過藥物毒理學研究來確定其安全性，而急性毒性試驗是藥物毒理學研究的重要內(nèi)容之一。本試驗探究最大濃度的木棉花水提物是否具有毒性，為后續(xù)的實驗研究確定木棉花水提物的用藥劑量提供重要的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF 級昆明小鼠32 只，雌雄各半，3～4 周齡，18～22 g。由廣西醫(yī)科大學動物實驗中心（許可證號碼：SYXK 桂2020-0003）提供實驗動物使用許可證號：SYXK 桂2020-0004。并分籠飼養(yǎng)于動物房，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為24 ℃～26 ℃，其相對濕度為50%～60%，通風性良好，每日光照盡量控制在12 h，晝夜交替。本實驗已獲得廣西醫(yī)科大學實驗動物倫理委員會批準，各項指標均符合規(guī)定。

1.2 材料 木棉花干（廣西西林縣瑞桂吉純生態(tài)木棉有限公司）；電子天平（梅特勒-托利多上海公司，型號：AL204/01）

1.3 實驗方法 參考《中藥、天然藥物急性毒性試驗技術指導原則》和陳奇《中藥藥理實驗方法學》，對木棉花水提物進行急性毒性試驗研究。

1.3.1 木棉花水提物的制備 用電子天平稱取適量木棉花干品，加8 倍量蒸餾水浸泡1 h 后補足至12倍量的水，常壓下回流提取2 次，2 h/次，合并2 次提取液進行減壓濃縮至流浸膏，最終生藥量濃度為1.5 g/ml。

1.3.2 預實驗 健康昆明小鼠6 只（雌雄各半），給藥濃度為含生藥量1.5 g/ml，灌胃體積0.4 ml/10 g 的木棉花水提物，每24 h 對小鼠進行灌胃2 次，每次間隔12 h，1 d 內(nèi)的總給藥劑量為120 g/kg。給藥后觀察3 d，并常規(guī)飼養(yǎng)。觀察小鼠的毒性反應，包括感覺、呼吸、運動、皮毛、眼瞼、進食、糞便、死亡等，并對小鼠連續(xù)稱重7 d。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠在第1 次給藥后未出現(xiàn)異常，在第2 次給藥10 min 后，活動稍微減少，4 h 后部分小鼠排出了干燥、黑硬的糞便；給藥第2 天小鼠進食相對第1 天減少，但之后又快速恢復；給藥第3 天觀察結(jié)束時，未發(fā)現(xiàn)小鼠有死亡的情況，且反應靈敏，活動正常。表明給予以本實驗制得的木棉花水提物以最大給藥量120 g/kg 時小鼠未出現(xiàn)明顯異常和死亡，且無法測得半數(shù)致死量（LD50）。因此，本實驗采用最大給藥量的方法進行試驗。

1.3.3 正式實驗 最大給藥量測定：選用健康小鼠32只，雌雄各半，按完全隨機法分為兩組，空白組及給藥組各16 只。適應性生長時間為2 d。給藥前禁食12 h，自由飲水。稱取給藥前小鼠的體重，隨后給藥。給藥組小鼠每次按照0.4 ml/10 g 體積和1.5 g/ml 生藥濃度給予木棉花水提物灌胃，每24 h 對小鼠進行灌胃2 次，每次間隔時間控制為12 h，用藥劑量合計為120 g/kg。空白組小鼠每次按照0.4 ml/10 g 灌胃體積給予生理鹽水灌胃，灌胃的次數(shù)和給藥時間間隔同給藥組。給藥期間分別于第1、5、10、14 天稱取小鼠的體重。給藥后的小鼠正常飼養(yǎng)14 d 后處死小鼠。觀察小鼠的活動、精神、攝食、排泄及死亡情況。觀察期間出現(xiàn)死亡小鼠及時進行解剖，觀察其器官有無異常，并稱取空白組和給藥組小鼠的心、肝、脾、肺、腎和胸腺的濕重。計算其臟器指數(shù)，臟器指數(shù)=（臟器濕重/體重）×100%。

1.4 觀察指標 觀察各組一般狀態(tài)及毒性表現(xiàn)，包括皮膚、被毛、眼睛、黏膜的改變，以及呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、軀體運動及行為模式等變化發(fā)生時間、嚴重程度和持續(xù)時間，其觀察指標出現(xiàn)的癥狀和涉及的系統(tǒng)，參考《中藥、天然藥物急性毒性試驗技術指導原則》，見表1。臟器觀察：所有動物在試驗終點時進行大體解剖，包括檢查體表及體腔開孔、胸靜脈等，及時稱量各主要臟器，如：心、肝、脾、肺、腎、胸腺的濕重。

表1 急性毒性試驗的一般觀察結(jié)果與可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)

2 結(jié)果

2.1 一般觀察情況 每次給藥10 min 左右對試驗小鼠進行觀察，發(fā)現(xiàn)小鼠活動相對稍減，4 h 后隨即恢復正常。在給藥的第2 天，小鼠的食量明顯下降，隨后又呈增長趨勢；且無腹瀉等情況，其活動、呼吸均為正常。給藥后小鼠外觀毛色依然光亮，無焦躁不安或精神萎靡的狀況出現(xiàn)；無豎毛，分泌物也未出現(xiàn)異常，無凸眼和扭體等反應；攝食、飲水均正常。觀察期間小鼠未出現(xiàn)死亡的情況。

2.2 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠體重的影響給藥期間兩組小鼠的體重雖均稍有波動，但總體均呈增長的趨勢。兩組第1、5、10、14 天體重分別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2、圖1。

圖1 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠體重的影響

表2 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠體重的影響（n=16，）

表2 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠體重的影響（n=16，）

2.3 肉眼觀察解剖情況 給藥14 d 后將小鼠通過頸椎脫臼術處死，隨后對小鼠進行大體解剖，并用肉眼觀察小鼠的心、肝、脾、肺、腎、胸腺，結(jié)果顯示，未出現(xiàn)出血、充血、水腫改變，見圖2。

圖2 木棉花水提物對急性毒性試驗雌性小鼠臟器的影響

2.4 兩組臟器指數(shù)比較 兩組肝臟、脾臟、胸腺、心臟、肺、左腎、右腎指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3、圖3。

表3 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠臟器指數(shù)的影響（，%）

表3 木棉花水提物對急性毒性試驗小鼠臟器指數(shù)的影響（，%）

圖3 木棉花水提物對急性毒性試驗雌性小鼠臟器指數(shù)的影響

3 討論

木棉花茶廣泛用于民間，我國居民常將其晾干后泡水服用或煲湯食用。廣東等地生產(chǎn)的五花茶涼茶，由木棉花與金銀花、菊花、雞蛋花、槐花配制而成，深受消費者喜愛[5]。在我國南方木棉花最先主要作為中藥材使用，逐漸發(fā)展到藥用與食用并重，具有清熱解毒，祛風除濕等功效，可治療發(fā)熱、痢疾、腹瀉和慢性炎癥等[6]。不僅如此，現(xiàn)代藥理學研究表明，木棉花具有多種藥理活性，如抗氧化[7]、降糖[8]、抗炎鎮(zhèn)痛[9]、保護腎臟[10]、抗焦慮[11]、保護肝臟[12，13]、抗癌[14]、護胃[15]、心臟保護[16，17]、抗衰老[18]等作用。由此可見，木棉花不僅具有較高的營養(yǎng)價值和保健作用，還具有一定的藥效。因此，木棉花的藥用價值顯而易見，故探究木棉花的藥物安全性作用顯得尤為重要。本試驗通過最大給藥量的方法探究最大濃度的木棉花水提物是否具有毒性。在給藥的第2 天，小鼠的食量明顯下降，隨后又呈增長趨勢，其他觀察指標無明顯異常，故食量下降推測為小鼠適應的過程。在觀察小鼠體重變化過程中，通過對空白組和給藥組小鼠體重進行分析，結(jié)果顯示兩組不同時間體重比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明木棉花水提物對小鼠體重變化無影響。給藥14 d 后，將小鼠大體解剖后用肉眼觀察重要臟器，結(jié)果未出現(xiàn)出血、充血、水腫改變，說明肉眼觀察木棉花水提物對小鼠的臟器無影響。兩組肝臟、脾臟、胸腺、心臟、肺、左腎、右腎指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明木棉花水提物最大給藥劑量的情況下小鼠臟器指數(shù)無明顯改變。試驗過程中無小鼠死亡，無法測得半數(shù)致死量，說明本試驗中的木棉花水提物，在給予小鼠灌胃劑量為120 g/kg 時無明顯毒性。馮丁山等[6]將10 g 新鮮的木棉花，制成1 g 的木棉花干粉，通過急性毒性試驗，得出在其試驗劑量范圍內(nèi)對雌、雄小鼠的急性經(jīng)口最大耐受量（MTD）均＞80.00 g/（kg·BW），為實際無毒，從而證明木棉花對試驗動物未見明顯毒副作用。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果基本一致。

綜上所述，木棉花干水提物最大給藥劑量的情況下，口服無明顯毒性作用。