外周血T 細胞亞群在不同分期及H ans分型的彌漫大B 細胞淋巴瘤的表達與意義

郭 旦，周 露，曹琬琪，張 輝

（南華大學衡陽醫學院附屬邵陽醫院血液腫瘤科，湖南 衡陽 421001）

淋巴瘤（lymphoma）是我國常見的惡性腫瘤，每年發病人數大約為7.45 萬，發病率4.75/10 萬，死亡率2.64/10 萬[1]。彌漫大B 細胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphpma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma，NHL）中最常見的種類，占NHL 的30%～40%[2]。DLBCL 在生物學特性、免疫表型和預后方面存在明顯差異，具有高度異質性和侵襲性，患者治療后的復發率及死亡率都很高[3]。針對DLBCL 的國際預后指數（international prognostic Index，IPI），根據患者的年齡、分期、ECOG 評分、結外病變和乳酸脫氫酶的特點分為低危（0～1 分），低中危（2 分），高中危（3 分），高危（4～5 分）[4]。近年來，CD20 陽性靶向藥物利妥昔單抗逐漸被應用于臨床，為了更好的評估患者化療后的預后，IPI 評分系統也得到了不斷的完善，如改良后IPI（R-IPI）、年齡相關的IPI（aa-IPI）、NCCN 數據庫版（NCCN-IPI）。越來越多學者發現患者機體的免疫功能跟患者疾病的預后息息相關，在免疫功能方面的研究日益受到重視。本研究通過收集2019 年9 月-2021 年2 月南華大學衡陽醫學院附屬邵陽醫院56 例不同分期、Hans 分型的DLBCL 患者，以及34 例健康體檢者的外周血T 細胞亞群的指標資料進行分析，旨在探討患者免疫狀態的變化情況，為臨床更好的精準診治提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019 年9 月-2021 年2 月在南華大學衡陽醫學院附屬邵陽醫院血液腫瘤科經病理活檢診斷的DLBCL 患者56 例為觀察組，同期34 例體檢中心的健康體檢者為對照組。觀察組男30 例，女26 例；年齡18～79 歲，平均年齡（60.55±13.83）歲；疾病分期：Ⅰ期12 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期17 例，Ⅳ期7 例。將DLBCL 患者組按照Hans 模型分類：GCB亞型陽性24 例，non-GCB 亞型陽性32 例。對照組男16 例，女18 例；年齡20～78 歲，平均年齡（56.19±14.74）歲。兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經過南華大學衡陽醫學院附屬邵陽醫院倫理委員會批準，研究對象知情同意并簽署同意書。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 年齡18～80 歲。

1.2.2 排除標準 ①嚴重的感染、心肝腎功能損傷及其他惡性腫瘤和免疫系統性疾病者；②有精神病史者；③有認知障礙者；④妊娠或哺乳期者。

1.3 方法 研究對象在無菌條件下采集空腹外周血2 ml，采取3.8%乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，加入不同熒光標記的單克隆抗體，放入帶有微球的樣品管內上清式細胞儀檢測外周血指標CD3+、CD4+、CD8+細胞百分數與CD4+/CD8+比值[5，6]。比較兩組外周血T細胞亞群指標水平，分析不同分期及Hans 亞型組的DLBCL 患者上述指標的差異，以及外周血T 細胞亞群各個指標與DLBCL 的關系。將DLBCL 按Hans 模型分類，通過檢測DLBCL 標志物CD10、BCL-6、MUM1 的表達情況對觀察組進行分型，即CD10 陽性為GCB 亞型，CD10 與BCL-6 均陰性為non-GCB 亞型，如果CD10 陰性、BCL-6 陽性，則MUM1 陽性為non-GCB型，MUM1 陰性為GCB型[7]。

1.4 統計學方法 采用SPSS 25.0 軟件處理數據，計量資料用（）表示，組間比較采用獨立t檢驗、單因素方差分析、Mann-WhitneyU檢驗，采用二元Logistic 回歸分析外周血T 細胞亞群指標與DLBCL的關系。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血T 細胞亞群指標水平比較 觀察組的外周血T 細胞亞群指標CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組，CD8+高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組外周血T 細胞亞群指標水平比較（）

表1 兩組外周血T 細胞亞群指標水平比較（）

2.2 不同分期的觀察組外周血T 細胞亞群與對照組比較 觀察組Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期CD3+、CD4+/CD8+低于對照組；觀察組Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期CD4+低于Ⅰ期觀察組；觀察組Ⅲ期及Ⅳ期CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于Ⅱ期觀察組，CD8+高于Ⅱ期觀察組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組不同分期外周血T 細胞亞群與對照組比較（）

表2 觀察組不同分期外周血T 細胞亞群與對照組比較（）

2.3 不同Hans 亞型組外周血T 細胞亞群比較 觀察組中non-GCB 亞型組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于GCB 亞型組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同Hans 亞型組外周血T 細胞亞群比較（）

表3 不同Hans 亞型組外周血T 細胞亞群比較（）

2.4 外周血T 細胞亞群各個指標與DLBCL 的關系分析 以是否患有DLBCL 為因變量，自變量為患者年齡及外周血T 細胞亞群指標建立Logistic 回歸模型，結果顯示，CD3+、CD4+水平降低，CD8+水平升高均是DLBCL 發生的獨立危險因素，見表4。

表4 外周血T 細胞亞群各個指標與DLBCL 的關系分析

3 討論

DLBCL 的發生發展往往伴隨著患者體內免疫功能的紊亂、T 淋巴細胞水平的變化[8]。T 淋巴細胞是機體內重要的免疫細胞，主要有輔助和誘導免疫應答，殺傷靶細胞和抑制免疫應答的功能[9]。CD3+細胞存在于T 細胞的表面，CD3+的水平與T 細胞的功能密切相關，CD3+分子的數量與T 細胞的功能成正相關。CD3+細胞包括CD4+和CD8+細胞兩種亞群，CD4+細胞可分泌大量淋巴因子，能促進其他淋巴細胞與吞噬細胞的活性，增強抗腫瘤效應[10]。CD8+細胞對靶細胞起細胞介導的細胞毒作用，同時能調節抑制CD4+細胞[11]。有研究表明[12]，CD4+/CD8+可反映機體的免疫功能狀態，CD4+/CD8+比值降低，說明免疫水平下降，可能為腫瘤的轉移及復發起到促進作用。本研究結果顯示，觀察組外周血T 細胞亞群指標CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組，CD8+高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期CD3+、CD4+/CD8+低于對照組；觀察組Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期CD4+低于Ⅰ期觀察組；觀察組Ⅲ期及Ⅳ期CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于Ⅱ期觀察組，CD8+高于Ⅱ期觀察組，差異有統計學意義（P＜0.05），表明DLBCL 患者體內的免疫系統功能受損嚴重程度隨著疾病臨床分期的增加而增加。Hou H 等[13]的研究結果表示疾病的分期越高，同樣經過標準治療后的預后越差，并認為這主要歸因于國際預后指數（IPI）評分評估的預后風險較高的患者免疫力較健康人群偏低。Zschoche M 等[14]在組織病理特征和臨床分期于淋巴瘤的影響的研究也顯示這兩者均影響患者預后生存，Ann Arbor 階段IE 的患者比處于IE 以上的階段的患者預后顯著更好（P=0.048）。劉衛平等[15]研究結果示IPI 分層中,低危、低中危和高中危組患者的5 年OS 率分別為95%、38%和60%（P＜0.001）。許昕等[16]通過檢測T 細胞亞群細胞絕對值計數在DLBCL 患者疾病分期的研究表示DLBCLⅠ、Ⅱ、Ⅲ期患者CD4+細胞數均低于正常對照組（P=0.170、0.011、0.019），CD4+/CD8+低于正常對照組（P=0.009）?？梢奃LBCL 患者體內的免疫功能狀態發生著動態變化，且隨著疾病臨床分期的增加，免疫抑制與紊亂越重。

根據DLBCL 的基因表達譜不同將DLBCL 可分成3 類：生化中心B 細胞樣（GCB）、活化B 細胞樣（ABC）和第3型DLBCL（Type3 DLBCL），是影響DLBCL 預后的重要因素[17，18]。由于基因表達譜的技術復雜及費用昂貴，臨床上很難推廣使用。有研究發現根據DLBCL 免疫組化標志物法（CD10、BCL6、MUM1）將DLBCL 分為GCB 樣亞型和非GCB 樣亞型，可以獲得跟基因表達譜類似的疾病預后評估效果[19，20]。本研究結果顯示在疾病的Hans 分型中，non-GCB 亞型組CD3+（75.75±8.46）%、CD4+（44.83±11.33）%、CD4+/CD8+（1.31±0.54）低于GCB亞型組的（71.56±6.98）%、（36.03±13.72）%、（0.93±0.49）%，non-GCB 亞型組CD8+（37.33±9.52）%則高于non-GCB 組的（42.97±10.23）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。Hans CP[21]對142 例DLBCL 患者的研究發現，BCL-6 陽性與CD10 陽性單獨表達均提示預后良好。李曉妹[22]發現中樞神經系統DLBCL 中主要以活化的B 細胞亞型（ABC/non-GCB）多見，且該分型存在C-MYC/BCL-2/BCL-6 三表達患者與非三表達患者相比呈現預后更差的趨勢,王晶[23]在關于MYC 和BCL2 在DLBCL 中的應用研究中得到了一致的結論。以上表明T 細胞亞群與DLBCL 的免疫分型（Hans 分型）在提示患者預后方面可能有關聯。研究進一步行Logistic 回歸分析顯示，CD3+、CD4+水平降低，CD8+水平升高均是DLBCL 發生的獨立危險因素。說明上述指標在DLBCL 的診斷中提示的價值較高。

綜上所述，隨著DLBCL 的發生發展，患者體內的免疫功能受損嚴重程度隨著疾病臨床分期的增加，免疫抑制與紊亂逐步加重。T 細胞亞群的檢測具有方便采集、觀察，患者依從性較高等優點，臨床上有望將T 細胞亞群水平的變化作為臨床上判斷DLBCL 患者病情、療效甚至預后評估的指標，為精準醫療提供參考。