急性ST 段抬高型心肌梗死患者miR-199a-5p/Sirt1 的變化及臨床意義

賈美麗，王立波

（1.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)一科，黑龍江 佳木斯 154002）

急性ST 段抬高型心肌梗死（acute ST-elevation myocardial infarction，STEMI）的病情危重、起病急、預(yù)后差、病死率高[1，2]，需要準(zhǔn)確評(píng)估STEMI 的病情、預(yù)測(cè)STEMI 的預(yù)后。但目前STEMI 的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，研究在STEMI 發(fā)病過程中起關(guān)鍵作用的分子，有助于闡明疾病發(fā)病機(jī)制、發(fā)現(xiàn)評(píng)價(jià)STEMI 病情及預(yù)后新的標(biāo)志物。近些年，微小RNA（microRNA，miR）在心血管疾病中的作用受到越來越多關(guān)注。miR-199a 是一類具有促凋亡、促炎、促氧化應(yīng)激作用的miR，沉默信息調(diào)節(jié)因子相關(guān)酶1（silent information regulator transcript-1，Sirt1）是miR-199a 的靶基因之一。miR-199a-5p/Sirt1 軸在多種心血管系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用，參與心力衰竭、心肌纖維化、心肌肥大等的調(diào)控[3]，但miR-199a-5p/Sirt1 軸在STEMI 中的作用尚不清楚。基于此，本研究觀察miR-199a-5p/Sirt1 在STEMI 發(fā)病中的作用及臨床意義，旨在為該病的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020 年12 月-2021 年6 月在佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院接受PCI 治療的60 例STEMI患者作為STEMI 組。入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合STEMI 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②首次發(fā)病；③發(fā)病后12 h 內(nèi)接受PCI 且手術(shù)成功；④臨床資料及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有心肌梗死、腦梗死病史；②合并惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病；③合并肝腎功能異常。另取同期在我院體檢的60 例健康志愿者作為對(duì)照組。STEMI 組男34 例，女26 例；年齡46～65 歲，平均年齡（58.59±10.39）歲。對(duì)照組男35 例，女25 例；年齡45～65 歲、平均年齡（56.52±11.24 歲）。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象知情同意并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 Gensini 評(píng)分 根據(jù)PCI 術(shù)中情況分為單支病變和多支病變，進(jìn)行Gensini 評(píng)分：管腔狹窄1%～25%為1 分、26%～50%為2 分、51%～75%為4 分、76%～90%為8 分、91%～99%為16 分、100%（即閉塞）為32 分，左主干狹窄×5、左前降支近段或左回旋支近段×2.5、左前降支中段×1.5、左前降支遠(yuǎn)段及左回旋支中遠(yuǎn)段及右冠狀動(dòng)脈近、中、遠(yuǎn)段后降支×1、其他小分支×0.5。

1.2.2 血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平的檢測(cè) 入院后即刻采集STEMI 組患者的肘靜脈血3～5 ml，體檢時(shí)采集對(duì)照組志愿者的肘靜脈血3～5 ml，采用全血RNA 提取分離試劑盒（北京天根公司）分離外周血RNA，而后采用cDNA 第一鏈合成試劑盒（北京天根公司）將靜脈血中提取得到的RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后采用熒光定量檢測(cè)試劑盒（北京天根公司）進(jìn)行熒光定量PCR 檢測(cè)，反應(yīng)體系如下：cDNA 2 μl、試劑盒內(nèi)反應(yīng)液10 μl、10 μmol/L 上下游引物各0.4 μl、去離子水補(bǔ)足至20 μl，分別在熒光定量PCR 儀（Bio-rad 公司）中擴(kuò)增目的基因miR-199a-5p 及內(nèi)參基因U6、目的基因Sirt1 及內(nèi)參基因β-actin，反應(yīng)程序如下：95 ℃，15 min 后94 ℃20 s、60 ℃34 s，重復(fù)40 個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后生成循環(huán)曲線并得到循環(huán)閾值，以U6 為內(nèi)參、計(jì)算miR-199a-5p 的表達(dá)量，以β-actin 為內(nèi)參、計(jì)算Sirt1 的表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組外周血miR-199a-5p、Sirt1 的表達(dá)水平，觀察STEMI 患者PCI 后6 個(gè)月主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE）發(fā)生情況。MACE 的隨訪方法如下：PCI 術(shù)后6 個(gè)月時(shí)進(jìn)行回訪，隨訪內(nèi)容為是否發(fā)生MACE，MACE 包括再次血運(yùn)重建、再發(fā)心絞痛、非致命性心肌梗死、心源性死亡、非致死性卒中。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行分析，STEMI 組與對(duì)照組、單支病變與多支病變STEMI患者、Gensini 積分0～40 分與＞40 分STEMI 患者miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)的差異比較采用t檢驗(yàn)；通過Pearson 檢驗(yàn)分析miR-199a-5p、Sirt1 的相關(guān)性；通過ROC 曲線分析miR-199a-5p、Sirt1 對(duì)MACE的預(yù)測(cè)價(jià)值，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 STEMI 組與對(duì)照組外周血miR-199a-5p、Sirt1表達(dá)水平的比較STEMI 組患者外周血miR-199a-5p的表達(dá)水平高于對(duì)照組，血清Sirt1 含量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組外周血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平的比較（）

表1 兩組外周血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平的比較（）

2.2 STEMI 組中不同病情患者外周血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平的比較 STEMI 組中多支病變患者外周血miR-199a-5p 的表達(dá)水平高于單支病變患者、外周血中Sirt1 的表達(dá)水平低于單支病變患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Gensini 積分＞40 分患者外周血miR-199a-5p 的表達(dá)水平高于Gensini 積分0～40分患者，外周血中Sirt1 的表達(dá)水平低于Gensini 積分0～40 分患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 STEMI 組中不同病情患者外周血miR-199a-5p、Sirt1表達(dá)水平的比較（）

表2 STEMI 組中不同病情患者外周血miR-199a-5p、Sirt1表達(dá)水平的比較（）

注：與單支病變患者比較，*P＜0.05；與Gensini 積分0～40 分患者比較，#P＜0.05

2.3 STEMI 組外周血miR-199a-5p 表達(dá)水平與外周血中Sirt1 表達(dá)水平的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 檢驗(yàn)，STEMI 組患者外周血miR-199a-5p 表達(dá)水平與外周血中Sirt1 表達(dá)水平負(fù)相關(guān)（r=-0.519，P＜0.05），見圖1。

圖1 STEMI 組外周血miR-199a-5p 表達(dá)水平與外周血中Sirt1 表達(dá)水平的相關(guān)性

2.4 STEMI 組不同miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平患者預(yù)后的比較 STEMI 組在發(fā)生MACE 患者外周血miR-199a-5p 的表達(dá)水平較未發(fā)生MACE 患者升高、外周血中Sirt1 的表達(dá)水平較未發(fā)生MACE 患者降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 STEMI 組miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平與MACE 的關(guān)系（）

表3 STEMI 組miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平與MACE 的關(guān)系（）

2.5 外周血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平預(yù)測(cè)STEMI 預(yù)后的ROC 曲線分析 經(jīng)ROC 曲線分析，外周血miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)水平對(duì)STEMI 預(yù)后發(fā)生MACE 具有預(yù)測(cè)價(jià)值，曲線下面積分別為0.870、0.730，靈敏度分別為82.93%、60.98%，特異性分別為78.95%、73.68%，見圖2。

圖2 外周血miR-199-5p、Sirt1 表達(dá)水平預(yù)測(cè)STEMI 預(yù)后的ROC 曲線

3 討論

STEMI 是冠心病的嚴(yán)重類型，具有急性發(fā)作、病情重、預(yù)后差的特點(diǎn)。PCI 是治療STEMI 的有效手段，再通冠脈的效果確切，極大的降低了疾病的致殘率及死亡率。但部分STEMI 患者PCI 術(shù)后遠(yuǎn)期會(huì)發(fā)生心血管事件，影響疾病的近期預(yù)后并增加死亡率。Gershlick AH 等[5]及Kim YH 等[6]的研究顯示，STEMI 患者在PCI 術(shù)后6～12 個(gè)月內(nèi)心血管事件的發(fā)生率為15%～30%。因此，早期評(píng)估STEMI 病情、預(yù)測(cè)PCI 術(shù)后無復(fù)流及心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，有助于及早進(jìn)行干預(yù)和防治，進(jìn)而改善疾病預(yù)后。

近年來，隨著心血管疾病相關(guān)基礎(chǔ)研究的不斷拓展，關(guān)于STEMI 發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)也不斷深入。miR是心血管領(lǐng)域的熱門分子，具有廣泛的生物學(xué)作用，在STEMI 發(fā)病過程中參與細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、細(xì)胞自噬等多個(gè)生物學(xué)過程的調(diào)控[7-10]。miR-199a-5p 在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要調(diào)控作用。Liu DW 等[11]的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，缺氧復(fù)氧的心肌細(xì)胞中miR-199a-5p 表達(dá)增加，敲低miR-199a-5p 的表達(dá)能夠減輕缺氧復(fù)氧引起的心肌細(xì)胞損傷；Zhong Z 等[12]和Xue S 等[13]的研究均發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者外周血中miR-199a-5p 的表達(dá)水平明顯增加。本研究也證實(shí)，STEMI 患者外周血miR-199a-5p 的表達(dá)水平較健康志愿者增加，表明miR-199a-5p 表達(dá)增加與STEMI 的發(fā)病有關(guān)，STEMI發(fā)病后缺血缺氧刺激可能造成miR-199a-5p 表達(dá)增加、而高表達(dá)的miR-199a-5p 能夠引起心肌細(xì)胞損傷。

目前，miR-199a-5p 在急性心肌梗死發(fā)病及病情發(fā)展中的作用及機(jī)制尚不十分清楚。Sirt1 是已知的miR-199a 靶基因，Yin WL 等[14]和Chen J 等[15]的研究分別在大腦缺血再灌注損傷模型和宮內(nèi)生長受限模型中證實(shí)了miR-199a-5p 對(duì)Sirt1 的靶向調(diào)控作用。此外，張灼等[3]的研究以心力衰竭大鼠模型為對(duì)象，證實(shí)了miR-199a-5p 靶向抑制Sirt1 的表達(dá)并促進(jìn)心肌纖維化。以上結(jié)果提示靶向Sirt1 可能是miR-199a-5p 參與STEMI 發(fā)病的分子機(jī)制。Sirt1 具有去乙酰化酶的活性，在心肌缺血再灌注損傷過程中發(fā)揮抗炎、抗凋亡、抗氧化等保護(hù)作用。已有臨床研究證實(shí)，心肌梗死、腦梗死患者外周血中Sirt1 含量降低[16，17]。本研究證實(shí)STEMI 患者外周血Sirt1 的表達(dá)水平較健康志愿者降低且與miR-199a-5p 負(fù)相關(guān)，表明STEMI 發(fā)病過程中高表達(dá)的miR-199a-5p可能通過靶向Sirt1 發(fā)揮作用。

凋亡基因p53[18]、炎癥基因NF-κB[19]、抗氧化基因NRF2[20]是受到Sirt1 調(diào)控的下游分子，Sirt1 能夠在心肌缺血再灌注損傷過程中通過抗凋亡、抗炎、抗氧化應(yīng)激等途徑發(fā)揮保護(hù)作用。本研究進(jìn)一步觀察了miR-199a-5p/Sirt1 在STEMI 病情發(fā)展變化中的作用，病變數(shù)目及Gensini 積分增加，預(yù)后發(fā)生MACE 的STEMI 患者外周血miR-199a-5p 表達(dá)增加、Sirt1 表達(dá)降低，表明miR-199a-5p 高表達(dá)、Sirt1低表達(dá)與STEMI 病變加重、預(yù)后惡化有關(guān)。本研究還通過ROC 曲線分析證實(shí)miR-199a-5p、Sirt1 表達(dá)對(duì)發(fā)生MACE 具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述，miR-199a-5p/Sirt1 參與STEMI 的發(fā)生及發(fā)展。STEMI 患者外周血miR-199a-5p 表達(dá)增加及Sirt1 表達(dá)降低存在相關(guān)性，并且與病情加重、預(yù)后不良有關(guān)。