神經藥物對小鼠生育能力的影響

雷芊芊，周明夏

（江蘇農牧科技職業(yè)學院，江蘇 泰州 225300）

藥物安全性評價是指在實驗室條件下，用試驗系統(tǒng)對藥物安全性作出評價，為臨床研究提供理論依據，是評判藥物能否進入臨床研究的重要研究手段。生殖毒性試驗是藥物臨床安全性評價經常使用的研究方式，按研究目的不同分為四類。Ⅰ段研究藥物對動物精子活力、發(fā)情周期的影響；Ⅱ段研究藥物對雌性動物妊娠及胚胎、胎仔發(fā)育的影響；Ⅲ段研究藥物對動物遺傳學的影響；Ⅳ段研究內容包括藥物對妊娠動物、胚胎、胎仔發(fā)育情況及對動物群體遺傳學表達規(guī)律的影響。本試驗通過小鼠尾靜脈注射神經藥物，研究藥物對小鼠的生育能力和早期胚胎發(fā)育的影響，旨在為臨床研究提供動物試驗資料。

1 材料與方法

1.1 試驗動物的選擇

1.1.1 品種的選擇 根據藥物生殖毒性研究技術指南，小鼠具有體型小、操作方便、易于飼養(yǎng)、性成熟快、生育能力強、懷孕時間短、產仔數多、對藥物敏感等優(yōu)點，被定義為人類的常用試驗動物之一［1］。故使用小鼠作為試驗動物。

1.1.2 數量的選擇 在滿足研究目的、科學標準，監(jiān)管要求和動物福利的前提下，盡量減少使用動物。根據藥物生殖毒性研究技術指南，每組中每種性別的小鼠不得少于5 只［2］。為確保每組數據有效性，防止偶然性，每組每種性別使用10 只小鼠。

1.1.3 日齡體重的選擇 給藥時雄性動物日齡為40～50 日齡；雌性為55～65 日齡。給藥時雄性動物體重為27.2～34.4 g；雌性為24.7～28.6 g。

1.2 試驗動物稱重

試驗動物給藥前需稱重1 次，稱重后根據體重分組；分組后交配前1 周稱重2 次；交配期間不稱重；交配成功后，雌性小鼠在發(fā)現(xiàn)妊娠當天、妊娠3 d、妊娠6 d、妊娠9 d、妊娠13 d 各稱重1 次，雄性小鼠交配成功后安樂死前稱重［3］。

1.3 動物分組

根據動物體重，采用隨機分組法，詳見表1。

表1 試驗動物分組情況

1.4 方法

1.4.1 動物標記識別

1）動物個體標記。分組前，用記號筆在小鼠尾部標記臨時號。根據體重分組后雄性小鼠和雌性小鼠擁有一個惟一的動物編號，用耳打孔法輔助識別。耳打孔法具體方式：左耳打孔代表十位，右耳打孔代表個位，左右耳打孔中央圈為組別［4］，詳見圖1。

圖1 耳打孔法

2）籠卡標記。動物飼養(yǎng)籠盒上掛有標注動物信息的籠卡。

1.4.2 動物飼養(yǎng) 試驗動物在無菌屏障環(huán)境中飼養(yǎng)，溫度控制為20～24 ℃，濕度在30%～60%，光照12 h［5］，動物在試驗期間飲用純凈水，自由采食符合國家標準的小鼠生長繁育飼料。交配前飼養(yǎng)在裝有墊料的飼養(yǎng)盒中，每盒最多飼養(yǎng)5 只同性別動物；交配期間，雌性小鼠放在雄性小鼠籠中飼養(yǎng)；交配成功后，為了防止妊娠動物在群養(yǎng)籠中相互咬傷而導致流產或其他事故，雌性小鼠單獨飼養(yǎng)在單個籠子里［6］。

1.4.3 給藥頻率與方法

1）給藥頻率。每天給藥1 次，雄性小鼠的給藥時間為交配前28 d 開始至交配成功后停止；雌性小鼠的給藥時間為交配前14 d 開始到妊娠6 d 停止［7］。

2）給藥方法。對照組飼喂神經藥物輔料，低劑量組、中劑量組、高劑量組注射不同濃度的某神經藥物，使用儀器為一次性滅菌注射器和配套針頭，采用尾靜脈注射方式給藥，10～20 s 完成。每只動物的給藥量應根據體重進行調整，給藥量需精確到0.01 mL。

1.4.4 動物觀察

1）臨床觀察。每天2 次臨床觀察。2 次臨床觀察需間隔2 h 以上［8］。

2）給藥局部觀察。試驗給藥期間，每次給藥前需對給藥部位局部觀察；給藥結束后每周觀察1 次。如動物給藥局部出現(xiàn)異常反應，應連續(xù)觀察至異常現(xiàn)象消失或安樂死當天。給藥部位局部觀察的主要內容是觀察給藥局部是否出現(xiàn)破潰、出血等癥狀［9］。

1.4.5 親代動物指標檢測

1）親代雌性小鼠的妊娠檢查。1～4 組孕鼠在妊娠13 d 解剖進行妊娠狀態(tài)檢查。將動物安樂死后，切除子宮，觀察子宮狀態(tài)，并對活胎、死胎及吸收胎進行計數。

2）親代雄鼠精子計數和活力檢查。交配成功后的雄性小鼠在24 h 內實施安樂死，解剖后取左側附睪尾，吸取1 份精子懸液，滴至載玻片上，置于精子分析儀中進行精子計數，檢查精子活力［10］。

3）親代雄鼠精子形態(tài)檢查。用一次性無菌膠頭滴管吸取精液樣本，在顯微鏡下觀察每只動物200個精子中含有的畸形精子數。

2 結果與分析

2.1 體重

試驗期間，對各組動物稱量體重，未見異常，詳見表2、表3。

表2 雄性小鼠平均體重 （單位：g）

表3 雌性小鼠體重 （單位：g）

2.2 臨床觀察

試驗期間，各組試驗動物均未出現(xiàn)不良反應。

2.3 妊娠情況

與對照組相比較，各試驗組動物的妊娠率、活胎率、吸收胎率、死胎率未見異常，詳見表4、表5。

表4 動物妊娠情況

表5 親代雌性小鼠剖宮產數據統(tǒng)計

2.4 雄性小鼠精子活動度和精子計數

與對照組相比，各劑量組雄性小鼠精子活動度和精子計數未見明顯異常，詳見表6、表7。

表6 雄鼠精子活動度和精子計數

表7 雄鼠精子活動度和精子計數

2.5 親代雄鼠精子形態(tài)學檢查

通過統(tǒng)計學分析，對照組和各劑量組雄性小鼠精子畸形率未見明顯異常，詳見表8。

表8 雄性小鼠精子形態(tài)統(tǒng)計

2.6 親代鼠生育能力統(tǒng)計

與對照組相比，各劑量組親代雄性小鼠的交配率、生育率未見異常，各劑量組親代雌性小鼠的交配率、受孕率、妊娠率未見異常，詳見表9。

表9 小鼠生育能力統(tǒng)計

3 結論

隨著科學與技術的進步，特殊人群的用藥安全越來越受到重視。為了特殊人群的用藥安全，在滿足試驗要求和動物福利的前提下，用試驗小鼠擬代特殊人群開展試驗。選用80 只試驗鼠，對雌、雄性小鼠重復尾靜脈注射某神經藥物。通過觀察重點檢測指標，對試驗結果進行分析發(fā)現(xiàn)神經藥物對雌性小鼠妊娠情況、活胎率、吸收胎率、死胎率及雄性小鼠精子活力、精子計數和精子形態(tài)等均未產生影響。本研究實際為藥物劑量、毒性的探索試驗，觀察藥物對親代小鼠生育能力及早期胚胎發(fā)育的影響，為該藥物后續(xù)實驗提供數據基礎，為特殊人群安全用藥提供參考。