55對不良孕產史夫婦的細胞遺傳學研究

曾南陽，謝妍，洪欽明，王彧

1.廣東省揭陽市榕城區婦幼保健計劃生育服務中心 檢驗科，廣東 揭陽 522000；2.廣東省揭陽市榕城區婦幼保健計劃生育服務中心 產前診斷生殖保健中心，廣東 揭陽 522000

0 引言

不良孕產史是指曾經有過唇腭裂、神經管缺損、唐氏綜合征等畸胎兒生育史，胚胎停育、死胎、死產、自然流產等妊娠史[1]。二胎開放后，優生優育咨詢門診中有過不良孕產史的患者越來越多，隨著社會經濟的發展，生活水平的提高，不良孕產史的問題越來越被人們關注。對于已婚夫婦而言，不良孕產史疾病的發生率較高。脫氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid，DNA）的主要載體為染色體，如果染色體出現數目異常或者結構畸變，有可能增加或減少基因，從而導致不良孕產[2]。不良孕產史的病因十分復雜，染色體異常、內分泌異常、環境及母體全身性疾病等都有可能是其發生的原因[3]。其中孕早期流產的胚胎組織中，染色體異常的發生率為50%～60%。現代醫學理念認為，在精準醫學的發展下，根據個體差異制定疾病的預防和發展方案，有助于疾病的診斷和治療，因此進行外周血染色體檢查非常必要[4]。這對了解不良孕產的原因診斷有重要的意義，更重要的是檢出攜帶者，包括家族中的攜帶者，對明確有染色體異常者，應進行產前診斷，避免遺傳病患兒出生，對做好優生優育，提高人口素質有重要意義，同時也是為人類遺傳性疾病的診斷尋找病因提供了科學依據[5]。基于此，本研究選擇于本院治療的不良孕產史夫婦探討其染色體異常的發病率，及篩查外周血染色體的意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月-2021年2月于廣東省揭陽市榕城區婦幼保健計劃生育服務中心治療的不良孕產史夫婦110例（55對）作為研究對象，臨床特征呈現出胚胎停育、習慣性流產、畸胎史、染色體異常兒孕產史等。本研究經本院倫理委員會批準，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

染色體核型檢查方法：取患者靜脈血4mL，肝素鈉（廠家：國藥集團容生制藥有限公司；生產批號：國藥準字H20033326）抗凝，接種于外周血細胞培養基，用1mL無菌注射器加0.5mL于培養基內，然后混勻，在37℃培養箱培養約72h，而后加入80μL秋水仙素（濃度：100μg/mL；廠家：西雙版納版納藥業有限責任公司；生產批號：國藥準字H53020871），繼續培養30min，再收獲滴片烤片，進行G顯帶處理。每個患者常規計數20個中期分裂相，分析5個核型，嵌合體核型數到100個。根據人類細胞遺傳學國際命名體制（international system for human cytogenetic nomenclature，ISCN）2016的標準描述染色體核型。

1.3 觀察指標

觀察所有不良孕產史夫婦的臨床表現及異常核型，同時比較不同性別、流產次數染色體異常檢出率。

1.4 統計學方法

應用SPSS 20.0統計軟件進行統計分析，計數資料采用例或率表示，比較用χ2檢驗，P＜0.05時，差異有統計學意義。

2 結果

2.1 110例不良孕產史夫婦異常核型及臨床表現

在110例不良孕產史夫婦中，22例出現染色體異常，占比20.00%。其中7例平衡易位，占比31.82%（7/22）；15例正常變異，占比68.18%（15/22）。正常變異中，2例染色體倒位，占比13.33%（2/15）；13例染色體多態性，占比86.67%（13/15），見表1。

表1 不良孕產史夫婦110 例異常核型及臨床表現

2.2 不同性別染色體異常檢出率比較分析

不同性別染色體異常檢出率對比，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同性別染色體異常率比較（n，%）

2.3 不同流產次數染色體異常檢出率比較分析

不同流產次數染色體異常檢出率對比，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 不同流產次數染色體異常檢出率比較（n，%）

3 討論

目前，由于染色體異常治療困難，療效不滿意，對于先天性智能障礙的治療也沒有有效藥物[6]。不同類型染色體發育不全預后不盡相同，智力低下和生長發育遲滯是染色體病的共同特征[7]。有文獻報道染色體異常在自然流產患者中的發生率約為12.6%。性染色體從胎兒期就決定了個體的性分化、性成熟，從而影響了患者的生殖器官發育、第二性征及身高、智力等[8]。性染色體異常在女性患者中表現為原發性閉經、月經不調、性器官發育差，而在男性患者表現為小睪癥、無精子癥、外生殖器發育差，甚至出現女性第二性征等，結果均造成了生殖能力的下降甚至喪失，常見的有特納綜合征（45，X）及克氏綜合征（47，XXY）等[9]。

隨著生命科學和醫學科學的發展，人們逐漸認識到醫學實踐中所遇到的一些問題需要用遺傳學的理論和方法才能得以解決，遺傳已成為現代醫學中的另外一個重要方面，臨床醫生在臨床工作中遇到越來越多的遺傳學問題，其中染色體異常與不良孕產史有著密切的關系。染色體是遺傳物質的載體，它具有儲存和傳遞DNA、控制基因活動和調整基因重組的作用[10]。人類染色體核型分析是將人的一個體細胞有絲分裂中期的染色體，在G顯帶技術基礎上，按照染色體的大小和形態特征，對染色體進行分組、排隊和配對[11]。這對探索人類遺傳病的發病機制具有重要意義。

染色體易位同不良孕產史有一定相關性，染色體易位中比較常見的就是羅伯遜易位與平衡易位，屬于臨床中最常見的一種造成胚胎停育及流產的不正常核型。平衡易位的患者因為未丟失遺傳物質，通常有正常的智力及臨床表型，然而病人生殖細胞于減數分裂期間會分裂18種配子，同正常人婚配有1/18的概率會分娩正常的后代，1/18屬于有正常表型的易位攜帶者[12]。于減數分裂期間，正常染色體會被易位染色體干擾，出現雜合體，于臨床上呈現為無精癥或生精阻滯。本研究110例不良孕產史夫婦中，7例出現平衡易位，均有不良孕產史。

染色體倒位因為未具有遺傳物質改變，所以染色體倒位患者的表型往往是正常的，然而它能夠出現類型不同的4種配子，若倒位圈內交換1次，染色體倒位患者會攜帶不平衡配子2種，若倒位圈不交換，會出現倒位染色體配子及正常配子各1種[13]。不平衡配子是一些缺失或重復不正常染色體攜帶者，他們缺失或重復片段的基因致死效應及片段長短是遺傳效應產生的關鍵。倒位的片段越長，基因缺失或重復片段就越短，這一配子同正常配子相結合的合子比較容易孕育到生產，但是產出的嬰兒通常是畸形兒，與此相反，倒位的片段越短，基因缺失或重復片段就越長，這種狀況的合子不容易生長發育，較大可能會引發死胎或流產。本研究110例不良孕產史夫婦中，2例出現倒位，均有不良孕產史。

染色體多態性為染色體的諸多微小變異，通常出現于染色體之異染色質區域內，這一區域DNA序列高度重復，其中結構基因幾乎不含編碼，往往不具有轉錄活性，所以染色體多態性通常不會導致嚴重后果，因此，能夠同傳統染色體異常區分[14]。多態性變異通常僅涉及同源染色體一對中的一個，特征是16、1、9號染色體次縊痕區縮短或變長，著絲粒區域熒光強度變異、G或D組短臂增長等。Y染色體長臂變異也包含在多態性變異內。多態性變異發生于異染色質區域，因此，攜帶者表型被影響的程度通常不明顯，異染色質區DNA序列高度重復，且在遺傳上不活躍，所以傳統觀點認為不良孕產史同多態性沒有顯著關系。然而相關學者認為異染色質區域增減DNA序列，能干擾細胞分裂進而引發同源染色體配對困難，出現非整倍體胚胎、不平衡配子的概率增加，最終引發流產、死胎等[15]。本研究110例不良孕產史夫婦中，13例出現多態性，均有不良孕產史。

相關文獻顯示，于反復流產夫婦中，女性染色體異常率明顯高于男性，認為主要是因為男女生殖細胞數目差異導致，異常核型攜帶者的精子于受精期間通過優勝劣汰選擇[16]。然而，本次研究顯示，22例異常核型病人中，10例為女性，檢出率為18.18%，12例為男性，檢出率為21.82%，差異無統計學意義，所以需對不良孕產史夫婦雙方進行染色體檢查。本研究有43例患者因自然流產就診，占比78.18%，于自然流產病人中檢出染色體異常的概率為20.93%，同自然流產胚胎內的染色體異常檢出率（50%～60%）[17]相比，明顯較低。本研究顯示，不同流產次數檢出染色體異常的概率無統計學差異。

綜上所述，染色體異常為造成不良孕產的一個重要原因，細胞遺傳學研究對于明確不良孕產史夫婦的病因有幫助。