鄂爾多斯地區蒙古族人群SLCO1B1和ApoE 基因多態性的研究

陳曉曉，段寶生

（1.包頭醫學院，內蒙古 包頭 014000；2.鄂爾多斯市中心醫院，內蒙古 鄂爾多斯 017000）

0 引言

SLCO1B1基因位于12號染色體上，它包含15個外顯子和14個內含子[1]，SLCO1B1有40多種單基因核酸多態性，但4號外顯子區388A>G和5號外顯子區521T>C是兩種常見的單核苷酸多態性位點，形成四種單倍型*1a、*15、*1b、*5，其編碼轉運蛋白OATP1B1，主要介導肝細胞對內源性化合物和臨床藥物的吸收，從而影響物質在血漿中的濃度及藥物活性，與他汀類藥物致患者橫紋肌溶解和肌病等藥物副作用密切相關[2]。人類ApoE基因位于第19號染色體長臂上，包含4個外顯子與3個內顯子[3]，ApoE基因有?2、?3、?4三種等位基因。可形成6種可能的ApoE基因型。ApoE介導動脈粥樣硬化相關細胞的膽固醇逆向轉運過程，對動脈粥樣硬化的衰減有一定作用[4]。它也是許多大腦淀粉樣蛋白-β沉積的組成部分，包括阿爾茨海默病中的淀粉樣蛋白-β沉積，從而影響阿爾茨海默病的發病與發展[5]。本研究通過實驗檢測，了解鄂爾多斯地區蒙古族老年人群SLCO1B1和ApoE基因多態性分布情況，為該地區蒙古族人群基因遺傳學、心腦血管疾病和阿爾茨海默病的預防、服用他汀類藥物療效和致肌病風險評估提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月-2021年1月在鄂爾多斯市地區多家醫院健康體檢的蒙古族老年人群120名作為研究對象，納入對象均為三代內純蒙古族人群，平均年齡為（63.41±6.99）歲，其中男性64名，女性56名。

1.2 主要試劑與儀器

血液基因組DNA提取試劑盒、人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒、羅氏480實時熒光定量PCR儀器。

1.3 研究方法

納入對象晨起空腹采血于真空紫頭采血管中，于-80℃超低溫保存箱中保存，定期提取血樣DNA后檢測其基因型。

1.3.1 提取血樣DNA

①取200μL血樣于離心管中；②加入20μL蛋白酶K；③加入200μL GB，70℃干式加熱10min；④加入200 μL無水乙醇；⑤液體轉入CB3吸附柱里，離心去液；⑥加入500μL GD，離心去液；⑦加入600μL PW，離心去液；⑧重復操作⑦；⑨離心放置；⑩將CB3吸附柱放入離心管中，滴加100μL TE，放置后離心，所得溶液即為DNA提取液。

1.3.2 PCR 擴增

①本試劑盒檢測4個單核苷酸位點的4種反應液，每個八連管孔中分別加入23μL反應液；②樣本準備：將待測液、質控品分別取2μL加入已裝有反應液的八連管中；③結果判定：上機后根據熒光信號通道擴增曲線判讀基因型。

1.4 數據處理

將鄂爾多斯地區蒙古族老年人群的SLCO1B1和ApoE基因型分布進行遺傳平衡評估，檢測本研究納入的健康體檢人群SLCO1B1和ApoE基因型分布是否滿足Hardy-Weinberg定律。

2 實驗結果與分析

（1）鄂爾多斯地區蒙古族老年人群的SLCO1B1和ApoE基因型、等位基因的分布，如表1、表2。

表1 SLCO1B1基因型和等位基因分布（n）

表2 ApoE基因型和等位基因分布（n）

（2）將納入人群基因型進行Hardy-Weinberg平衡定律分析，采用x2檢驗可知，本研究納入的鄂爾多斯地區蒙古族老年人群樣本SLCO1B1和ApoE基因型分布均滿足Hardy-Weinberg定律，數據具有代表性。

（3）在鄂爾多斯地區蒙古族老年人群中，SLCO1B1基因型分布頻數由大到小依次為*1a/*1b>*1b/*1b>*1b/*15=*1a/*15>*1a/*1a>*15/*15>*1a/*5>*5/*5=*5/*15；等位基因*1b>*1a>*15>*5。ApoE基因型分布頻數由大到小依次為?3/?3>?3/?4>?2/?3>?4/?4>?2/?4>?2/?2，等位基因?3>?4>?2。

（4）納入人群的SLCO1B1基因多態性分布評估他汀類藥物致肌病風險。如表3。

表3 SLCO1B1基因多態性分布特點[n（%）]

SLCO1B1基因多態性與他汀類藥物致患者橫紋肌溶解和肌病密切相關[6]，目前根據他汀類藥物不良反應和肌病風險等，可將SLCO1B1基因多態性分為正常肌病風險型（*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b）、中度肌病風險型（*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15）和重度肌病風險型（*5/*5、*5/*15、*15/*15）3種表型[7]，根據鄂爾多斯地區蒙古族老年人群SLCO1B1基因多態性頻數分布情況，可計算得到：正常肌病風險型、中度肌病風險型、重度肌病風險型的人群所占比例分別為75.83%、22.50%、1.67%。因此可推測在鄂爾多斯地區蒙古族老年人群中，大部分人群服用他汀類降脂藥物為正常肌病風險、少數人群為中度肌病風險、極少數人群為重度肌病風險。

（5）納入人群的ApoE基因多態性分布評估患心腦血管疾病和阿爾茨海默病風險、服用他汀類藥物降脂的療效，如表4。

表4 ApoE 基因多態性分布特點[n（%）]

ApoE基因多態性因被分為：降脂療效良好、患心腦血管疾病和阿爾茨海默病低風險型（?2/?2、?2/?3）；降脂療效正常、患心腦血管疾病和阿爾茨海默病中風險型（?2/?4、?3/?3）；降脂療效降、低患心腦血管疾病和阿爾茨海默病高風險（?3/?4、?4/?4）三大類，根據鄂爾多斯地區蒙古族老年人群ApoE基因多態性頻數分布情況，可計算得到：降脂療效良好患病風險低型、降脂療效患病風險正常型、降脂療效差患病風險高型人群所占比例分別為5.00%、80.83%、14.17%。因此可推測鄂爾多斯地區蒙古族老年人群大多數服用他汀類降脂療效患病風險正常型，較少數人群服用他汀類降脂療效差患病風險高，少數人群服用他汀類降脂療效良好患病風險低。

3 討論

由于受種族、遺傳背景、地理環境等多方面差異因素影響，根據現有文獻可知，目前關于SLCO1B1和ApoE基因多態性分布在不同民族及地區之間存在差異，王新利等提出在新疆地區的維吾爾族人群和漢族人群ApoE基因均以ε3/ε3基因型最常見，但維吾爾族人群較常見基因型為ε3/ε4型，漢族人群較常見基因型為ε2/ε3型[8]，郭啟燕等提出，貴州省黔南州毛南族人群ε4等位基因最常見，毛南族人群ε4等位基因頻率明顯高于廣西壯族人群和云南傣族人群[9]，因此研究對象的民族差異會導致結果有明顯差異，而鄂爾多斯地區蒙古族老年人群作為喜食高油脂肉類的少數民族，其與漢族人群存在顯著民族差異和飲食差異，因此探討鄂爾多斯地區蒙古族老年人群SLCO1B1和ApoE基因多態性分布情況[10-13]，為該地區蒙古族人群基因遺傳學、心腦血管疾病和阿爾茨海默病的預防、服用他汀類藥物療效預估及致肌病風險提供理論依據。