安順市煙草根結線蟲病防控藥劑室內毒力測定

代 飛 代惠娟李沛柏 張 權 白茂軍 陳恩發

（1貴州省煙草公司安順市公司，貴州安順 561000；2河北中煙工業有限責任公司，河北石家莊 050000；3貴州省農業科學院植物保護研究所，貴州貴陽 550009）

煙草根結線蟲病作為世界性病害之一，在世界各煙區均有分布。煙草根結線蟲主要寄生于烤煙根系，造成根系吸收養分受阻，導致煙株葉片葉尖周圍產生焦尖焦邊，降低煙株對其他病害的抵抗力，形成復合感染，直至煙株死亡，降低煙草產量和質量，對煙區種煙農戶造成了重大經濟損失，輕的損失30%左右，重的造成絕收。近年來，煙草根結線蟲病已逐漸上升為貴州煙區的主要病害之一。目前，在煙草根結線蟲病防控研究方面，大多以直接在田間采用化學藥劑防治的方式開展試驗，這些化學藥劑中有許多是高毒性、高殘留農藥，施用后會對煙地及環境造成嚴重污染，長此以往，還會對人體產生負面影響[1-5]。在煙草根結線蟲病防治方面，目前雖然也有報道，但各種處理方式很不統一，毒力測定也主要是對田間防治的一種印證。本研究針對安順市實際，先在室內對煙草根結線蟲病防控藥劑進行測定與篩選，主要目的是事前對高污染、高殘留、衰減期過長、對環境不友好的農藥進行篩選，遴選適宜的藥劑用于病蟲害防治，避免此類污染再次發生，為大田用藥提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試線蟲為煙草根結線蟲，從安順市西秀區試驗地云煙85煙株根結樣品中分離而得。

供試藥劑有90%阿維菌素原粉（華北制藥愛諾股份有限公司生產）、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（華北制藥愛諾股份有限公司生產）、81.7%噻唑膦原油（壽光市申達化學工業有限公司生產）、90%丁硫克百威原油（冀州市凱明農藥有限公司提供）、滅線磷（德國Dr公司生產）、硫線磷（FMC公司提供）。

試驗藥劑母液的配制方法：用90份99.5%丙酮溶解2份原藥，然后加8份Tween-20乳化。將25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷分別配制成 25、50、100、200、400 mg/L 梯度，81.7%噻唑膦原油配制成 10、20、40、80、160 mg/L梯度，90%丁硫克百威原油配制成 100、200、400、800、1 600 mg/L梯度，備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 根結線蟲二齡幼蟲懸浮液的制備。取有大量根結的烤煙根系，用自來水輕輕沖洗干凈，將病根剪成5 cm小段，在1%次氯酸鈉溶液中漂洗約4 min，用竹片輕取煙根上表面組織，利用200目與500目線蟲篩收集線蟲卵，放入直徑8 cm的小培養皿內，加入少量無菌水，在25℃恒溫箱中孵化3～4 d，收集二齡幼蟲，并加入無菌水將其配制成濃度500條/mL左右的懸浮液備用。

1.2.2 室內毒力測定方法。取96孔細胞培養板，每孔加入0.15 mL線蟲懸浮液，每列為1個濃度處理，重復3次，使25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷在孔板中的濃度均分別為 25、50、100、200、400 mg/L，81.7%噻唑膦原油濃度分別為 10、20、40、80、160 mg/L，90%丁硫克百威濃度分別為 100、200、400、800、1 600 mg/L。

1.3 調查統計

根結線蟲的死亡可從線蟲形態做出判斷，死亡的線蟲身體僵直或有呈角度的彎折，未死亡的根結線蟲蟲體有呈弧度的彎折。若從根結線蟲的形態無法明確判斷其死亡與否，48 h后可采用針刺法判斷。計算死亡率、校正死亡率、LC50及LC95，用DPS軟件計算出藥劑的毒力回歸方程、LC50和LC95置信限，用SPSS軟件計算差異顯著性[6-8]。計算公式如下：

死亡率（%）=死亡二齡線蟲數/處理二齡線蟲數×100；

校正死亡率（%）=（處理線蟲死亡率-對照線蟲死亡率）/（1-對照線蟲死亡率）×100。

2 結果與分析

2.1 6種農藥不同濃度處理對煙草根結線蟲二齡幼蟲校正死亡率的影響

由表1可知，無論是24 h后還是48 h后，煙草根結線蟲二齡幼蟲的校正死亡率均呈現出一定的規律，即隨著每種農藥濃度的增加，校正死亡率均呈上升趨勢；不同濃度梯度處理間存在差距，最大濃度與最小濃度之間差異極顯著。24 h校正死亡率與48 h校正死亡率存在差異，總體表現為48 h校正死亡率略高于24 h校正死亡率，但基本無顯著性差異，其中25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和90%阿維菌素原粉出現48 h后25 mg/L和50 mg/L濃度的校正死亡率較24 h低的現象，原因是根結線蟲假死，于48 h后復蘇。從6種藥劑對煙草根結線蟲二齡幼蟲的抑制作用分析，81.7%噻唑膦原油以較低的濃度就能較好地抑制煙草根結線蟲二齡幼蟲，而90%丁硫克百威原油需要很大的濃度才能抑制，總體抑制活力大小表現為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。因此，用量少、成本低、效果佳、田間易操作成為首選方案之一。

表1 6種藥劑不同濃度對煙草根結線蟲二齡幼蟲的影響

2.2 6種農藥不同濃度處理對煙草根結線蟲二齡幼蟲毒力測定運算結果分析

由表2可知，6種藥劑對根結線蟲二齡幼蟲均有一定的毒力作用，藥后48 h對二齡幼蟲的毒力有所提高。對6種藥劑對煙草根結線蟲二齡幼蟲的毒力顯著性分析表明，各處理間均存在差異，81.7%噻唑膦原油24 h LC50為29.13 mg/L，對煙草根結線蟲二齡幼蟲毒力最強；90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽及硫線磷對煙草根結線蟲二齡幼蟲的毒力低于81.7%噻唑膦原油，優于其他供試藥劑，三者LC50相差甚微，未達顯著水平；滅線磷及90%丁硫克百威原油毒力相對較低。24 h LC95毒力略有差異，但總體趨勢基本一致。81.7%噻唑膦原油的48 h LC50為21.34 mg/L，與24 h有少許差別，對煙草根結線蟲二齡幼蟲毒力最強；48 h LC95毒力雖然略有差異，但是總體趨勢也基本與24 h LC50一致。從各處理的毒力分析得出，6種農藥處理的毒力大小排序為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

表2 6種藥劑對根結線蟲二齡幼蟲毒力測定運算結果分析

3 結論與討論

（1）通過對6種農藥不同濃度處理對煙草根結線蟲二齡幼蟲的室內毒力測定，各個藥劑對煙草根結線蟲二齡幼蟲均有抑制作用，與張勝博等[9]、王 軍等[10]、黃 闊等[11]的研究相類似，并隨著每種農藥濃度增加、時間的延長，煙草根結線蟲二齡幼蟲校正死亡率均呈現上升趨勢，與張映杰等[12]、王 軍等[13]、孔凡玉等[14]的結果略有不同，但24 h、48 h的校正死亡率之間未達顯著水平。6種農藥對煙草根結線蟲二齡幼蟲抑制活力大小表現為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

（2）6種藥劑對煙草根結線蟲二齡幼蟲的毒力測定結果表明，部分藥劑的毒力在濃度及時段上達顯著或極顯著差異，總體毒力無顯著差異，其大小排序為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

（3）根據6種農藥對煙草根結線蟲二齡幼蟲的抑制效果及毒力測定結果，結合成本、效應、安全等因素[15-17]，推薦表現較好的81.7%噻唑膦原油、90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽用于煙田繼續試驗。建議在篩選出的農藥中，輪換使用或復合使用，使其達到經濟、安全的目的。

（4）由于煙草根結線蟲選取樣品材料中未進行種類詳細鑒別，可能存在一定誤差，測定結果僅作為農藥使用的參考[18-20]。