慢性乙肝患者肝纖維化嚴(yán)重程度與血清TGF-β 的相關(guān)性分析

郭金偉

中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）感染性疾病科，廣東深圳 518106

慢性乙型肝炎是我國較為常見的一種傳染性疾病，是由于感染乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）所致[1]。慢性乙肝患者普遍存在肝纖維化，肝纖維化晚期表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、脾大、蜘蛛痣等癥狀，但早期臨床癥狀缺乏特異性，診斷難度較大[2]。肝纖維化是慢性乙肝患者病情進(jìn)展為肝硬化的一個重要階段，肝纖維化分期也是評估患者疾病嚴(yán)重程度的參考標(biāo)準(zhǔn)[3]。臨床有研究表明：轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming grouth factor-β, TGF-β）在瘢痕形成、器官纖維化發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，高水平的TGF-β 會促進(jìn)纖維化進(jìn)程進(jìn)展[4-5]?；诖?，為探究慢性乙肝患者肝纖維化嚴(yán)重程度與血清TGF-β的相關(guān)性，本文對中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）感染性疾病科2019 年5 月—2022 年1 月收治的296例慢性乙肝患者研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院感染性疾病科收治的296 例慢性乙肝患者作為觀察組，以及同期本院門診體檢的296 名健康人員作為對比組。觀察組：172 例男、124 例女；年齡34～74 歲，平均（53.72±3.09）歲；病程2～5 年，平均（3.46±1.68）年；肝纖維化分期：21 例S0期、131 例S1-2期、144 例S3-4期；疾病嚴(yán)重程度：30 例輕度、157例中度、109 例重度；體質(zhì)指數(shù)（body mass index, BMI）23～33 kg/m2，平 均（28.62±1.44）kg/m2。對 比組：190 例男、106 例女；年齡35～74 歲，平均（53.55±3.01）歲；BMI 24～33 kg/m2，平均（28.58±1.41）kg/m2。兩組一般資料對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均滿足《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中對“慢性乙肝”診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡在18 周歲以上，男、女均可；③影像學(xué)資料完整；④均為自愿參與本研究，并已簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前1 月接受過抗病毒等對癥治療者；②妊娠期、哺乳期女性；③既往存在肝區(qū)手術(shù)史者；④合并艾滋病等疾病者；⑤合并腹水等疾病者；⑥同期參與其他研究者；⑦凝血機(jī)制異常者；⑧中途轉(zhuǎn)院、死亡、退出者；⑨合并肝癌等惡性腫瘤者。

1.3 方法

①血清TGF-β 檢測：抽取所有受檢者5 mL 空腹靜脈血，以10 cm 離心半徑、2 800 r/min 離心速率、離心處理10 min，將上層清液分離，并置于-70℃環(huán)境待檢，以ELISA 法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming grouth factor-β, TGF-β）。

②肝纖維化分期病理檢測：以B 超引導(dǎo)下活檢槍穿刺法進(jìn)行穿刺，協(xié)助患者采取左側(cè)臥位，通過B 超定位穿刺點(diǎn)，對穿刺部位進(jìn)行常規(guī)消毒、鋪巾，給予2%的利多卡因麻醉，在B 超引導(dǎo)下活檢槍沿著穿刺點(diǎn)進(jìn)針，取出肝組織長約1.5 cm，迅速置入10%的福爾馬林溶液中保存并及時送檢，進(jìn)行常規(guī)HE、網(wǎng)織、Masson 染色，由本院兩名病理科資深醫(yī)生獨(dú)立閱片，給出具體的病理診斷結(jié)果，對于存在異議的地方，應(yīng)再從討論，確定最終診斷結(jié)果。嚴(yán)格遵循《肝纖維化中西醫(yī)結(jié)合診療指南(2019 年版)》[7]中對肝纖維化分期的判定標(biāo)準(zhǔn)。

③肝纖維化相關(guān)標(biāo)志物測定：抽取所有受檢者5 mL 空腹靜脈血，分離血清并置于-37℃水浴箱溫浴30 min，以2 800 r/min 離心速率、10 cm 離心半徑、離心處理10 min，分離血清，以放射免疫分析（radioimmunoassay, RIA）法檢測Ⅳ型膠原（collagen type Ⅳ, C-Ⅳ）、層黏蛋白（laminin, LN）、Ⅲ型前膠原（procollagen Ⅲ, PC-Ⅲ）、透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid, HA）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)，多組間差異比較采用F檢驗(yàn)，Prarson 相關(guān)性分析肝纖維化指標(biāo)與血清TGF-β 的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)比較

觀察組血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于對比組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)比較(±s)

表1 兩組患者血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)比較(±s)

組別觀察組（n=296）對比組（n=296）t 值P 值TGF-β（pg/mL）816.25±64.15 316.25±20.04 127.997＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）168.26±19.62 20.16±1.44 129.520＜0.001 LN（ng/mL）216.52±34.05 37.26±2.41 90.350＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）319.06±29.04 21.52±1.44 176.060＜0.001 HA（ng/mL）592.62±34.05 40.26±1.57 278.798＜0.001

2.2 輕、中、重度組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比

重度組均血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均顯著比中度組高，中度組均顯著比輕度組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 輕、中、重度組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比(±s)

表2 輕、中、重度組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比(±s)

組別重度組（n=109）中度組（n=157）輕度組（n=30）F 值P 值TGF-β（pg/mL）938.26±95.52 615.25±52.01 519.62±34.06 824.870＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）186.26±34.52 152.26±20.14 66.25±13.52 255.206＜0.001 LN（ng/mL）248.62±18.62 175.62±34.62 92.52±9.26 443.668＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）338.62±35.62 234.25±12.14 127.62±6.25 1 184.101＜0.001 HA（ng/mL）682.62±45.06 408.62±34.16 225.26±15.12 2 580.684＜0.001

2.3 不同S 分期組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比

血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HAS3-4期組均高于S1-2期，S1-2期均顯著比S0期組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同S 分期組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比(±s)

表3 不同S 分期組血清TGF-β、肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)對比(±s)

組別S0期組（n=21）S1-2期組（n=131）S3-4期組（n=144）F 值P 值TGF-β（pg/mL）451.26±12.62 692.62±15.11 838.62±20.14 5 534.365＜0.001 C-Ⅳ（ng/mL）82.62±5.62 128.62±9.62 160.33±6.74 1 112.149＜0.001 LN（ng/mL）134.25±13.06 182.62±19.05 258.26±34.01 368.620＜0.001 PC-Ⅲ（ng/mL）132.52±20.62 178.62±34.51 255.62±34.52 242.500＜0.001 HA（ng/mL）62.15±1.52 352.62±19.62 401.52±20.14 2 864.017＜0.001

2.4 肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)、血清TGF-β 的相關(guān)性

C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 與TGF-β 均呈正相關(guān)（P＜0.05），見表4。

表4 肝纖維化實(shí)驗(yàn)室參數(shù)與血清TGF-β 的相關(guān)性

3 討論

肝纖維化是慢性乙肝患者組織修復(fù)產(chǎn)生的一種代償反應(yīng)，也是慢性乙肝發(fā)展成為肝硬化、肝癌的必經(jīng)階段，是由于細(xì)胞外基質(zhì)降解減少、合成增加，導(dǎo)致大量的ECM 沉積，從而引發(fā)肝纖維化。據(jù)調(diào)查顯示：將近40%的肝纖維化患者會發(fā)展成為肝癌[8]。肝纖維化是一個多細(xì)胞、多因素參與的生理過程，與多種細(xì)胞因子異常變化有著極為密切的聯(lián)系[9]。TGF-β 可以將肝星狀細(xì)胞激活，在肝硬化無創(chuàng)性診斷中具有重要價值，而關(guān)于TGF-β 異常變化在促肝纖維化發(fā)展中的作用機(jī)制成為目前臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。

本研究顯示，觀察組血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于對比組（P＜0.05）。提示慢性乙肝患者相對于健康人群，血清TGF-β 水平顯著增高。分析如下：HBV 會通過免疫病理性損傷間接或直接的激活、浸潤大量的Kupffer 細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體釋放更多TGF-β，從而增加血液循環(huán)系統(tǒng)中TGF-β 濃度，而高水平的TGF-β 又會對貯脂細(xì)胞等其他間質(zhì)細(xì)胞形成刺激，刺激以上細(xì)胞釋放TGF-β，形成一個惡性循環(huán)[10-11]。TGF-β 又會對HSG 形成一定的刺激，促使其轉(zhuǎn)化成肌成纖維細(xì)胞，加快ECM 合成，上調(diào)不同類型膠原濃度以及LN、HA 表達(dá)[12-13]。在李虓等[14]研究中，HBV攜帶者組血清TGF-β（357.07±41.17）μg/L、慢性乙肝組（327.59±25.04）μg/L 均高于健康對照組（24.06±5.29）μg/L，（P＜0.05），與本研究重度組組TGF-β（938.26±95.52）pg/mL 高于中度組，而中度組TGF-β（615.25±52.01）pg/mL 高于輕度組（P＜0.05）的結(jié)果接近，證實(shí)了HBV 感染會導(dǎo)致血清TGF-β 濃度增高。

肝穿刺活檢是臨床診斷慢性乙肝的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在創(chuàng)傷性大、價格昂貴、并發(fā)癥多等不足，并未在臨床中推廣開來[15]。而C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA現(xiàn)已在《肝纖維化診斷及治療共識》[16]中被定為評估肝纖維化程度的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。以“膠原”為主的ECM，降解量減少，合成量增多，是肝纖維化發(fā)展的本質(zhì)，降解與合成之間的平衡性被打破，導(dǎo)致肝臟內(nèi)部大量的細(xì)胞外基質(zhì)沉積，最終形成肝纖維化[17]。C-Ⅳ是基底膜的重要成分，可以反映出基底膜膠原的更新率，血清C-Ⅳ增高，可反映出肝纖維化進(jìn)程，也是肝纖維化的早期標(biāo)志之一。肝纖維化發(fā)展早期，血清C-Ⅳ濃度就會增高。LN主要來源于肝星狀細(xì)胞，在細(xì)胞分化、粘連、基因表達(dá)中具有重要作用。肝纖維化發(fā)展過程中，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞間隙會沉積大量的LN，降低內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，升高門靜脈壓。PC-Ⅲ與肝纖維化程度存在密切相關(guān)性，但PC-Ⅲ缺乏特異性，如果其他器官發(fā)生纖維化，血清PC-Ⅲ濃度也會增高，然而持續(xù)性的血清PC-Ⅲ濃度增高，提示病情向肝纖維化方向發(fā)展。HA 由間質(zhì)細(xì)胞合成，可以更加靈敏的反映出肝臟細(xì)胞受損程度，是肝纖維化診斷的敏感性指標(biāo)。

本研究顯示，重度組血清TGF-β、C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 均高于中度組，中度組均高于輕度組，S3-4期組均高于S1-2期，S1-2期均高于S0期組（P＜0.05）。說明肝纖維化程度越重，以上指標(biāo)血清濃度就越高。分析如下：慢性乙肝患者在感染HBV 之后，會觸發(fā)機(jī)體釋放大量的TGF-β，加快肌纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)換成纖維細(xì)胞、纖維樣細(xì)胞的速度，促使患者病情從肝纖維化向肝硬化方向發(fā)展[18-19]。TGF-β 作為一種促纖維化因子，會促使大量的肌纖維母細(xì)胞，合成大量的膠原，加重肝纖維化程度。另外，TGF-β 通過基因水平，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶等降解酶的活性，增加內(nèi)源性抑制劑含量，促使大量的細(xì)胞外基質(zhì)不能被降解，從而發(fā)生肝纖維化。在朱萍等[20]研究中，S4組C-Ⅳ（217.8±140.1）ng/L 高于S3（175.0±175.5）ng/L，S3高于S2（99.6±70.5）ng/L，S2高 于S1（49.6±34.2）ng/L（P＜0.05），與本研究結(jié)果接近。本研究顯示，C-Ⅳ、LN、PC-Ⅲ、HA 與TGF-β 均呈正相關(guān)（P＜0.05）。提示血清TGF-β 濃度會隨著肝纖維化程度的加重而增高，臨床可通過檢測血清TGF-β 濃度，評估肝纖維化程度，從而對患者病情作出準(zhǔn)確的診斷，輔助臨床醫(yī)生為患者制定針對性的治療計(jì)劃。

綜上所述，慢性乙肝患者機(jī)體血清TGF-β 濃度較高，且隨著肝纖維化程度加重，血清TGF-β 濃度會逐漸增高，臨床可將TGF-β 作為評估肝纖維化進(jìn)程的一個特異性指標(biāo)。