龍巖市部分規模化豬場四種病毒性傳染病的抗體水平檢測與分析

李圣元 龍巖市農業學校 福建龍巖 364000

在非洲豬瘟疫情影響下，龍巖市養豬場2019 年生豬存欄量與出欄量呈現大幅度下降的趨勢， 隨著各豬場生物安全意識提高， 臨床上常見的幾種病毒性傳染病得到一定緩解， 但一些重要的病毒性傳染病問題仍比較突出，并呈現出新的流行特點[1]。 豬的病毒性傳染病中對養豬業造成經濟損失大的主要是由病毒引起的豬繁殖障礙疾病和消化道疾病[2]，該類疫病具有傳播快、流行廣的特點，臨床上常見的主要有豬瘟、偽狂犬病、圓環病毒病以及豬繁殖與呼吸綜合征等。 這些疫病通常會引起種豬不育、 精液質量下降；母豬不發情、返情及不孕等癥狀；妊娠母豬發生流產、早產、木乃伊胎、弱仔胎等一系列癥狀，在臨床上一般無特效治療方法， 大多數可用疫苗接種來達到一定的防控效果[2]。 豬群在注射疫苗后通常會產生良好的免疫效果， 但由于不同豬場的具體情況千差萬別，且疫苗在運輸、保存以及注射過程中難免出現紕漏，免疫失敗的現象時有發生，如接種后仍然發病，未達到預定的保護期等。 因此，豬場應主動通過抗體水平監測來確認疫苗接種后是否達到理想的免疫效果，從而減少免疫失敗等情況發生[2]。

龍巖市養豬規模在幾十頭到幾百頭母豬的豬場占有較大比重， 為評估龍巖市各地區豬群中四類疫病的免疫水平，本文對龍巖市各地區10 個規模化豬場母豬進行抽血檢測， 用酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 方法對采集的296 份血樣進行抗體檢測，并對數據進行分析總結。

1 材料與方法

1.1 血清樣品 2019 年 3 月 1 日至 2019 年 10 月1 日，分別采集龍巖市新羅區、連城縣、武平縣以及長汀縣等10 個不同規模化豬場母豬血樣， 合計296 份。

1.2 診斷試劑與儀器 豬偽狂犬病病毒gE 糖蛋白阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒、圓環病毒2 型ELISA抗體檢測試劑盒、 豬繁殖與呼吸綜合征抗體ELISA檢測試劑盒，由金邁詩生物科技有限公司提供；豬瘟抗體 ELISA 檢測試劑盒， 由 IDEXX 公司提供；Biotek 酶標儀、 洗板機等， 均由美國伯騰儀器公司提供。

1.3 操作方法與步驟 （1）配置洗滌液。 （2）血清稀釋。 （3）去除抗原包被板，在相應孔內分別加入稀釋的待檢血清和對照血清。（4）密封抗原包被板，孵育。（5）揭去封膜板，洗板，加入酶結合底物溶液，密封孵育。 （6）重復步驟（5），加入底物溶液。 （7）室溫下避光顯色 10~15 min。 （8）加入終止液，混勻，15 min 內測定結果。（9）按照說明書分別在在酶標儀測定各孔OD450nm值。

1.4 判定標準 按照各試劑盒說明將讀取的OD450nm值換算成所需值， 并按表1 的判定標準來判定檢測結果。

表1 試驗判定標準

2 結果與分析

四種疫病抗體水平檢測結果見表2。 總體上看，龍巖地區部分規模化豬場免疫效果最好的是豬瘟，抗體陽性率高且變異系數低，抗體整齊度相對良好；豬繁殖與呼吸綜合征抗體S/P 平均值為1.61， 處于相對合理區間，但整齊度不佳；圓環病毒2 型抗體整體免疫效果尚可，但整齊度較差；偽狂犬病病毒gE抗體陽性率偏高， 結合發現部分豬場野毒流行較為嚴重，需要加強其控制和凈化措施。

表2 龍巖地區部分規模化豬場四種疫病抗體檢測情況

2.1 豬瘟抗體水平與分析 275 份血清中共檢出陽性樣品257 份，整體陽性率為93.45%，變異系數為30.69%。 由圖1 可見，所檢大部分豬場的豬瘟抗體陽性率達到95%以上，陽性率高且抗體水平整齊度良好，但中A、J 兩家豬場抗體水平一般，整齊度較差，應針對豬瘟抗體不合格的母豬進行加強免疫。

圖1 規模化豬場CSF 抗體水平檢測圖

豬瘟，又名豬霍亂，通常以發病快、發病率高、患病后持續高熱、全身出血以及白細胞減少為特征，是世界動物衛生組織（OIE）規定的必須報告的疫病之一。 根據研究報道[3]，感染豬瘟病毒的母豬會發生所謂的“母豬帶毒綜合征”，其數量可以達到妊娠母豬的43%，由于母豬的持續性感染，因而導致所生仔豬出現先天性免疫耐受，一旦外界條件發生改變，將會導致疫病大面積流行。 從2011-2018 年病原學監測結果來看， 中國大陸地區豬瘟發病率和病死率一直處于下降狀態， 陽性帶毒率從 9.26%下降到0.70%， 說明我國C 株疫苗對現有的豬瘟流行毒株能提供有效保護， 也為我國的豬瘟凈化和根除提供了堅實的技術支持[4]。 但目前部分養殖場（尤其是小型養豬場）依然存在病毒污染，豬瘟控制和凈化工作仍面臨不少困難和挑戰。

2.2 豬繁殖與呼吸綜合征抗體水平與分析 292 份血清樣品中， 檢出陽性樣品262 份， 陽性率達到89.73%，變異系數55.30%，抗體水平整齊度不佳。結合圖2-圖3 可以看出，A、J 兩個豬場陽性率達到100%， 且離散度較低，S/P 平均值在合理范圍內，說明免疫效果較為理想。 I 豬場陽性率較低，且離散度為73.22%，抗體水平均一性較差，免疫效果不理想。由圖3 可以看出，F 場陽性率雖達到100%，但其S/P均值超過2.5，超過合理區間，分析可能存在藍耳病病毒活躍的跡象。

圖2 規模化豬場PRRS 抗體水平檢測圖

圖3 規模化豬場PRRS 抗體S/P 平均值分布圖

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬的繁殖障礙和呼吸系統疾病[2]。 目前，高致病性豬藍耳病（HPPRRS）毒株依然是優勢流行毒株。近幾年來，雖然不時也有HP-PRRS 暴發的報道， 但總體上以地方性流行為主[5]。

有研究表明， 疫苗免疫的作用可以減少臨床發病和病理損傷，減少患豬排毒90%以上，改善生產性能、降低發病率和病死率，且弱毒疫苗效率要優于滅活疫苗[6-7]。 豬繁殖與呼吸綜合征是免疫抑制性疾病，侵害免疫系統的同時還會造成持續性感染，并具抗體依賴增強作用以及減緩抗體產生的時間[5]。 根據江斌對近年來福建省豬藍耳病發病統計， 當前藍耳病發病多種基因型并存， 除經典毒株 （如V2332株、CH-1R 株）和高致病性毒株（如江西株、湖南株、天津株等）外，還有毒力介于上述兩者之間的新毒株（如 NADC30 株、QYYZ 株），自然感染或注射活疫苗后，豬只會出現長期帶毒和排毒的現象。 因而針對I豬場陽性但無明顯臨床癥狀的情況， 不僅要選擇安全高效的疫苗進行科學免疫接種， 更要加強飼養管理， 定期在飼料或飲水中添加黃芪多糖等抗病毒藥物，并進行后期的預警監測工作。

2.3 圓環病毒病抗體水平與分析 294 份血清中檢出陽性樣品280 份，陽性率為95.24%。 由圖4 可以看出， 所檢大部分規模化豬場的抗體陽性率達到100%，且變異系數處于合理范圍內，抗體水平比較整齊。 其中A 場陽性率僅60%，變異系數超過合理范圍，S/P 平均值較低，懷疑豬場可能存在圓環病毒野毒感染， 應結合豬場豬群健康度進行評估， 必要時采取有效的生物安全措施， 降低圓環病毒野毒的威脅。

圖4 規模化豬場PCV2 抗體水平檢測圖

豬圓環病毒病（PCVD）是由豬圓環病毒（PCV）引起的一系列相關疾病的總稱，臨床上具體表現為：斷乳仔豬多系統衰竭綜合征 （Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、皮炎與腎病綜合征（Porcine dermatitis nephropathy syndrome）、自主先天性震顫（Congenital tremors，CT）等。 PCV 屬于圓環病毒科圓環病毒屬，是當前發現最小的動物病毒之一，按血清學及其基因組差異可分為 PCV1、PCV2、PCV3 三種血清型，其中PCV1 被認為是豬腎細胞系中一種污染物， 已證實無致病性；PCV2 是引起PMWS 等圓環病毒相關病的主要病原之一；PCV3 于2016 年由Phan 等[8]發現并命名，多發現于患有皮炎與腎病綜合征（PDNS）的患豬體內，其致病性以及現有商品化PCV2 疫苗對其免疫效力等當前尚無定論[9-10]。 2016 年 Xiao 等[11]研究表明，PCV2d 已成為在美國流行的主要基因型。

根據江斌[1]調查研究，福建省當前主要流行的圓環病毒為PCV2，但仍存在PCV3 感染；我國近幾年相繼報道部分省市檢測出PCV3[9]，劉建奎等[12]通過對福建省豬場的圓環病毒病血清學調查發現， 近年來PCV3 感染率近12.5%。 圓環病毒病是典型的免疫抑制病，感染后會降低機體自身的免疫力，并通過免疫抑制作用影響疫苗的免疫效果。 其中PCV3 對母豬的影響較大，會引發母豬的多種繁殖疾病，如流產、木乃伊胎等。雖然當前市面上的圓環病毒病疫苗均可達到理想的免疫效果， 但豬場仍需加強飼養管理，規范引種，并做好生物安全工作以防止圓環病毒野毒感染。

2.4 偽狂犬病抗體水平與分析 偽狂犬病病毒又稱豬皰疹病毒Ⅰ型、奧葉茲基氏病病毒，屬于皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬[2]。 臨床上可致母豬流產、不發情、返情、屢配不孕等癥狀；新生仔豬感染后病死率可達100%， 并伴有嚴重的神經癥狀； 保育仔豬瘦弱、“掉隊”；育肥豬發病后常繼發細菌感染（如傳染性胸膜肺炎等）導致死亡。 當前，龍巖地區豬場所使用的疫苗主要以Bartha K61 株、HB2000 株以及上市不久的C 株為主，其中PRV 的主要毒力基因（gE基因）均缺失，可以確保疫苗的安全性且可以辨別野毒與疫苗產生的抗體，因此，使用ELISA 診斷試劑盒檢測gE 抗體可以直接反映野毒的感染情況。

在292 份所檢血清中檢出陽性90 份，偽狂犬病野毒的平均陽性率為30.82%， 與筆者2018 年對福建省龍巖市豬偽狂犬病血清學調查的結果30.41%相近。在10 個場中，陰性場有3 個，野毒感染較為嚴重的為C 場，其陽性率高達91.89%，建議每年“一刀切”免疫6 次，即每2 個月1 次，并定期對豬群進行監測，最終建立新的陰性群。 整體來看，龍巖地區的偽狂犬病控制與凈化仍任重而道遠。

本次所檢的10 個規模化豬場，豬瘟的免疫效果較好，圓環病毒病、豬繁殖與呼吸綜合征的免疫陽性率較高，但各場之間抗體水平差異較大，仍需引起一定的重視。