不同提取方法對白花前胡指標成分含量的影響

徐 廣，譚秋生，楊 丹，傅 滟，郭 瑀，羅 川，羅 敏，鄧才富

(重慶市藥物種植研究所 中藥材生產質量控制研究中心，重慶市道地藥材規范化生產工程技術研究中心，重慶 南川 408435)

中藥前胡為傘形科植物白花前胡PeucedanumpraerupterumDunn.的干燥根，具有降氣化痰、疏散風熱等功效。臨床多用于外感風熱、痰熱喘咳、風熱咳嗽等癥[1]。現代研究表明，其主要藥用活性成分為白花前胡甲素、白花前胡乙素等香豆素化合物，主要的藥理作用為鈣通道阻滯、降血壓、抗心律、平喘、抗癌等[2]。目前，國內外對其藥理活性[3-4]和鑒別研究較多[5-6]，對不同產地、野生和栽培的白花前胡指標成分分析也有報道[7-8]，但白花前胡提取方式對其指標成分的影響研究較少。筆者在對不同企業提供的樣品開展質量分析的過程中，發現不同樣品其內在成分的差異極其明顯，因此，利用超聲法和回流法對白花前胡樣品進行不同方式提取，采用HPLC法測定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量，研究兩種提取方式對白花前胡成分的提取效果，探討提取方式對白花前胡甲素和白花前胡乙素含量的影響，為前胡藥材的質量評價提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀[包括LCsolution色譜管理處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動進樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測器、日本島津Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)、CBM-20Alite系統控制器]、METTLER AL104型電子天平(感量：0.1 mg)，CPA225D型電子天平(感量：0.01 mg)，Molecular標準智能型純水機，KQ-1000DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，DHG電熱恒溫鼓風干燥箱(上海龍躍儀器有限公司)，HH-8數顯恒溫水浴鍋(上海汗諾儀器有限公司)。

1.2 材料

白花前胡樣品均采自重慶市石柱縣沙子鎮青園村前胡種植基地，海拔高度1 130 m左右，選取種植基地土壤類型差異較為明顯的沙壤土、棕紫土、灰棕紫泥和紫色夾砂土4種土壤類型所產藥材樣品，經重慶市藥物種植研究所鄧才富研究員鑒定為PeucedanumpraerupterumDunn.正品白花前胡。

1.3 試劑

甲醇(色譜純)：重慶川東化工(集團)有限公司，批號：20190901；三氯甲烷：重慶川東化工(集團)有限公司，批號：20190702。水：均為臨用現制的超純水；白花前胡甲素、白花前胡乙素對照品：中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111711-201904、111904-201804。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

按《中華人民共和國藥典》2015年版一部(以下簡稱“藥典”)“前胡”標準項下【含量測定】規定測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm 5．0 μm)；以甲醇-水(75∶25)為流動相；檢測波長為321 nm，理論塔板數按白花前胡甲素峰計算應不低于3 000。柱溫：室溫。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取白花前胡甲素、白花前胡乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL各含白花前胡甲素73.0 μg、白花前胡乙素79.8 μg的混合溶液，即得(色譜見圖1)。

圖1 白花前胡甲素(1)、白花前胡乙素(2)混合對照品色譜

2.3 供試品溶液制備

A：2015年版藥典超聲方法：取前胡樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)15 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續濾液5 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

B：回流法：采用文獻改進方法：取前胡樣品粉末(過三號篩)約2.0 g，精密稱定，加100 mL色譜純甲醇回流6 h，過濾，濾液濃縮，取殘渣，加甲醇溶解并定容至10 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 樣品測定

精密稱定各樣品，按照“2.3”項下方法分別制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣10 μL，各色譜見圖2，對測定峰面積進行積分，計算樣品含量，見表2。

注：S1：沙壤土；S2：棕紫色土；S3：灰棕紫泥；S4：紫色夾砂土

表2 不同提取方式各樣品指標成分含量 (%)

3 討論

3.1 土壤類型對藥材質量的影響

由表2數據可以看出，在同一管理模式下4種不同土壤類型中產出的白花前胡樣品，其甲素和乙素的含量存在較大差異，表明不同土壤類型自身所含礦物質的差異對其所產藥材內在質量有一定影響。其中，以2015年版藥典超聲法為參照，紫色夾砂土所產藥材樣品的白花前胡甲素含量為0.846%，不滿足藥典不低于0.9%的要求，其他3種土壤類型所產藥材樣品白花前胡甲素含量均能滿足；而4種土壤類型所產藥材樣品的白花前胡乙素含量均低于藥典0.24%的最低要求。表明生產企業在選擇種植基地時不能忽略前期選址過程中對生態環境和具體土壤礦質養分的實際考量。

3.2 提取方式對藥材指標成分檢出量的影響

對比4組樣品回流制樣和超聲制樣分析結果可以發現，藥典超聲法提取制樣較回流法提取制樣處理后白花前胡甲素含量均低，回流法較藥典超聲法使白花前胡甲素提高了8.7%～21.9%，而白花前胡乙素含量則相反，藥典超聲法較回流法使白花前胡乙素提高了10.4%～21.95%。

回流法提取溫度較高，所用溶劑甲醇極性較大；超聲法提取溫度相對較低，三氯甲烷極性相對小；對比白花前胡甲素和白花前胡乙素的熱穩性，乙素須0～10 ℃避光保存表明乙素熱穩性相對較差。4個樣品白花前胡乙素含量在回流法提取條件下均低于超聲法，可能是回流溫度高，使白花前胡乙素有一定程度的破壞；且由于相似相容原理，通過對比白花前胡甲素和白花前胡乙素的HPLC出峰時間，推測甲素極性較乙素大，故乙素更易溶于極性較小的三氯甲烷中；反之，甲醇極性相對較大，甲素含量回流法均高于超聲法。

《中華人民共和國藥典》2015年版一部前胡項下的HPLC測定方法中供試品溶液的制備采用三氯甲烷為提取溶劑，三氯甲烷屬于二類有毒試劑，對檢驗檢測人員身體可產生一定程度的危害。而在現實生活中，中藥的煎煮熬制并無危害人體健康的有機溶劑參與，因而應積極開展更貼近應用實際的檢驗檢測方法研究，形成以生物評價為核心，以活性成分與生物活性相結合的中藥整體質量評價方法，從而推動中藥種植質量提升。