微小RNA-17-5p在食管鱗癌中的表達及其對食管鱗癌細胞增殖和侵襲的影響

吳占輝　武慧杰　周宏楊　王銳　楊青山　郭新鶴　張一然

摘要：目的 分析微小RNA-17-5p在食管鱗癌中的表達及其對食管鱗癌細胞增殖和侵襲的影響。方法 選擇實時熒光定量對ESCC組織以及細胞中miR-17-5p表達進行檢測，采用雙熒光素酶報告實驗分析miR-17-5p與PBL2直接的相互作用，分析其在食管鱗癌細胞中表達。結果 食管鱗癌組織中miR-17-5p表達水平比正常食管上皮組織高（P<0.05）。結論 食管鱗癌發生與發展過程中miR-17-5p均有參與，有望成為食管鱗癌潛在的分子治療靶點。

關鍵詞：RNA-17-5p;食管鱗癌;增殖和侵襲

微小RNA屬于內源性非編碼RNA分子之一。每一個miRNA分子中存在的潛在靶基因數量較多，多數mRNA均具有一個被miRNA結合的進化保守序列。相關研究得出，多個生物學過程均由miRNA的參與，與疾病進展和發展之間關系密切，尤其是腫瘤疾病，大部分miRNA有望成為治療和評估腫瘤預后的潛在分子靶點。近些年，臨床越來越關注miR-17-5p作為癌性的miRNA分子，本次研究主要檢測食管鱗癌組織與細胞當中miR-17-5p表達，對其相關細胞增殖和侵襲影響進行觀察和分析。

1、材料與方法

1.1材料

（1）細胞系：食管鱗癌細胞KYSE520、KYSE70、KYSE450、TE1、Eca109以及EC9706。（2）臨床資料：選取本院2021年1月-2021年11月在本院手術當中切除的食管鱗癌標本53例。入選患者手術之前均未接受過放化療治療，其中男性患者數量為35例，女性患者數量為18例，平均年齡（57.24±7.68）歲。

1.2方法

（1）培養：在含有10%胎牛血清的RPMI1640培養基中放置正常食管上皮細胞和食管鱗癌細胞，將其置于37℃、5%CO2條件下培養。（2）轉染：根據相關說明書將其轉染為TE1與EC9706細胞。（3）實時反應：采用試劑盒提取食管鱗癌細胞和組織RNA，利用試劑盒進行逆轉錄，檢測miR-17-5p表達水平。（4）檢測：使用細胞裂解液對TE1、EC9706細胞總蛋白進行提取，通過相應技術分離蛋白。（5）檢測細胞增殖：將轉染的TE1、EC9706細胞制成單細胞懸液，在96孔板中接種，每孔2000細胞，采用酶標儀對吸光度（A）測定，然后采用相應軟件繪制細胞生長曲線。（6）染色：收集細胞之后姐終于96孔板中，每孔4000細胞，按照1000：1進行稀釋，然后在其中加入TritonX-100、甘氨酸以及細胞固定液，30min之后除去反應液，漂洗，通過顯微鏡觀察染色結果。（7）預測靶點：利用miRDB、starBase以及TargetScan等預測軟件預測miR-17-5p可能靶基因。

1.3統計學分析

采用GraphPad Prism 6.0統計學軟件分析數據，計量資料用（`x±s）表示，組間比較方差用獨立樣本的t檢驗，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2.結果

2.1miR-17-5p在ESCC細胞和組織中的表達

食管鱗癌組織中miR-17-5p表達水平比正常食管上皮組織高，比較具有顯著差異（P<0.05）。詳見表1。

3.結論

miRNA異常表達參與腫瘤的發展和轉移，與患者生存存在非常密切的關系。在不同腫瘤當中miRNA可能發揮抑癌基因或者癌基因功能，臨床研究中存在應用潛力較大。相關研究得出，miR-17-5p與人乳腺癌轉移和進展之間存在非常密切的關系，通過相關靶向信號途徑發揮相應的作用。

miRNA作為治療制劑的最主要特點為具有靶向多于1個基因的潛能，而且特定的miRNA可能因為靶向調控基因不同所發揮的生物學功能也存在一定差異，所以需要注意調控miRNA靶向基因的意義十分重要。本次研究采用相關軟件預測靶基因，發展miR-17-5p中RBL2是一個非常重要的調控靶點，根據報告顯示轉染后其熒光素酶活性得到有效降低。除此之外，為進一步證實miR-17-5p中RBL2是直接作用靶點，本次研究采用回復實驗，聯合應用miR-17-5p和RBL2 siRNA抑制劑，結果得出RBL2 siRNA可部分逆轉miR-17-5p所引發的食管鱗癌細胞侵襲和增殖能力降低，得出食管鱗癌的發生和發展過程中miR-17-5p與RBL2可能共同參加。

綜上所述，在食管鱗癌細胞和組織當中miR-17-5p呈高表達，其與食管鱗癌的TNM高分期、淋巴結轉移以及患者預后不良存在一定關系。miR-17-5p抑制劑顯著下調食管鱗癌細胞當中的miR-17-5p表達，表達下調使食管鱗癌細胞侵襲和增殖能力得到顯著抑制。

參考文獻：

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項目來源于：2021年承德市科學技術研究與發展計劃項目（項目編號：202109A182）