一例豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病混合感染的診斷與防治

王宗建，夏培仁，夏維婕，滕金玲

摘要：某戶外購900頭育肥豬，體重約25kg，引進一周后發病。病豬主要表現發燒、氣喘，用替米考星、多西環素等藥物治療效果不佳，發病率上升，重者死亡，造成一定損失。針對此類病情，作者進行了流行病學調查、臨床觀察、實體解剖及實驗室診斷，確診該病例是由豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病混合感染引起，通過采取綜合措施控制了病情。

關鍵詞：豬偽狂犬病;副豬嗜血桿菌病;臨床癥狀;剖檢變化;gE抗體;細菌分離培養鑒定

1臨床癥狀

病豬精神不振，食欲降低或廢絕，發燒，體溫39.5～41℃，咳嗽，氣喘，關節腫脹，患處手感發熱或有波動感，跛行，有些病例表現叫聲嘶啞，眼神呆滯，后驅搖擺，走路不穩。重癥病例張口氣喘，食欲廢絕，衰竭而死，病程7～10d。

2剖檢變化

頜下淋巴結腫大硬化，壞死，切面呈紅白相間（圖1）;咽部組織水腫;扁桃體充血呈暗紅色，有白色豆粒狀或片狀壞死灶（圖2）;氣管內有豐富的血性黏稠液體或泡沫;肺臟腫大，充血，表面有白色壞死病灶，灶周暗紅，病健部分界明顯;肺臟被膜表面覆有黃白色纖維素滲出物;心包積水;胸腔積水;腹腔內有纖維素滲出物附著;肝臟腫大，變硬，上有白色壞死灶（圖3）;腎臟有少量出血點，體積無變化;脾臟上有多量刺狀或點狀白色壞死灶;腸系膜淋巴結腫大壞死，呈紅白相間的大理石樣病變，質地硬化;腹股溝淋巴結水腫，切面呈血色點狀壞死灶;髖關節、膝關節內有大量黃白色黏稠液體（圖4）。

疑似診斷：結合臨床癥狀、剖檢病變綜合診斷，該豬群疑似感染豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病。為進一步確診，進行了實驗室診斷。

3實驗室診斷

3.1細菌分離培養鑒定[1]

確保整個實驗過程嚴格執行無菌操作。

1）病料采集：無菌采集該病死豬的氣管、肺臟和關節液于滅菌容器內備用。

2）實驗材料：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）、麥康凱瓊脂、普通營養瓊脂、NAD（V因子）、新生牛血清、細菌微量生化反應管、革蘭氏染色試劑。

3）實驗步驟：用滅菌接種環挑取氣管內容物、肺臟深部刮取物、關節液三種病料分別接種在三個加有5%牛血清+0.005%NAD的 TSA在平板上，置于37℃恒溫培養箱中培養24h，觀察結果。

菌落形態：三個平板上均長有光滑、圓形、邊緣整齊、灰白色、半透明、中等大小的菌落。

培養特性：用滅菌接種環挑取該分離菌單個典型菌落分別接種在5%牛血清+TSA +0.005%NAD平板、5%牛血清+TSA平板、普通營養瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板上，置37℃恒溫培養箱中培養24h，觀察：該菌只能在TSA+牛血清+NAD（V因子）平板上良好地生長，其余三種平板均無細菌生長，說明此菌為“嗜V因子生長菌”。

革蘭氏染色鏡檢：挑取典型菌落，革蘭氏染色后顯微鏡下觀察，該菌呈多形性，絲狀、纖細長桿菌、纖細短桿菌、小球桿菌或小球菌為淡紅色的革蘭氏陰性菌（G-）。

生化試驗鑒定：該菌尿素酶試驗陽性、接觸酶試驗陽性，氧化酶試驗陰性。能發酵蔗糖、葡萄糖，不發酵山梨醇、甘露醇。

根據以上鑒定結果判定，該菌為副豬嗜血桿菌。

3.2豬偽狂犬野毒感染檢測[2]

1）組織病原學檢測

①樣本制備：無菌采集病死豬的頜下淋巴結、扁桃體、腦、脾臟適量，混合研磨、離心、制備，取上清液備用;②實驗操作步驟（略）。用豬偽狂犬病毒（gE基因）實時熒光PCR檢測試劑盒（世紀元亨）檢測上述組織中豬偽狂犬病毒gE基因。結果判定：被檢樣品閾值（Ct值）≤30并出現特定擴增曲線的為PRV陽性;③檢測結果：該樣本Ct值=20.37<30并出現特定擴增曲線，PRV核酸陽性，表明該豬感染偽狂犬野毒。

2）豬偽狂犬病毒gE抗體檢測

①需要抽取樣本量（n）的確定。根據公式n={1-（1-α）1/D}×{N-（D-1）/2}，計算n=58（其中，N-群體數量=900，P-預期流行率=5%，M-檢測方法（ELISA）敏感性=98%，α-置信水平=95%，D=N×P×M）;②樣本制備：用5mL一次性采血器，豬前腔靜脈采血，隨機抽取58份血樣，3，000r/min，離心5min，制備血清;③實驗操作步驟（略）。采用IDEXX豬偽狂犬病病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒。使用前，所有試劑和微量包被反應板一律恢復至室溫（18～26℃），并通過輕輕渦旋、旋轉或顛倒混勻。整個實驗過程嚴格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。結果有效性：陰性對照N（OD650）的平均值（0.873）減去陽性對照P（OD650）的平均值（0.162）等于0.711，大于0.300，試驗成立。計算S/N值，即樣品S（OD650）與陰性對照N（OD650）的平均值之比。結果判定：被檢樣本S/N值≤0.60的，該樣本判為陽性，即被偽狂犬野毒感染;被檢樣本S/N值>0.60，該樣本判為陰性;被檢樣本0.60