三種血小板檢測方法計數結果準確性評價

張家明，洪 流，卓少賢，韓日成，黃秀紅

1.廣東醫科大學附屬湛江中心醫院檢驗科，廣東 湛江 524045；2.廣東醫科大學附屬湛江中心醫院中醫科，廣東 湛江 524045；3.廣東醫科大學附屬湛江中心醫院輸血科，廣東 湛江 524045

血小板計數是臨床血常規檢測中重要的指標之一，其對疾病的診斷、療效監測及預后觀察均有重要意義。如今多參數的全自動血細胞分析儀發展快，已經廣泛應用于臨床檢驗工作，儀器法檢測血小板較手工法簡便、快速、重復性好及精密度高，但由于血細胞分析儀檢測血小板的原理不同，其抗干擾能力也不同，計數所得結果也有一定差別。為了保證檢驗結果的準確性，我們以經典的手工顯微鏡法為評價標準，觀察檢驗科XN-1000全自動血細胞分析儀的電阻抗法（PLT-I法）、激光染色法（PLT-O法及PLT-F法）檢測90例血小板結果異常標本的準確性，以期為實驗室檢測結果出現異常時提供最佳的解決方案，現將研究結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 主要儀器與試劑

應用日本SYSMEX公司生產的XN-1000全自動血細胞分析儀及其原裝配套試劑、質控品，顯微鏡為OLYMPUS CX21型，手工顯微鏡法使用的草酸銨稀釋液按《全國臨床檢驗操作規程（第4版）》［1］配制。

1.2 標本來源與分組

收集廣東醫科大學附屬湛江中心醫院2020年3月—2020年7月在門診及住院患者中使用XN-1000型全自動血細胞分析儀檢測顯示血小板計數結果不可靠的血常規標本90例。將90例標本分三組，其中大血小板組30例，儀器報警顯示“PLT Abn Dst”直方圖曲線右側右移，分布低且寬，可有尾部上翹現象，顯微鏡下見大血小板。小紅細胞組30例，電阻抗法檢測儀器報警顯示“Fragments”，MCV＜70 fl，血小板直方圖在血小板與紅細胞交界處有抬高表現，顯微鏡下可見小紅細胞或紅細胞碎片。低值血小板組30例，PLT＜30×109/L，可見低平的血小板直方圖曲線，儀器報警顯示“PLT Abn Dst/Thrombo”。

1.3 方法

每天檢測標本前先做質控，質控結果在控后進行標本檢測，每份標本均用XN-1000全自動血細胞分析儀的PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法檢測2次，取平均值作為測定值。人工計數法取顯微鏡手工計數2次結果的均值為測定值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性采用Pearson相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本的結果比較

在大血小板組，PLT-I法檢測結果明顯低于顯微鏡法，而PLT-O法、PLT-F法檢測結果與顯微鏡法比較差異無統計學意義（P＞0.05）。小紅細胞組，PLT-I法檢測結果明顯高于顯微鏡法，PLT-O法、PLT-F法檢測結果與顯微鏡法比較差異無統計學意義（P＞0.05）。低值血小板組，PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法計數結果與顯微鏡法比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本結果（±s）

表1 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測三組標本結果（±s）

a表示與顯微鏡法比較，P＜0.05。

組別大PLT組（n=30）小RBC組（n=30）低值PLT組（n=30）PLT-1法100.09±42.07a 228.43±93.52a 10.75±7.07 PLT-0法121.71±40.86 173.88±73.45 11.90±6.12 PLT-F法123.58±33.79 176.23±56.46 12.04±4.29顯微鏡法124.25±45.16 177.14±76.28 11.99±6.93

2.2 PLT-I法、PLT-O法、PLT-F法與顯微鏡法檢測結果相關性分析

PLT-F法與顯微鏡法三組標本檢測結果相關性最高，相關系數r＞0.990。PLT-O法與顯微鏡法三組標本檢測結果相關性較高，相關系數r＞0.973。PLT-I法與顯微鏡法三組標本檢測結果相關性均較低，相關系數r只有0.628～0.850之間，見表2。

表2 PLT-I法、PLT-O法及PLT-F法與顯微鏡法檢測結果相關性分析

3 討論

目前，臨床上使用的全自動血細胞分析儀基本上都能達到檢測快速、簡便、重復性好及精密度高的特點，儀器檢測血小板的原理多為經典的電阻抗法，但當血標本有大血小板、小紅細胞、紅細胞碎片等干擾因素存在時，可影響儀器計數血小板結果不準確，容易導致臨床誤診、漏診。在臨床檢驗工作量不斷增多的同時，如何快速識別并高效降低儀器計數血小板結果假性降低或假性增高的發生率，為臨床提供科學客觀的實驗室數據顯得尤其重要。

PLT-I法計數血小板是利用電阻抗原理檢測，運用的是RBC/PLT通道，每次可檢測計數20萬～25萬個細胞，具有重復性好，速度快、成本低等優點。PLT-I法分別在25～250 fL和2～35 fL范圍內分析紅細胞和血小板，但當標本異常時，其準確性有一定的局限［2］，如小紅細胞或紅細胞碎片將被誤識別為血小板，使血小板結果假性增多。而大體積的血小板會被誤識別為紅細胞，導致血小板計數結果假性降低。本研究結果顯示，PLT-I法在小紅細胞組和大血小板組的檢測結果與顯微鏡法比較，無可比性，在大PLT組、小RBC組及低值PLT組，PLT-I法與顯微鏡法的血小板檢測結果相關性均較差。可見，PLT-I法應用于檢測此幾類標本的血小板計數結果不準確。

PLT-O法采用PLT-O/RET通道，通過半導體激光技術，采用熒光染料（聚次甲基染料）對血小板進行染色，在前向散射光—熒光強度的二維散點圖上進行檢測計數，本方法經過染色后能有效排除了電阻抗法無法排除的部分顆粒的影響，具有對小紅細胞、紅細胞碎片、大血小板和乳糜微粒等抗干擾能力強的特點［3-4］，同時也使PLT-O對低值血小板計數的檢測結果準確性更可靠［5-6］。本研究結果顯示，在大PLT組、小RBC組及低值PLT組共90例標本的PLT-O法血小板檢測結果與顯微鏡法比較無可比性，且這兩種方法的檢測結果相關性良好，相關系數r＞0.973。

PLT-F法是Sysmex XN系列血細胞分析儀的低值血小板獨立檢測通道，運用流式檢測原理，使用特殊新型的熒光染料（以嗯嗪為主）特異地與血小板中線粒體的DNA及小胞體的RNA進行結合，染色后形成不同的前向散射光和側向熒光強度，通過檢測散射光與熒光，具有較高的特異性，而且對低值血小板標本進行5倍顆粒分析技術［4］，能計數出準確的血小板數值。PLT-F法可以排除大血小板、小紅細胞、微小血小板、細胞碎片及溶血標本對血小板計數的影響，計數得到準確的血小板結果，尤其是在低值血小板計數方面有重要臨床意義［7］。也有研究［8］報道PLT-F法能準確可靠地計數峰高變低，底部增寬的可疑大血小板樣本，從而比PLT-I法更能有效識別血小板。本研究結果顯示，PLT-F法在三組90例標本的血小板計數結果與顯微鏡法最為接近，且PLT-F法與顯微鏡法的相關性很高，相關系數r＞0.990，比PLT-I法及PL-O法稍高，表明PLT-F法的綜合性能略優于PLT-I法及PL-O法。

綜上所述，在臨床檢驗工作中醫生可以采取較快速、簡便有效的PLT-I法對血小板進行大批量檢測，當儀器出現異常報警，提示標本可能為小紅細胞、細胞碎片、大血小板等情況干擾時，可采用PLT-O法或PLT-F法進行復檢，如遇標本溶血或低值血小板時，用PLT-F法復檢結果最為準確，必要時進行人工鏡檢。