中國多地區豬繁殖與呼吸綜合征流行病學回溯性調查（2018-2020年）

牛婷婷，張淼潔，原 霖，張 寧，高夢錦，張小元，朱連德

（北京中科基因技術股份有限公司，北京 102600）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），又稱“豬藍耳病”，是一種嚴重影響全球養豬業的疫病。該病病原為有囊膜的RNA病毒，可引起感染豬發熱、厭食，妊娠母豬晚期流產、早產、產死胎/弱胎和木乃伊胎等繁殖障礙癥狀，以及各種年齡豬（特別是仔豬）的呼吸困難。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）分為基因Ⅰ型（歐洲株）與Ⅱ型（美洲型），極易變異和演化，呈現毒株的多樣性與致病性的差異，其變異主要集中于非結構蛋白Nsp2編碼區、結構蛋白ORF5，同時毒株之間也存在一定的重組現象。

文章對2018-2020年我國部分地區的樣品進行回溯性調查研究，從PRRSV抗體、核酸檢測以及分子遺傳變異3個方面進行了檢測和分析，希望了解近期我國豬繁殖與呼吸綜合征的流行病學變化情況，為該病的防控和區域凈化提供數據支持。樣品

陽性場：只要場內樣品檢出1例陽性樣品，該場為陽性場

場陽性率：陽性場次數/被檢場次數×100%

場內個體陽性率：被檢場場內陽性樣品總數/被檢場檢測樣品總數×100%

樣品陽性率：所有被檢樣品檢測結果為陽性數量/檢測份數×100%

1.3.2 統計方法

根據被檢豬場規模的差異，將被檢豬場分成規模養殖場（存欄≥3 000頭）和散戶（存欄＜3 000頭），用Epi info7軟件計算不同組別的OR（Odds Ratio，比值比）、95%CI（Confi dence interval，置信區間）和P值，分析各組間的抗體及核酸陽性率差異。

1.3.3 空間分布

用Power BI軟件制作所有被檢樣品來源地區在我國的分布情況。

1 PRRSV抗體檢測

1.1 樣品來源

樣品來自于2018-2020年我國24個省份3 525個不同規模豬場共計106 924份血清樣品。

1.2 檢測方法

抗體檢測采用ELISA方法，使用商品化試劑盒進行檢測，詳細操作步驟及結果判定按照試劑盒說明書進行。

1.3 分析指標

1.3.1 指標定義

陽性樣品：檢測結果為陽性的

1.4 抗體檢測結果及分析

2018-2020年PRRS抗體不同地區場內及個體抗體平均陽性率分別為88.9%與70.6%。從不同年份看，2018-2020年場陽性率分別為95%、92%、86%，樣品陽性率分別為79%、77%、64%，均呈現下降趨勢(見圖1）。

圖1 2018-2020年PRRSV抗體陽性率分布圖

與前兩年相比，2020年場內個體陽性率中位數較低，為78.57%，但是分布更為離散，提示不同場點的場內個體抗體陽性率差異較大（見圖2）。

圖2 2018-2020年場內個體抗體陽性率分布圖

從不同季度看，PRRSV抗體的樣品陽性率分布未呈現出季節性的特征，但自2020年第一季度起呈持續降低趨勢（見圖3）。

圖3 2018-2020年不同季度PRRSV抗體樣品陽性率

從不同區域看，2018年、2019年各地區場陽性率、樣品陽性率差異不大；2020年，場陽性率華中區最高（88.3%）、華南區最低（58.7%），樣品陽性率西北區最高（75%）、西南區最低（24%）（見圖4）。

圖4 2018-2020年我國不同區域PRRSV抗體陽性率分布圖

從不同養殖場類型來看，規模場場陽性率88.1%，散戶場陽性率89.2%，經統計學檢驗，規模場和散戶的場陽性率未發現顯著差異（見表1）。

表1 PRRSV抗體在不同養殖規模場分布差異

2 PRRSV核酸檢測

2.1 樣品來源

樣品來自于2018-2020年我國27個省份3 981個不同規模豬場（場次）的23 708份樣品，樣品類型為組織、豬全血、精液、唾液、精液等。

2.2 檢測方法及指標

核酸檢測采用RT-PCR和qPCR方法，使用商品化試劑盒進行檢測，詳細操作步驟及結果判定按照試劑盒說明書進行。

統計分析指標同1.3。

2.3 PRSSV核酸檢測結果及分析

2018年到2020年，PRRSV核酸的場陽性率逐年降低，分別為45.4%、27.8%、22.9%；樣品陽性率也呈現降低趨勢，2018年最高，為22.1%，2019年、2020年分別為11.8%和13.9%，較2018年有較大幅度降低（見圖5）。

圖5 2018-2020年我國PRRSV抗體陽性率分布圖

從不同季度看，除2018年外，其余年份第4季度樣品陽性率較高（見圖6）。

圖6 2018-2020年不同季度PRRSV核酸樣品陽性率分布圖

從不同區域看（見圖7），不同地區場陽性率、樣品陽性率差異較大；2020年，場陽性率東北區最高（30%）、華南區最低（6.2%）；樣品陽性率東北區最高（21.7%），華南區（1.8%）、西南區最低（1.5%）。

圖7 2018-2020年我國不同區域PRRSV核酸陽性率分布圖

從不同養殖場類型看，規模場樣品陽性率為14.6%，散戶樣品陽性率為13.8%，經統計學檢驗，不同養殖類型場點的樣品陽性率存在一定差異（見表2）。

表2 PRRSV平均個體核酸陽性率在不同宿主中分布差異

3 PRRSV分子生物學分析

共對336份樣品的PCR擴增產物進行測序，獲得73條基因序列，將ORF5與NSP2片段序列通過DNASTAR軟件的MegAlign功能與GenBank上已發表的國內外流行PRRSV參考毒株進行序列比對，構建遺傳進化樹，進行同源性分析。

經測序分析（見表3、圖8），PRRSV NADC30-like毒株占比53%，PRRSV高致病型毒株占比22%，PRRSV經典型毒株占比10%，PRRSV歐洲型毒株占比4%，PRRSV重組毒株占比11%，重組毒株主要來源于華南地區。

圖8 2018-2020年我國不同區域PRRSV核酸陽性率分布圖

表3 2018-2020年國內部分地區PRRSV分離毒株分型占比情況

從毒株類型來看（見表4、圖9），2019年和2020年毒株類型呈現出多樣性，主要為NADC30-like株，其次為高致病型毒株，重組毒株、經典型毒株、歐洲型毒株并存。2018年因數據來源局限性，分離獲得毒株主要為NADC30-like。

表4 2018-2020年國內部分地區PRRSV分離毒株分型占比情況 %

圖9 2019-2020年國內部分地區PRRSV分離毒株分型占比情況

PRRSV ORF5基因進化樹分析：所獲ORF5基因序列43條，其中，有40株為美洲型，3株歐洲型。其中，以HENAN-XINX、NADC30為代表株的lineage1的14株、以CH-1a、JXA1為代表株的lineage8（sublineage8.7） 的 15株、lineage5（sublineage5.1）5株，其代表株為VR2332和BJ-4，QYYZ為代表的lineage3的有6株。LV毒株為代表的genotypeⅠ有3株。

PRRSV NSP2基因進化樹分析：所獲 NSP2基因序列30條，與HUN4、JXA1和TJM毒株等國內流行毒株屬于同一進化分支且遺傳關系較近，均屬于PRRSV美洲Ⅳ型基因亞型，其中與TJM毒株遺傳進化關系最為接近，與歐洲型代表毒株遺傳進化關系較遠。

通過核酸檢測結果與分子生物學分析顯示，2018-2020年我國部分地區豬群感染PRRSV較為普遍。主要是美洲型毒株lineage（NADC30-like）與 lineage8（HP-PRRSV）。 感染豬群存在不同譜系PRRSV毒株混合感染，且呈現不同程度的變異。

4 小結

本調查結果顯示：1）對106 924 份豬血清PRRSV抗體檢測結果進行分析，2018年樣品陽性率為79.0%，2019年為76.8%，2020年為64.9%，整體呈現下降趨勢。2）對23 708份樣品PRRSV核酸檢測結果進行分析，每年第4季度樣品陽性率均高于當前前3季度，呈現出季節性特征。3）基因序列分析顯示，PRRSV流行毒株主要為美洲型毒株lineage1（NADC30-like）與 lineage8（HP-PRRSV)。感染豬群存在不同譜系PRRSV毒株混合感染，且呈現不同程度的變異。43例樣品的ORF5 基因序列與美洲型代表毒株同源達78.8%～100.0%，其中與LV和LENA 毒株同源性低，為51.8%、21.7%，與其他各型代表毒株的同源性均在78.8%以上；30例樣品NSP2 基因序列與美洲型代表毒株同源達 78.5%～99.4%，其中與JXA1毒株同源性最高，達99.4%，而與其他各型代表毒株的同源性均在 88.4%以下。

5 討論

從調查情況來看，PRRS在我國仍然呈現廣泛流行，防控形勢總體平穩，但不同地區呈現一定差異，不同豬場之間的感染情況差異較大。該病臨床上主要表現為繁殖障礙、呼吸道疾病及豬群繼發感染。對于PRRS的診斷，可以通過流行病學特點以及臨床癥狀做出初步診斷，但是由于亞臨床癥狀以及繼發感染普遍存在，該病的鑒別診斷需要通過實驗室檢測后方可確定。PRRSV屬于RNA病毒，在感染壓力和外環境影響下，其基因序列的變異和重組，導致毒株種類眾多，不同毒株的致病力不同，臨床情況復雜，防控難度加大。因此，對于PRRSV毒株類型的變化及其病原生態學，需要持續監測其演變情況。對于養殖場來說，通過對豬場毒株的基因類型進行測序分析，結合整體情況制定合適的防控方案，做好生物安全措施，適時開展凈化，減少因免疫抑制病引發的繼發性細菌感染，是有效防控PRRS，降低豬場損失的必要措施。

5.1 PRRSV抗體檢測陽性率持續降低

我國PRRS的抗體陽性率普遍較高，這與疫苗的普遍使用有直接關系。但是，2018-2020年度PRRSV抗體呈整體下降趨勢，特別是2020年，從第1季度到第4季度，抗體陽性率持續下降。自從2018年非洲豬瘟在我國暴發之后，豬場為盡量降低豬群應激，采取了減少疫苗使用種類及頻次的措施，生物安全措施較好的部分種豬場開始進行PRRS凈化，對陽性豬只進行了檢測、淘汰等措施，這可能是導致抗體陽性率持續降低的原因之一。東北、華東以及西北3個地區PRRSV的抗體陽性率相差不大，均在70%以上；而華中、華北地區PRRSV抗體陽性率次之，在61%～69%之間，而西南地區PRRSV抗體陽性率最低，為26.3%。西南地區PRRSV抗體陽性率最低的一個原因是缺失2018年的樣品數據，導致其平均抗體陽性率較低，因此該數據結果與其他區域不具備可比性。

5.2 與非洲豬瘟在我國發生前相比，PRRSV核酸陽性率呈現明顯的降低趨勢

2018-2020年共收集到7個區域27個省份不同規模豬場樣品進行核酸檢測，統計分析顯示，PRRSV核酸陽性率整體呈現明顯的下降趨勢，場陽性率由2018年的45.4%下降到2020年的22.9%，樣品陽性率由2018年的22.1%下降到2020年的13.9%。與2018年非洲豬瘟在我國發生之前相比，PRRS流行與發生比較平穩。隨著生物安全管理被納入豬場的核心工作，豬場生物安全體系不斷完善，車輛洗消、人員管控、引入豬只隔離檢測等措施的實施，在很大程度上降低了病毒性疫病對養殖環境的污染，也大幅度降低了PRRSV的污染面，豬場感染率呈現明顯的下降態勢，在PRRS防控方面顯現出了積極成效。

從時間特征來看，第4季度核酸陽性率高于前3季度。因冬春季節氣候原因，在豬場管理相對薄弱的情況下容易發生呼吸道、消化道疾病，且PRRSV 對熱和干燥敏感，在熱和干燥的條件下能夠迅速失活，適應潮濕和陰冷環境的理化特性，造成PRRS流行與季節有一定的相關，但由于此次調查數據僅為2018-2020年我國部分地區收集的樣品，部分地區和年份樣品數量較少，不能完全代表全國疫病流行情況，僅作為臨床疫病防控參考，是否有顯著差異仍需持續監測才可以進一步證實。

5.3 PRRSV遺傳變異情況復雜，多種類型毒株共存，主要流行毒株為NADC30-like

調查結果顯示，目前我國豬群主要流行的仍然為美洲型毒株lineage1（NADC30-like），高致病型毒株、重組毒株、經典型毒株、歐洲型毒株等多種毒株類型共存。近年來，PRRSV新亞群逐步增多且出現毒株重組現象，本次調查結果發現的毒株中重組毒株占比為11%。雖然目前PRRSV 基因組變異與致病性增強或減弱之間的關系仍不明確，但常常由于新毒株的傳入而造成豬場PRRS不穩定，這些重組不僅導致新的PRRSV基因型出現，使病原鑒定的復雜性提高，而且一定程度上影響了PRRSV的毒力，同時也使該類毒株的致病性發生改變，給防控帶來很大挑戰。此外，自2016年新毒株NADC34-like毒株在美國首次報道后，該毒株逐漸在世界范圍內流行開來，2017年，NADC34-like PRRSV在我國首次報道，NADC34-like毒株屬于Sublineage1.5的一員，已在我國多個地方取代高致病性PRRSV（HP-PRRSV）成為主要的流行株，對國內也存在嚴重的威脅，因此，我們必須對NADC34-like毒株加強監測力度，做好防控措施。同時近期美國豬群主要流行毒株PRRSV 1-4-4變異株Lineage 1C毒株，也不容忽視。通過不斷跟蹤毒株的變異情況，分析毒株的變異方向，可提早預測PRRS的流行趨勢，減少其造成的經濟損失。

通過2018-2020年中國多地區PRRS流行病學回溯性調查，對我國部分地區的樣品PRRSV抗體、核酸檢測以及分子遺傳變異3個方面進行檢測和分析，了解了PRRS在我國流行變化情況，為PRRS防控和下一步區域凈化提供了一定的數據參考。