柏蛇濕疹膏提取液抗氧化活性的研究

朱雨晴 俞彩霞 朱杰 金姬 周文燦

【摘 要】目的：以柏蛇濕疹膏提取液，并對其抗氧化活性進行驗證。方法：柏蛇濕疹提取液測定清除ABTS+·和超氧自由基的活性，驗證其抗氧化能力。結果：柏蛇濕疹膏提取液具有較強的體外抗氧化活性，其抗氧化能力低于Vc，略優于鹽酸小柴堿單劑。結論：證實柏蛇濕疹膏具有一定的體外抗氧化活性。

【關鍵詞】中藥膏方，柏蛇濕疹膏，抗氧化活性

Study on antioxidant activity of extract of cypress snake eczema ointment

Zhu Yuqing， Yu Caixia， Zhu Jie， Jin Ji， Zhou Wencan

Hangzhou Fuyang maternal and child health care hospital， Hangzhou， Zhejiang 311400， China

【Abstract】Objective： to take the extract of cypress snake eczema ointment and verify its antioxidant activity. Methods： the scavenging activities of ABTS +· and superoxide free radicals were measured to verify its antioxidant ability. Results： the extract of Baishe eczema ointment had strong antioxidant activity in vitro. Its antioxidant capacity was lower than Vc and slightly better than that of xiaochaine hydrochloride. Conclusion： it is confirmed that Baishe eczema ointment has certain antioxidant activity in vitro.

【Key？Words】Traditional Chinese medicine ointment， cypress snake eczema ointment， antioxidant activity

根據我院皮膚科臨床治療的數據分析、療效結果，中藥濕疹方劑柏蛇濕疹膏，是基礎源于我院皮膚科治療濕疹的經典中藥處方，由黃柏、蛇床子、馬齒莧、金銀花四味中藥組成。其臨床治療效果明確，特別是在治療兒童濕疹方面，安全性更高，療效也更加顯著。其中黃柏（Cortex Phellodendri）為蕓香科植物黃皮樹以及黃檗的干燥樹皮[1]，生物堿類為其主要有效成分，以小檗堿（Berberine）含量最高[2]。探討柏蛇濕疹膏提取液體外抗氧化活性，為臨床用藥提供實驗依據。

1.1 儀器

Sartorius BD 211D十萬分之一電子平（塞多利斯）；Sartorius BS 110S萬分之一電子天平（塞多利斯）；旋轉蒸發儀（上海申生），SHZ-D（Ⅲ）型循環水真空泵（邦西儀器科技公司）。

1.2 材料與試劑

柏蛇濕疹膏提取液，由我院藥學部制備（處方由等量的黃柏、蛇床子、馬齒莧、金銀花組成），鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定院，含量測定用，批號：0726-201908）。磷酸溶液，甲醇，無水乙醇，抗壞血酸，ABTS，過硫酸鉀，鄰苯三酚，氯化亞鐵，鐵氰化鉀，Tris溶液，鹽酸等均購自華東醫藥股份有限公司。

2.1 ABTS自由基清除能力測定

ABTS+·清除率測定方法參照Li[3]等，稍作改進，流程見圖1。設置組別：陽性對照組、小檗堿組和提取液組，分別對應加入5個濃度梯度的Vc、鹽酸小檗堿和柏蛇濕疹膏提取液。設置平行實驗3次。

計算公式：清除率（%）=[A0-A/A0]×100%

A734nm可用于測定ABTS+·濃度，A734nm數值減小的幅度可用于反映清除能力的強弱，減小幅度越大，則表示總抗氧化的能力越強。Vc為常用的抗氧化劑，對細胞新陳代謝中形成的有毒自由基和其他活性氧（ROS）[4]具有較好的清除作用。柏蛇濕疹膏提取液對ABTS自由基清除率見表1。可見柏蛇濕疹膏對ABTS+·較強，但不及Vc，優于鹽酸小檗堿。清除能力隨著樣品濃度的增大而增強。

2.2 超氧自由基清除能力測定

參考Marklund[5]等方法稍作改進。設置組別：陽性對照組、小檗堿組和提取液組，分別對應加入5個濃度梯度的Vc、鹽酸小檗堿和柏蛇濕疹膏提取液。具體設計如下：

空白組：5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚+4 mL H2O

陽性組：4 mL 0.12 mg/mL Vc+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

對照組1：4 mL柏蛇濕疹膏+6 mL H2O

對照組2：4 mL鹽酸小檗堿+6 mL H2O

樣品組1：4 mL柏蛇濕疹膏+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

樣品組2：4 mL鹽酸小檗堿+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

超氧自由基清除率計算公式：清除率（%）= [1-（A樣品-A對照）/A空白]×100%

本實驗中的超氧自由基來源于鄰苯三酚自氧化。超氧自由基是活性氧中的一種，大量超氧自由基的產生會使人體過氧化，進而會引發多種與氧化有關的疾病。柏蛇濕疹膏提取液對超氧自由基清除率見表2。可見柏蛇濕疹膏對超氧自由基具有較強的清除能力，但不及Vc，優于鹽酸小檗堿。清除能力隨著樣品濃度的增大而增強。

機體在新陳代謝中會產生活性氧自由基簇（ROS），主要包括超氧陰離子自由基（O2-）和羥自由基（·OH）。ROS可調節細胞間的信號傳遞和細胞生長等，但一旦過量則將有羥基產生。羥基會與細胞的類脂膜、DNA和蛋白等反應[6-7]。由ROS介導的細胞膜脂質的過氧化反應，以及DNA和蛋白質的氧化損傷與炎癥[8]、衰老[9]、動脈粥樣硬化[10]、癌癥和神經變性疾病等多種慢性病理狀態都密切相關。以上述工藝條件制備的柏蛇濕疹膏，通過驗證清除ROS的能力，來初步探討其對于濕疹治療的作用機制。

由試驗結果可知，柏蛇濕疹膏具有較強的ABTS+·和超氧自由基清除能力。中藥多靶點間相互協同作用發揮藥效，實驗結果也證實柏蛇濕疹膏復方的抗氧化能力優于鹽酸小檗堿單藥。由此可見中藥在協同作用后藥效得到充分提高，但復方的作用機制還有待探討，若能對柏蛇濕疹膏抗氧化作用機制進行深入研究，將有助于進一步開發其藥用價值。

參考文獻

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