用不同的免疫檢驗(yàn)方法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果分析

田仁鳳

（貴州省思南縣民族中醫(yī)院，貴州 思南 565100）

乙型肝炎病毒（乙肝病毒）屬于嗜肝DNA 病毒科。乙型肝炎（乙肝）是我國乃至全世界最主要的傳染病之一。乙肝病毒主要存在于乙肝患者的血液及體液中。據(jù)估計(jì)，全球范圍內(nèi)目前約有3 億多乙肝病毒攜帶者。感染乙肝病毒可引起急、慢性乙肝。流行病學(xué)研究表明，肝細(xì)胞癌的發(fā)生與患者存在乙肝病毒感染密切相關(guān)。在感染乙肝病毒后，人體會產(chǎn)生各種不同模式的血清學(xué)免疫應(yīng)答反應(yīng)[1]。通過檢測相關(guān)的血清標(biāo)志物，可診斷乙肝病毒感染，并可判斷患者病情的進(jìn)展和預(yù)后。在本文中，筆者主要是比較用磁微粒化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020 年2 月至8 月思南縣民族中醫(yī)院接診的162 例乙肝患者作為本次研究的對象。這些患者的年齡為12 歲至70 歲，平均年齡（40.27±2.17）歲。其中排除合并有血液疾病的患者。

1.2 儀器和試劑

本研究中所用的檢測儀器包括：Autolumo 全自動化學(xué)發(fā)光測定儀；上海科華ST-360 酶標(biāo)儀。本研究中所用的檢測試劑包括：鄭州安圖生物工程有限公司生產(chǎn)的乙肝病毒檢測試劑盒( 磁微粒化學(xué)發(fā)光法）；上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)的乙肝病毒檢測試劑盒( 酶聯(lián)免疫法）。

1.3 檢測方法

對這162 例乙肝患者均進(jìn)行乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測，方法是：采集患者的血液樣本。使用普通管采集的血液樣本，離心前在37℃下孵育1 h。使用促凝管采集的血液樣本，離心前在37℃下孵育0.5 h。樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響檢測結(jié)果，因此應(yīng)對樣本進(jìn)行充分的離心處理。在完成樣本采集后，若不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)將其置于2 ～8℃的冰箱中保存。若需保存48 h以上，應(yīng)先提取出血清標(biāo)本，并將其凍存于-20℃以下的環(huán)境中。應(yīng)注意避免反復(fù)凍融。使用前應(yīng)使標(biāo)本恢復(fù)至室溫，并輕輕搖動混勻[2]。分別采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢測血清標(biāo)本中HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的含量。嚴(yán)格按照試劑操作說明書進(jìn)行檢測，并使用質(zhì)控物進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控[3]。兩種檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 兩種檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

進(jìn)行磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的陽性檢出率分別為74.07%（120/162）、32.10%（52/162）、17.90%（29/162）、30.86%（50/162）、69.75%（113/162）, 進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的陽性檢出率分別為62.96%（102/162）、17.90%（29/162）、19.75%（32/162）、14.81%（24/162）、77.16%（125/162）。與進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測相比，進(jìn)行磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAb 的陽性檢出率均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測與磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測所得HBeAg、HBcAb 的陽性檢出率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 進(jìn)行兩種檢測所得各項(xiàng)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物陽性檢出率的對比[%( 例)]

3 討論

有研究顯示，部分乙肝病毒攜帶者血清HBsAg 的水平較低，采用酶聯(lián)免疫法對其血清HBsAg 的水平進(jìn)行檢測易出現(xiàn)檢測結(jié)果呈假陰性的情況[4]。相關(guān)的研究指出，采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的敏感度高于采用酶聯(lián)免疫法，這與上述兩種檢測方法的檢測原理不同有關(guān)。在采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物時，主要是利用雙抗體夾心原理檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg，即用已知的抗體或抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標(biāo)記相應(yīng)的抗體或抗原，然后制備酶結(jié)合物，并通過免疫反應(yīng)形成抗體- 抗原- 酶復(fù)合物或抗原-抗體- 酶標(biāo)抗原復(fù)合物。上述復(fù)合物可催化發(fā)光底物發(fā)出光子，其發(fā)光強(qiáng)度與相應(yīng)抗原或抗體的水平成正比[5]。在采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物時，主要是利用競爭原理檢測HBeAb、HBcAb，即用已知的抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標(biāo)記相應(yīng)的抗體，然后制備酶結(jié)合物，并通過免疫反應(yīng)形成抗體- 抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物。該復(fù)合物可催化發(fā)光底物發(fā)出光子，其發(fā)光強(qiáng)度與相應(yīng)抗原或抗體的水平成反比[6]。有研究指出，采用酶聯(lián)免疫法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物具有操作簡單、檢測時間短、檢測成本低等優(yōu)點(diǎn)。但有研究發(fā)現(xiàn)，在采用酶聯(lián)免疫法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物時，若抗原或抗體酶結(jié)合物的濃度、吸光度較低，易出現(xiàn)檢測結(jié)果呈假陰性的情況。若酶結(jié)合物的濃度過高、吸光度過大，超出敏感范圍，檢測結(jié)果同樣會受到影響。在采用酶聯(lián)免疫法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物時，檢測相關(guān)操作通常以手工操作為主，這使得檢測結(jié)果易受實(shí)驗(yàn)室條件和人為因素的影響。標(biāo)本采集、實(shí)驗(yàn)室人員操作、試劑、儀器設(shè)備等多種因素都會影響檢測結(jié)果。在對HBsAg 濃度較小的標(biāo)本進(jìn)行檢測時，不易準(zhǔn)確判斷其檢測值[7]。而采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物通常可避免假陰性檢測結(jié)果的出現(xiàn)。這主要是由于，采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物時主要是使用全自動檢測儀進(jìn)行檢測操作。這樣可以提高檢測的敏感度、精密度和準(zhǔn)確度，避免人為因素引起的誤差，使檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠[8]。有研究指出，與采用酶聯(lián)免疫法相比，用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果較好[9]。但需要注意的是，用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的檢測成本較高[10]。筆者認(rèn)為，若想提高用磁微粒化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的準(zhǔn)確性，需要注意以下幾點(diǎn)：1）采集和處理標(biāo)本時應(yīng)盡量避免相關(guān)干擾因素的影響；2）應(yīng)選擇質(zhì)量有保證的試劑；3）應(yīng)做好檢測儀器設(shè)備的日常保養(yǎng)和定期校準(zhǔn)；4）應(yīng)加強(qiáng)對檢測人員的培訓(xùn)；5）應(yīng)制定嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程；6）應(yīng)選擇合適的質(zhì)控物進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，減少外在影響因素，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確[11]。本研究的結(jié)果顯示，與進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測相比，進(jìn)行磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測所得HBsAg、HBsAb、HBeAb 的陽性檢出率均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測與磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測所得HBeAg、HBcAb 的陽性檢出率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

綜上所述，與采用酶聯(lián)免疫法相比，用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果較好。此法值得在臨床上推廣應(yīng)用。