中性粒細胞胞外誘捕網水平在膿毒癥患兒病情評估中的臨床應用價值

任沖 陳楠 陳寧

鄭州大學附屬兒童醫院河南省兒童醫院鄭州兒童醫院鄭州市兒童感染與免疫重點實驗室檢驗科，鄭州 450000

膿毒癥發病率較高，多是受燒傷、感染、大手術等因素影響，致使細菌侵襲，誘發機體組織感染所引發，可導致機體內多器官功能障礙，嚴重危害生命［1］。膿毒癥來勢兇險，其臨床癥狀通常表現為心率增快、寒戰、發熱等，若未及時治療，隨病情進展，可逐漸增加治療難度，且不利于預后［2-3］。隨現代生物與分子生物學技術的逐漸發展，生物標志物逐漸躍入眼簾，在病情評估、預后判斷中均具有重要作用。中性粒細胞為機體免疫系統重要防線，當機體遭受病原菌侵襲時，該細胞可于受損組織處快速聚集，并大量釋放中性粒細胞胞外誘捕網（NETs）捕獲并殺滅病原菌。本研究選取鄭州大學附屬兒童醫院53例膿毒癥患兒和53列健康體檢患兒，分析NETs水平在患兒病情評估中的應用價值，具體分析如下。

資料與方法

1、一般資料

本研究經鄭州大學附屬兒童醫院倫理委員會審批通過，選取2019年10月至2021年6月鄭州大學附屬兒童醫院膿毒癥患兒53例作為膿毒癥組，并以1∶1配比選取53例健康體檢患兒作為健康組。健康組：男33例，女20例；年齡0.16～14.00（1.83±0.59）歲；體質量4～30（24.08±2.71）kg。膿毒癥組：男29例，女24例；年齡0.16～14.00（2.07±0.68）歲；體質量4～30（23.14±2.57）kg；其中發病至入院時間4～32（5.72±0.83）d；病情程度：一般47例，嚴重6例。兩組基線資料均衡可比（均P>0.05）。

2、選取標準

（1）納入標準：①經實驗室檢查確診為膿毒癥；②伴有心率增快、寒戰、發熱等臨床癥狀；③白細胞計數上升>12×109/L或減少<4×109/L；④呼吸頻率>20次/min或動脈血二氧化碳分壓<32 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；⑤心率>90次/min；⑥體溫>38℃或<36℃。（2）排除標準：①攜帶人類免疫缺陷病毒（HIV）者；②長期應用放化療等治療者；③伴有自身免疫疾病或先天性免疫缺陷及遺傳代謝性疾病；④嚴重心肝腎功能不全；⑤近期曾接受過免疫抑制或糖皮質激素治療；⑥存在血液系統疾病。

3、方法

于清晨抽取兩組4 ml外周靜脈血，30 min內送檢，采用離心機（型號：BY-320C，廠家：北京白洋醫療器械有限公司），離心半徑為10 cm，3 000 r/min的速度離心10 min，分離血清，冷藏待檢。借助RPMI1640培養基（貨號：C22400500BT，廠家：美國Gibco公司）、胎牛血清（貨號：10270-106，廠家：美國Gibco公司）等工具檢測NETs水平。

4、觀察指標

（1）比較兩組研究對象的NETs水平。（2）比較不同病情程度膿毒癥患兒的NETs水平。（3）比較膿毒癥患兒不同時間點不同時期的NETs水平：入院第1天、第7天感染消散期組和感染期組患兒的NETs水平。（4）比較不同預后膿毒癥患兒的NETs水平：統計膿毒癥組存活者、死亡者NETs水平。（5）NETs不同時期及預后的相關性分析。

5、統計學方法

采用SPSS 22.0分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料符合正態分布，以（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，采用Spearman進行相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1、兩組研究對象NETs水平的比較

膿毒癥組患兒的NETs水平明顯高于健康組［（42.41±4.34）%比（0.26±0.04）%］，差異有統計學意義（t=70.701，P<0.001）。

2、不同病情程度膿毒癥患兒NETs水平的比較

6例膿毒癥嚴重患兒的NETs水平明顯高于47例一般患兒［（57.82±6.19）%比（40.11±4.08）%］，差異有統計學意義（t=9.429，P<0.001）。

3、膿毒癥患兒不同時間點不同時期NETs水平的比較

入院第1天、入院第7天，感染期患兒NETs水平明顯高于感染消散期，差異均有統計學意義（均P<0.001），見表1。

表1 膿毒癥患兒不同時間點不同時期NETs水平的比較（%，±s）

表1 膿毒癥患兒不同時間點不同時期NETs水平的比較（%，±s）

注：NETs為中性粒細胞胞外誘捕網

組別感染消散期感染期t值P值例數39 14入院第1天41.03±4.10 46.80±4.67 6.162<0.001入院第7天19.72±3.91 51.20±5.23 31.627<0.001

4、不同預后膿毒癥患兒NETs水平的比較

14例死亡者NETs水平明顯高于39例存活者［（59.56±5.35）%比（33.56±3.46）%］，差異有統計學意義（t=20.723，

P<0.001）。

5、NETs不同時期及預后的相關性分析

Spearman分析結果顯示，NETs水平和感染期、預后死亡呈明顯的正相關（r=0.581、0.623，均P<0.001）。

討 論

膿毒癥是機體面對細菌所致感染反應失調所誘發的危急癥，其發病機制尚未明了，涉及凝血功能、免疫功能障礙等多方面［4-5］。但主要是受病原微生物侵入影響，引發的機體細胞與體液免疫反應，逐漸產生抗炎與促炎反應，而當二者失衡時，致使若干介質大量生成，進而引發膿毒癥，損傷器官功能［6-8］。膿毒癥依據不同病情程度又可將其細分為膿毒性休克、嚴重膿毒癥、膿毒癥等。膿毒性休克主要是指在予以充足液體復蘇后，持續性低血壓癥狀仍無法有效糾正；嚴重膿毒癥是指存在膿毒癥的同時，同時伴有低血壓、組織灌注不良、器官功能障礙等并發癥；膿毒癥則是指病原菌侵入所誘發的全身炎癥反應綜合征［9-11］。

在膿毒癥進展期間，其病理基礎主要為炎性反應。這些細胞因子并非單指一或幾種，而是數量巨大的炎性細胞因子相互刺激，在其共同作用下所造成的炎性反應紊亂。而炎性反應可促使中性粒細胞激活，利用炎癥介導、氧化應激等作用，于細胞外逐漸分泌出以DNA為骨架的網狀結構，該種網狀結構內富含多種抗菌蛋白，當這種網狀結構成型后，可以網狀或線狀等形態，于中性粒細胞附近聚集或于循環中以棉絮狀游離，利用所含抗菌蛋白對病原體進行滅殺，有效抵抗病原菌侵入，該結構在醫學上被稱之為NETs［12-14］。本研究針對膿毒癥患兒均行NETs水平檢測，結果顯示，膿毒癥組NETs水平明顯高于健康組（P<0.05），且膿毒癥嚴重患兒的NETs水平明顯高于一般患兒（P<0.05），提示應用NETs水平檢測可有效篩查出膿毒癥患兒并可對其病情程度進行有效鑒別。NETs可利用物理屏障，降解病毒毒力因子，于DNA網狀結構上鑲嵌毒性顆粒蛋白，對病原體起到綁定作用，進而有效控制感染擴散情況，降低機體組織產生各種繼發性損傷，對真菌、革蘭陽性或陰性菌等均可起到同樣效果［15-16］。

本研究數據，入院第1天、入院第7天，感染期患兒NETs水平明顯高于感染消散期患兒（均P<0.05），表明NETs水平檢測可鑒別不同時期患兒，明確患兒病情。同時，本研究數據，死亡者NETs水平明顯高于存活者（P<0.05），證實NETs水平檢測可用于判定預后情況。在膿毒癥早期，NETs雖可限制病原菌增殖，對機體產生保護作用，但隨病情進展，NETs釋放較多，可對血小板聚集造成一定刺激，進而可啟動凝血過程，引發彌散性血管內凝血，加重機體損傷。NETs對血管內皮造成的破壞，可增加血管通透性，進一步加重組織水平，對組織正常氧化造成嚴重影響，進而可促進器官功能衰竭，降低膿毒癥患兒預后［17］。Spearman分析結果顯示，NETs水平和感染期、預后呈明顯的正相關（均P<0.05），可見NETs水平和不同時期、預后具有關聯性。NETs是一把雙刃劍，一方面在清除病原菌上存在關鍵作用，可有效延長患兒生存周期，但另一方面NETs所分泌的高遷移率族蛋白1，可誘導巨噬細胞走向凋亡，進而可影響其與中性粒細胞聯系，促進炎性反應，加強組織損傷，誘導血栓生成，最終加重病情［18］。而依據膿毒癥患兒治療期間NETs水平高低變化，可在一定程度上反映患兒病情變化，為臨床醫生治療膿毒癥提供有力參考資料，豐富膿毒癥研究數據。

綜上所述，在膿毒癥患兒治療期間及時監測NETs水平可鑒別病情時期，依照NETs水平變化趨勢可明確治療方案的有效性，便于臨床醫生及時調整用藥方案，提高臨床療效，且NETs水平檢測還可對預后轉歸風險進行預判，予以個體化預防措施，應用價值較高。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突