血篩酶聯免疫吸附法HIV-HBV-HCV 陰性標本再行核酸檢測的安全性分析

朱曉晨

經血液傳播是臨床疾病傳播途徑之一,是嚴重影響公共衛生健康的重要途徑［1］。HIV、HBV、HCV 是現目前血液傳播疾病中最常見的三種病原體,據相關數據顯示全球HIV 感染者多達3350 萬,HBV 感染者更是高達21 億,HCV 感染者有2 億。另外,據我國相關資料顯示,HBV 病原體人群攜帶率占比約為11%,臨床上HCV 感染率在3.6%左右［2］。世界衛生組織(WHO)統計數據表示,全球每年HIV、HBV、HCV 感染率仍呈不斷上升的趨勢,其感染原因主要是由于診療過程中輸入不健康的血液所致。鑒于此,臨床更加側重血液安全問題,并不斷對血液傳播病原體檢測方法改進及深入研究,從而確保臨床用血的安全性［3］。本次將2018 年12 月～2019 年12 月 的37997例無償獻血者納入研究,旨在探討血篩酶聯免疫吸附法HIV-HBVHCV 陰性標本再行NAT 的安全性。具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年12 月～2019 年12 月的37997 例無償獻血者納入研究,其中男27122 例,女10875 例；年齡18～65 歲,平均年齡(32.12±10.96)歲。納入研究無償獻血者均符合《獻血者健康檢查要求》,對本次研究知情,并簽署知情相關同意書。

1.2 方法 血液篩查標本采集后實施離心處理,將血漿分離后將血清放置于4～8 ℃的冰箱中加以保存,24 h內在應用ELISA 法實施2 次檢測,將不合格的標本剔除,選取各項血液指標均合格的血液標本,在72 h 內實施病毒NAT。

試劑、儀器：①ELISA：HIV、HBV、HCV 檢測試劑均由北京萬泰和英科新創提供,試劑經國家食品藥品監督管理部委批準合格產品；②NAT 試劑：HIV、HBV、HCV NAT 試劑盒(PCR-熒光法)主要是由北京萬泰提供；③儀器：瑞士哈美頓FAME24/20 全自動酶免疫分析儀、Co-Brilliant AEX 系列全自動核酸提取。

檢測方式：實施2 次ELISA對血液標本進行篩查,對篩查結果作進一步判定,針對NAT 檢測結果呈陽性,但是ELISA 檢測結果呈陰性的血液樣本,實施二次采集酶聯免疫標本及NAT 標本(1 例2 管),在實施2 次ELISA 檢測后仍呈陰性者；再實施NAT 平行檢測,將2 次NAT 標本放置于生物安全柜中開蓋,并放置于樣本架上,經由Co-Brilliant AEX 系列全自動核酸提取實施操作檢測,并將兩份血液樣本實施平型混合。將混樣標本放置于NAT 儀中實施檢測,應用NAT 系統檢測6 份混樣標本,對混樣檢測的陽性孔再實施單管分項拆分檢測,并對HIV、HBV、HCV 三項檢測結果進行觀察,再NAT 呈陽性者確診為陽性。

1.3 觀察指標 統計分析兩次檢測結果。

2 結果

2.1 ELISA 檢測結果分析 37997 份無償獻血者血液標本ELISA 檢測顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%。見表1。

表1 37997 份無償獻血者血液標本的ELISA 檢測結果分析(份,%)

2.2 ELISA 檢測陰性標本再行NAT 的結果分析37532 份血清ELISA 檢測陰性標本再行NAT 后,顯示存在39 份陽性標本,陽性檢出率為0.10%。見表2。

表2 37532 份ELISA 檢測陰性標本再行NAT 的結果分析(份,%)

3 討論

當前,在對血液樣本進行篩查時常應用的NAT 系統主要包括Taqman PCR、TMA 技術［4］。以往,TMA技術是應用最為廣泛的NAT 技術,從2010 年起,自從對無償獻血者血液樣本實施單人份NAT 后,促使分析靈敏度顯著提升,據相關數據統計可達到HIV-1 RNA 45 IU/ml、HBV-DNA 10 IU/ml、HCV-RNA 3 IU/ml 的水平［5］。另外,NAT 技術鑒別試劑分析靈敏度又可達到d-HIV-1 50 IU/ml、d-HBV 8.5 IU/ml、d-HCV 3.2 IU/ml的水平,明顯看出血液篩查技術在現如今已經足夠成熟［6］。

在90 年代初期,歐美部分較為發達的國家已在無償獻血中實施NAT 技術,在此過程中還對HIV、HBV及HCV 作進一步篩查,在應用期間也明確證實了NAT技術篩查后,可以避免血液傳播疾病發生,進而提升血液輸送的安全性［7］。但據本次研究顯示,本地區37997 分無償獻血者血液標本實施ELISA 檢測后顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%,檢出率較高,出現這種情況的原因可能是受到地區間病毒流行率、血清學ELISA 試劑選擇、檢測標本數量、NAT 技術設備和模式等多種因素影響所致。由此也證明了在血清學ELISA 檢測合格的血液中仍舊存在血液傳遞疾病幾率［8,9］。

本次研究中顯示,應用NAT 技術對血液樣本進行篩查具有較高靈敏度,但因混合性樣品檢測模式會間接性降低NAT 技術篩查系統本身的靈敏度,進而造成NAT 技術系統的靈敏度高于混合檢測情況下NAT 技術篩查系統的靈敏度［10］。究其原因可能是：①由于NAT技術本身就存在一定的假陽性率；②NAT 技術在取樣過程中存在誤差,但因單項NAT 技術陽性標本病毒在載量方面存在不足之處,進而導致病毒樣品未均勻分布,基于這種情況造成每次取樣病毒數量均有所不同,進而對NAT 結果造成了較大影響［11,12］。

本次研究結果顯示,37997 份無償獻血者血液標本ELISA 檢測顯示有465 份陽性樣本,其陽性檢出率為1.22%；這一結果提示應用血清學ELISA 檢測可以對存在問題的血清進行篩查,進而避免血液傳播疾病發生［13］。而37532 份血清ELISA 檢測陰性標本再行NAT 后,顯示存在39 份陽性標本,陽性檢出率為0.10%,這一結果又可以進一步證實血液樣本哪怕是經血清學ELISA 篩查后仍存在一定的輸血感染風險,而再行NAT 可以篩查出存在風險的血液,在血清學篩查過程中具有較高的安全性保障,如若將ELISA和NAT技術聯合應用,對臨床醫療而言具有至關重要的價值,可以將其作為無償獻血血液樣本篩查過程中的重要技術［14］。

綜上所述,對獻血者血液實施血清學ELISA 檢測后,即便是合格血液仍存在一定的輸血傳播疾病風險,輸血傳染疾病主要是以HBV 為主,對獻血者血液再進行NAT 可以有效提升血液篩查質量,從而最大限度的避免輸血傳播疾病的發生,進一步提升輸血安全性。