石菖蒲聯合奧拉西坦對阿爾茨海默病大鼠神經相關蛋白和炎性因子的影響

王東輝 田小海 李冬梅

(1長春醫學高等專科學校基礎醫學部，吉林 長春 130000；2長春大學特殊教育學院)

阿爾茨海默病(AD)又稱老年性癡呆癥，是隱匿的腦部神經退行性疾病，其特點是進行性發展趨勢一旦出現，AD癥狀將無有效藥物逆轉。隨著世界人口老齡化的趨勢患病率逐年上升，患者臨床表現多為記憶力、智力障礙，甚至出現行動困難、大小便失禁，嚴重影響患者和家屬的生活質量〔1～4〕。目前AD患者尚無有效治療藥物，本研究旨在探討石菖蒲聯合奧拉西坦對AD大鼠的治療效果。

1 材料與方法

1.1實驗動物與分組 SPF級Wistar雄性大鼠60只，體重(230±20)g，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。隨機分為空白對照組(10只)和實驗組(50只)；實驗組均為通過Morris水迷宮篩選的造模成功的AD大鼠，分為模型組、單純奧拉西坦組、低劑量聯合組、中劑量聯合組和高劑量聯合組，每組10只。

1.2實驗藥品、試劑與設備 中藥石菖蒲購于毫州市佰林堂藥業有限公司，自行研磨細粉使用；奧拉西坦膠囊由石藥集團歐意藥業有限公司提供(國藥準字H20031033)；D-半乳糖購于長春市南關區金萊博生物實驗服務部(美國，invitrogen)；大鼠β-淀粉樣蛋白(Aβ)、微管相關蛋白(tau)、磷酸化管tau(P-tau)及炎性因子腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β和IL-6蛋白含量檢測試劑盒均購于南京建成生物工程公司。Morris水迷宮和Epoch酶標儀由吉林大學基礎醫學院提供。

1.3模型制備和給藥方法 實驗組50只大鼠每日腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)，連續6 w。空白對照組和實驗組同時在造模成功后每日灌胃給藥5 w，其中空白對照組每日生理鹽水灌胃5 ml/kg，實驗組分別給予奧拉西坦40 mg/kg、石菖蒲0.5 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg、石菖蒲1.0 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg和石菖蒲高劑量2.0 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg。

1.4樣本制備 實驗結束次日10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，眼球取血，3 000 r/min離心10 min，留血清4℃待檢測，分離腦組織海馬區-80℃保存待檢測。

1.5各組血清和腦組織海馬區神經相關蛋白Aβ、tau、P-tau的檢測 操作嚴格遵守酶聯免疫吸附試驗試劑盒步驟，腦組織海馬區需要4℃超聲勻漿為0.01%的組織懸液。

1.6各組血清和腦組織海馬區炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的檢測 操作嚴格遵守酶聯免疫吸附試驗試劑盒步驟，腦組織海馬區需要4℃超聲勻漿為0.01%的組織懸液。

1.7統計學分析 應用SPSS20.0統計學軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組血清和腦組織海馬區Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比較 與空白對照組比較，實驗組各組血清和腦組織海馬區Aβ、tau、P-tau的蛋白含量均升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織海馬區aβ、tau、P-tau的蛋白含量均下降且石菖蒲呈劑量依賴性，差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1 各組血清和腦組織海馬區Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比較

2.2各組血清和腦組織海馬區炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比較 與空白對照組比較，實驗組各組血清和腦組織海馬區炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織海馬區炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量均下降且石菖蒲呈劑量依賴性，差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2 各組血清和腦組織海馬區炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比較

3 討 論

AD發病隱匿，是世界老年人的第三大死因；隨著世界人口老齡化的趨勢發病日益增多，探究AD的治療方案勢在必行〔5〕。以往研究發現〔6〕，AD發病與Aβ、tau和P-tau的大量沉積有關，而這三者又能引發小膠質細胞表型的活化且促進炎性因子表達，因此提示AD發病與炎癥密切相關〔7～9〕。

近年來臨床用藥發現西藥治療AD作用有限，靶點單一且容易導致肝腎功能損傷和出現耐藥性，奧拉西坦作用于AD患者，能疏通血管、改善神經功能和認知功能，屬于促智類藥物對腦組織有很好的修復功能〔10～13〕。在中藥治療AD的眾多方劑中石菖蒲的使用率較高，石菖蒲明確能入心腎經，是芳香開竅代表藥物，能輕身、不忘、不迷和延年，具有抗氧化、抗衰老、強心、降壓、改善記憶及抑制炎性因子表達的作用〔14，15〕。

AD發病時由于Aβ、tau、P-tau蛋白大量聚集形成，他激活腦組織內星形膠質細胞釋放大量炎性因子如TNF-α、IL-1β及IL-6等，這些炎性因子進一步產生炎癥反應從而損傷機體神經細胞〔16，17〕。本研究基于奧拉西坦能提高患者認知能力，石菖蒲具有抗氧化、抗衰老、改善記憶及抑制炎性因子表達的作用將兩者聯合用藥，探究聯合用藥的功效。

本研究結果提示，中藥石菖蒲聯合奧拉西坦治療效果優于單純奧拉西坦，可能與降低大鼠血清和腦組織海馬區神經相關蛋白和炎性因子有關，其作用機制有待進一步探討。