快速檢驗技術在微生物檢驗中的效果

肖 霄

（沈陽七三九醫院檢驗科，遼寧 沈陽 110034）

致病性微生物侵入人體后多會誘發炎癥、感染性疾病、器官功能障礙，嚴重影響患者身體健康。且多數病原性微生物會于患者體內繁殖、分泌毒素加劇患者疾病，提升疾病復雜程度。傳統疾病治療、檢查多為時多為人工微生物實驗室檢查方式，以微生物染色以及細菌培養、生物化學鑒定為主，以多種感染性疾病檢查為金標準。但檢驗所需時間較長，不易縮短檢驗周期，病原體培育對環境也有較高要求，操作方式較為復雜，使用上也有局限性。因此選取快速有效檢驗方式便十分重要，快速檢驗技術為新型檢驗技術，主要特點為檢驗速度更快，主要包括免疫學凝聚反應、蛋白指紋圖譜技術等，可對不同微生物進行診斷。多數分析認為，采用此種診斷方式有準確度高、效率高的特點[1-2]。現選取本院感染性疾病患者為研究對象，分析快速檢驗和傳統檢驗兩種方式特點，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月至2018年9月本院124例感染性疾病患者，所有患者均通過實驗室分析以及病菌培養治療診斷確診，男64例，女60例，年齡32～50歲，平均年齡（39.06±5.39）歲，其中咽喉感染56例、鼻部感染47例、其他21例。研究時主要病菌為肺炎鏈球菌41例、綠膿桿菌46例、大腸桿菌37例。患者在知情同意書上簽字，自愿進行本研究。

1.2 方法 研究時檢驗人員為同一組人員，且通過檢驗技能培訓，有豐富檢驗經驗。傳統人工微生物檢驗：主要為病原微生物染色、培養等程序實施細菌檢查。快速檢驗主要分為5種方式。①免疫學凝聚檢驗：首先設置溫度、電解質，改善抗原環境、pH值，可有效檢驗特異性抗體和致病性微生物，以及各種肉眼可見凝塊。主要病原菌為大腸桿菌、肺炎鏈球菌。②酶聯免疫技術：利用微孔板、雙抗體夾心法檢驗。主要作用范圍，血清半乳甘露聚糖、侵襲性曲霉菌感染。③免疫熒光法：主要采用熒光顯微鏡BX51，之后采用衛生部發放的病毒熒光檢驗試劑盒檢驗，主要可檢驗腺病毒以及流感病毒等。此外也有洗滌液、玻璃片。④蛋白指紋圖譜：首先需擁有各種已知病原微生物蛋白質圖譜，通過對患者體內各種病原菌微生物對比的方式進行疾病診斷。此種方式可有效診斷各種以及圖譜疾病，也可診斷速度快的特點。⑤分子生物學：此種這段方式于分子水平探討病原微生物，之后將大分子物質遺傳信息、分子信息對比。

1.3 觀察指標 ①分析兩種檢驗方式下診斷陽性率，其中主要分析致病菌：肺炎鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌。②對比兩種生物檢驗方式下檢驗結果準確度和敏感性、特異性。③對比兩種不同檢測方式下檢測所需時間。

1.4 統計學方法 用SPSS23.0處理數據，以χ2檢驗兩種不同檢查方式下病菌陽性率、檢查結果準確度、敏感性、特異性等計數資料（%、n），以t檢驗計量資料（），P＜0.05代表差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對比不同病菌檢驗陽性率 兩種檢驗方式下大腸桿菌、肺炎鏈球菌以及綠膿桿菌等陽性率并無較大差異，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 分析不同檢驗方式陽性率[n（%）]

2.2 對比不同檢驗方式結果 傳統檢驗：準確度95.16%、特異性85.24%、敏感性84.26%；快速檢驗：準確度95.97%、特異性96.27%、敏感性96.38%。快速檢驗時準確度和傳統檢驗并無較大差異，無統計學意義（χ2=0.095，P＞0.05）；快速檢驗特異性和敏感性高于傳統檢驗，有統計學意義（χ2=6.329、7.254，均P＜0.05）。

2.3 對比兩種不同檢測方式所需時間 快速檢測時所需時間顯著低于傳統檢測所需時間，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 各種檢測方式所需時間（h，）

表2 各種檢測方式所需時間（h，）

3 討 論

感染性疾病為臨床常見疾病，也為各個科室醫師常見問題，對于感染性疾病治療，主要問題在于早期診斷[3]。傳統診斷方式為實驗室病菌培養，此種方式消耗較長時間，因此選取有效診斷方式提升診斷效率便十分重要。

本次研究主要采用快速檢驗技術，此種檢驗方式包含多種診斷方式，可滿足不同致病微生物檢驗。免疫學為生物學的重要分支，主要分析內容為生物免疫反應，患者生病之后免疫系統會快速產生免疫反應[4-5]。臨床診斷主要通過該原理，采用免疫學技術幫助醫師簡化檢驗步驟，提升檢驗速度。隨著免疫學發展，主要可分析免疫凝聚、放射免疫分析、熒光免疫分析等[6]。本次研究重要分析其中兩種，凝聚檢驗時主要優勢為可簡化生物檢驗步驟，提升檢驗準確度。免疫檢測技術的主要原理為抗原抗體反應，抗原抗體反應主要為抗原和抗體之間產生的特異性結合反應，不同微生物有自身特異的抗原，且可有效激發機體內產生對應特異性抗體。免疫檢測時則可利用單克隆抗體檢測微生物特異抗原，也可利用微生物抗原檢測機體內特異抗體。其中免疫熒光技術主要使用熒光素標記抗體，檢測抗原以及抗體，屬于免疫標記技術。使用的熒光素標記抗體可稱之為熒光抗體，免疫熒光技術在實際操作過程中主要分為直接法以及間接法。直接法主要為檢測樣本上直接滴已知特異性熒光標記抗血清，通過洗滌之后熒光顯微鏡下即可顯示結果。間接法則為樣本上滴已知特異性抗體，洗滌之后加入熒光標記第二抗體。酶免疫檢測主要依據抗原抗體反應是否需結合游離酶標志物分為均相、非均相兩個類型。非均相較為常用，其中可包括液相檢測和固相檢測。固相免疫檢測主要技術為ELISA，此種技術為抗原、抗體吸附至固定載體上作為試劑進行檢測，同時也為抗體、抗原方式。依據反應原理，當加入某酶標記抗體、抗原之后需要洗滌并未結合的物質，之后加入酶的底物，酶催化底物之后會生成有色物，產物內具體劑量和標本內受檢物量有關，可依據顏色深淺進行測定。酶免疫測定（EIA）可有效用于檢測病源以及抗體、細菌，其中EIA有特異性和敏感性高的特點，各種常見的可溶性抗體原反應系統均可檢測。此種檢測技術也無須特殊設備，結果觀察簡便。

蛋白指紋圖譜技術主要由蛋白質芯片和分析儀器以及強化激光解析電離飛行質譜兩部分組成，可有效記錄患者血清內蛋白質成分，繼而繪制蛋白指紋譜圖，顯示樣品內各種蛋白分子量。通過此種技術，可將極大提升病菌檢驗效率。但此種檢驗方式也有一定缺陷，主要為單抗制備需通過篩選提純等較為復雜的過程，同時現階段此種疾病并未完全成熟，因此使用便捷性和精確度均有一定限制。

免疫熒光法主要利用患兒血清以及免疫熒光抗體予以檢驗，因此對抗原有較高敏感性。近年隨著研究逐步深入，醫學在人工合成免疫原研究中持續發展[7-8]。研究發現，大腸桿菌特異性抗原決定為雙糖結構，可采用人工合成高純度雙糖之后和蛋白質結合方式形成免疫原。在本次研究中即充分利用免疫熒光法予以檢驗，觀察患兒呼吸道樣本和試劑盒反應，分析患兒感染類型。在研究中多數采用免疫熒光法檢驗的患兒均可在短時間內依據顯微鏡、試劑盒檢驗分析患兒感染類型，有快捷、高效等多種優勢[9]。

分子生物學技術為新興技術，主要從分子水平分析生物本質。分子生物學將生物大分子內細胞信息、遺傳信息傳遞功能、生物大分子組成結構作為研究對象[10-11]。可通過大分子分析研究，有效探究生物現象，改造生物，利用生物進行疾病診斷。主要原理為以核酸或者蛋白質作為分析材料，通過對基因結構分析、表達變化，繼而為疾病診斷提供科學信息。此種診斷方式多用于甲型肝炎檢驗以及乙型肝炎檢驗，同時也可分析基因突變問題。也可通過對病毒基因分析，有效判定病毒和疾病，為疾病診斷提供重要幫助。對比本次研究過程中不同診斷方式下疾病診斷陽性率時發現，大腸桿菌、肺炎鏈球菌以及綠膿桿菌等陽性率自身未產生無較大差異P＜0.05。因此可知，快速檢驗時雖然效率更高，但是檢驗準確度并未降低。此種結局主要和快速檢驗時各種新興技術的使用，使檢驗方式更為便捷有關。對比兩種診斷方式下患者準確度時發現，兩種診斷方式下準確度并無較大差異，但在快速檢驗時敏感性和特異性均更高。提示可知，由于新型技術原理更為先進因此特異性和敏感度更高。對比其他學者研究結果時發現，多數分析認為，采用快速檢驗時可有效提升檢驗敏感度、特異性，研究結果和本次分析一致[12-13]。

對比兩種不同檢查方式下影響準確度和敏感性的因素時發現，主要原因可分為以下幾點：首先進行免疫學檢驗時抗原被洗滌，因此會引發假陽性問題。因此在抗體檢驗時需認真分泌環境變化，有效控制實驗室檢查靈敏度。在進行病毒檢驗時，尤其為變異速度較快病毒檢驗時，免疫學檢驗時也較為困難。且病毒常有多個亞型，因此引發變異的概率也較高，常會引發抗體實效，進而無法有效檢驗抗原種類[14]。采用分子生物技術予以檢驗時，需采用較多病原微生物，因此也需選擇較多儀器同時進行工作，會出現周期長、效率低、成本高等問題。蛋白指紋圖譜使用時，當蛋白質出現變異后，將無法有效檢驗病原微生物種類。因此進行臨床檢驗時需依據患者自身疾病特點，選取不同微生物檢驗方式，只有通過此種方式方可有效提升檢驗可靠性[15]。同時在進行檢查過程中人員和設備因素也十分重要，微生物檢測需要使用多臺設備，且設備性能可直接影響檢測結果的準確度、可靠性。因此在進行快速檢測時不僅需重視抗體質量，也需保證檢測設備安全性高，質量良好，也需重視檢測人員綜合素質提升[16-17]。

對于檢測結果顯示時間進行對比時發現，快速檢測時間相比于傳統檢測方式有明顯縮短，因此可知，通過快速檢驗可有效縮短檢測時間。此研究結果和快速檢測原理有關，傳統檢測時需對于病源微生物進行染色和培養因此所需時間較長，使用快速檢測方式時則可有效避免此種問題，進而使得檢驗效率得到極大提升。本次研究也有自身缺陷，在研究過程中選取檢測方式和樣本量較少，進而使得研究結果代表性受到影響。

綜上所述，微生物檢驗時，采用快速檢驗技術可有效提升檢驗敏感度和特異性，整體檢查準確度較高，有臨床應用價值。