虎紅平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)人布魯菌病抗體的應(yīng)用探討

魏 娜

（盤錦市盤山縣疾病預(yù)防控制中心，遼寧 盤錦 124107）

人布魯菌病是由于人類通過(guò)接觸感染動(dòng)物的排泄物或者攝入感染或者患病動(dòng)物制成的食品而患病。患病后患者主要變現(xiàn)為大汗、乏力、關(guān)節(jié)痛以及肝脾、淋巴結(jié)腫大等癥狀[1-2]。如果患者未及時(shí)進(jìn)行控制治療，則會(huì)使細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)不斷繁殖，形成局部病灶，病菌在細(xì)胞內(nèi)破裂分布到各個(gè)臟器器官內(nèi)，形成多發(fā)病灶，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，威脅生命安全，給家庭、社會(huì)、醫(yī)療帶來(lái)負(fù)擔(dān)[3-4]。因此如果發(fā)現(xiàn)存在以上異常現(xiàn)象，應(yīng)該及時(shí)就醫(yī)采取科學(xué)、合理檢驗(yàn)方法，判斷臨床病情，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。為此，選擇我疾控中心于2014年至2019年內(nèi)收到的80例人布魯菌病患者血清樣品為研究對(duì)象，本文即分析對(duì)于人布魯菌病抗體采用試管凝集試檢測(cè)和虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)實(shí)際效果，主要內(nèi)容見(jiàn)下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我疾控中心于2014年至2019年收到的80例人布魯菌病患者血清樣品為研究對(duì)象，將所有患者按照檢測(cè)方法的不同，分為對(duì)照組與觀察組。對(duì)照組：40例，男23例，女17例，年齡范圍21～67歲，平均年齡（42.23±8.77）歲。觀察組：40例，男25例，女15例，年齡范圍21～67歲，平均年齡（42.15±8.36）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均知情同意。②均為人布魯菌病患者。③均在21～67歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神異常，溝通障礙。②配合度較低。③其他合并類疾病。對(duì)兩組患者文化程度、年齡范圍、身高等基礎(chǔ)性資料分析后顯示，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者對(duì)本研究均完全知情同意并簽署知情同意書(shū)。我中心對(duì)本研究完全知情，并批準(zhǔn)研究。

1.2 方法 對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試檢測(cè)，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè) 觀察組患者進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)，在檢測(cè)中，取0.03 mL血清檢測(cè)樣品，放置于玻片上，將0.03 mL虎紅平板抗原加入其中，進(jìn)行攪拌，確保攪拌均勻。等待5 min后觀察結(jié)果。如果玻片上混合物當(dāng)中出現(xiàn)顆粒形狀物質(zhì)或者發(fā)生凝集片，則說(shuō)明顯示結(jié)果為陽(yáng)性，如果混合液體呈現(xiàn)渾濁狀態(tài)，則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

1.2.2 試管凝集試驗(yàn)檢測(cè) 對(duì)照組患者進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)，采用5支小試管，將2.30 mL生理鹽水加入第一支試管中，第二支試管不需要加入生理鹽水，第三支試管需要加入0.50 mL生理鹽水，第四支試管以及第五支試管需要同時(shí)加入0.50 mL生理鹽水。采用1 mL吸管，吸取0.20 mL血清樣品，并放置在第一支試管當(dāng)中，保證液體混合均勻。采用1 mL吸管吸取第一支試管中血清，將0.50 mL分別加入到第二支試管以及第三支試管當(dāng)中，保證第三支試管中攪拌均勻。吸出0.50 mL加入第四支試管中混均，再?gòu)牡谒墓芪?.50 mL加入第五管體液充分?jǐn)嚢杈鶆颍〕?.50 mL第五支試管中液體丟掉。分析試管中血清稀釋情況。第二支試管到第五支試管稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。將0.50 mL抗原稀釋液加入到第二支試管以及第五支試管當(dāng)中進(jìn)行稀釋，分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時(shí)將抗原對(duì)照以及陽(yáng)性、陰性進(jìn)行對(duì)照組、比濁管判斷。將對(duì)照管、試驗(yàn)管、比濁管進(jìn)行搖蕩后，放置在37 ℃溫箱內(nèi)22 h后取出放置2 h后判斷。如果發(fā)現(xiàn)試管凝集反應(yīng)血清為1∶100稀釋度凝集現(xiàn)象“++”以上，則為人布魯菌病抗體陽(yáng)性。

1.3 療效標(biāo)準(zhǔn) ①對(duì)兩組患者樣品分別進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。②對(duì)兩組患者樣品分別進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度和準(zhǔn)確度進(jìn)行對(duì)比分析。③對(duì)兩組患者樣品分別進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后對(duì)布魯菌進(jìn)行對(duì)比分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 研究所得到的數(shù)據(jù)均采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行處理。（）用于表示計(jì)量資料，用t檢驗(yàn)；率（%）用于表示計(jì)數(shù)資料，用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05時(shí)則提示進(jìn)行對(duì)比的對(duì)象之間存在顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測(cè)結(jié)果分析 對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后陽(yáng)性36（90.00%）例，陰性4（10.00%）例，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后陽(yáng)性40（100.00%）例，陰性0例，兩組陽(yáng)性（χ2=4.211，P=0.040）。研究結(jié)果顯示，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后檢測(cè)效果明顯優(yōu)于對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后檢測(cè)效果，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組檢測(cè)結(jié)果分析[n（%）]

2.2 兩組敏感度和準(zhǔn)確度對(duì)比分析 對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度80.00%，準(zhǔn)確度為82.50%，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度為100.00%，準(zhǔn)確度為97.50%。研究結(jié)果顯示，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度、準(zhǔn)確度明顯高于對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度和準(zhǔn)確度，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組敏感度和準(zhǔn)確度對(duì)比分析[n（%）]

2.3 比較兩種方法檢測(cè)布魯菌結(jié)果 在布魯菌檢測(cè)結(jié)果方面，觀察組布魯菌檢出率為95.00%；對(duì)照組布魯菌檢出率為77.50%；觀察組數(shù)據(jù)相比較對(duì)照組較高（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 比較兩種方法檢測(cè)布魯菌結(jié)果[n（%）]

3 討 論

布魯菌病又被稱為人布病，此病誘發(fā)因素與地區(qū)、職業(yè)、人體免疫功能以及其他因素密切相關(guān)[5-6]。①地區(qū)：居于該病流行地區(qū)或者該病流行地區(qū)旅行者，更容易發(fā)生此病。②職業(yè)：某些職業(yè)此病患病率較高，比如：屠宰場(chǎng)工人、肉類加工工人、獸醫(yī)、實(shí)驗(yàn)室工作人員等。③人體免疫功能，如果人體免疫功能正常，通過(guò)體液免疫以及細(xì)胞免疫能夠清除病菌，不會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀。如果人體免疫功能不全或者感染病菌量較大、毒性較強(qiáng)、致病菌反復(fù)入血、則會(huì)發(fā)生慢性感染。④其他因素：進(jìn)食生肉或者未經(jīng)巴氏消毒奶制品等。此病潛伏期長(zhǎng)短不一，一般為1～3周，也可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月。出現(xiàn)反復(fù)高熱伴大汗淋漓、肝、脾淋巴結(jié)腫大等癥狀，因此需要引起高度重視，及時(shí)采取有效檢測(cè)方法，判斷病情，做到早發(fā)現(xiàn)早治療，避免錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)。

布魯菌病是臨床常見(jiàn)的傳染病，對(duì)此種疾病采取早期診斷以及治療能夠?qū)Υ瞬∮枰暂^好的改善。臨床上對(duì)布魯菌病常采取的檢驗(yàn)方法可見(jiàn)虎紅平板凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、熒光偏振免疫試驗(yàn)以及試管凝集試驗(yàn)等。雖然曾有研究認(rèn)為試管凝集試驗(yàn)對(duì)診斷布魯菌病更有效。但在相關(guān)研究中指出，試管凝集試驗(yàn)需要較高的實(shí)施技巧，且試驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，在一定程度對(duì)其應(yīng)用進(jìn)行了阻礙。虎紅平板凝集試驗(yàn)具有操作方便、檢測(cè)時(shí)間較短的特點(diǎn)。在相關(guān)研究中得知，采取虎紅平板凝集試驗(yàn)患者的檢查結(jié)果數(shù)據(jù)相比較采取試管凝集試驗(yàn)在檢測(cè)患者的結(jié)果數(shù)據(jù)更優(yōu)，尤其是在布魯菌病抗體中有著較高的價(jià)值。另有研究結(jié)果表明，采取虎紅平板凝集試驗(yàn)確診布魯菌的檢測(cè)準(zhǔn)確率為96.43%，相比較其他兩種檢測(cè)方法較高。由此可見(jiàn)，此種方法的診斷效果較優(yōu)。可有助于疾病的初期診斷以及治療。

由于基層實(shí)驗(yàn)室的條件有限，對(duì)于布魯菌病原方面的檢測(cè)具有一定的難度，因此臨床中一般采用血清學(xué)檢測(cè)對(duì)布魯菌病進(jìn)行診斷。布魯菌病的臨床診斷一般采用血清學(xué)檢測(cè)。在相關(guān)研究中得知，使用了兩種凝集試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)人類布魯菌病抗體。虎紅平板凝集試驗(yàn)陽(yáng)性率為5.90%，試管凝集試驗(yàn)陽(yáng)性率為3.30%。可見(jiàn)虎紅平板凝集試驗(yàn)的數(shù)據(jù)相對(duì)較高；此外虎紅平板凝集試驗(yàn)的主要檢測(cè)項(xiàng)目是IgG抗體，具有較高的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確度，表明其對(duì)人布魯菌病抗體具有較高的敏感性，盡管有一定的概率會(huì)產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)假陽(yáng)性結(jié)果，此方法具有操作簡(jiǎn)單、成本低、速度快等特點(diǎn)，在大規(guī)模普查中有著重要的應(yīng)用價(jià)值。

試管凝集試驗(yàn)為半定量試驗(yàn)方法，在微生物檢驗(yàn)中常用已知細(xì)菌作為抗原液和一系列稀釋的受檢血清進(jìn)行混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通過(guò)產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋度作為血清中抗體評(píng)價(jià)[7-8]。虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)是用來(lái)診斷布魯菌病，主要檢測(cè)方法為取被檢測(cè)血清0.03 mL和抗原0.03 mL相結(jié)合，5 min內(nèi)觀察，如果出現(xiàn)“+”以上反應(yīng)者均為陽(yáng)性。布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原系用抗原性良好的布魯菌菌株，接種于適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)，收獲菌體，經(jīng)加熱滅活，離心后用虎紅染液染色，懸浮于乳酸緩沖液中制成[9-10]。反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)如下：①“－”無(wú)凝集，為均勻粉紅色。②“++”出現(xiàn)明顯卷邊，凝集塊間液體稍清亮。③“+++”凝集反應(yīng)較強(qiáng)。④“++++”凝集塊呈菌叢狀，凝集塊間液體清亮明顯。虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)一般無(wú)任何并發(fā)癥和危害，安全度較高[11]。本文即分析對(duì)于人布魯菌病抗體采用試管凝集試檢測(cè)和虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)實(shí)際效果，研究結(jié)果顯示，對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度80.00%，準(zhǔn)確度為82.50%，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后敏感度為100.00%，準(zhǔn)確度為97.50%。觀察組進(jìn)行虎紅平板凝聚試驗(yàn)檢測(cè)后敏感性以及準(zhǔn)確性明顯高于對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后準(zhǔn)確性以及敏感性（P＜0.05）；對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后陽(yáng)性36（90.00%）例，陰性4例（10.00%），觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后陽(yáng)性40例（100.00%），陰性0例，觀察組進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)后檢測(cè)效果明顯優(yōu)于對(duì)照組進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)后檢測(cè)效果（P＜0.05）。觀察組布魯菌檢出率為95.00%；對(duì)照組布魯菌檢出率為77.50%；觀察組數(shù)據(jù)相比較對(duì)照組較高（P＜0.05）。

綜上所述，在人布魯菌病抗體中采用虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)能夠提高敏感性和準(zhǔn)確性，具有明顯檢測(cè)效果，實(shí)際工作中為保證精確度，往往采用虎紅平板凝集和試管凝集試驗(yàn)相結(jié)合檢測(cè)。