松乳菇菌種不同形態(tài)對一定時間感染馬尾松苗存活影響

賀誼紅 朱 瑋

（吉安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西 吉安 343000）

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌絲來自吉安市青原山松乳菇子實(shí)體組織分離

1.1.2 供試馬尾松種子來自江蘇如意種業(yè)

1.1.3 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、麩皮、蛋白胨、vb1、煙酸、松針?biāo)?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 松乳菇母種制備

2018年10月31日在超凈工作臺以無菌操作，取本地市場上野生松乳菇菌柄組織接入由馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、麩皮、蛋白胨、vb1、煙酸、松針?biāo)M成的已消毒冷卻的松乳菇母種培養(yǎng)基6支試管（20×20），1管不接松乳菇菌柄組織做空白對照。26℃閉光培養(yǎng)。2管菌絲于2018年11月10日以乳狀態(tài)長于試管培養(yǎng)基斜面；1管菌絲以絲絨狀生長于試管培養(yǎng)基斜面；1管菌絲于2018年11月10日（10d）以白毛絮狀鋪滿試管培養(yǎng)基斜面；2管無菌絲萌發(fā)；空白對照管無雜菌感染。三種形態(tài)各轉(zhuǎn)接2次。轉(zhuǎn)管培養(yǎng)后的三種菌絲形態(tài)如圖1所示。

圖1

1.2.2 松樹種苗處理

1.2.2.1 松樹種子處理

用0.5%的高錳酸鉀溶液浸泡當(dāng)年種子2h，再用無菌清水沖洗數(shù)次。然后用43℃溫水浸種1晝夜，種皮吸水膨脹后撈 （1）白毛絮狀 （2）絲絨狀 （3）乳狀

出置于已消好毒的河沙中，放于已消好毒的25℃培養(yǎng)箱中催芽，并每天用無菌水淘洗2次直至7天后有30%種子裂嘴露白時，于2018年12月1日在超凈工作臺上將裂嘴露白種子以每瓶1粒，播入裝好已消好毒的壤土基質(zhì)240ml組培瓶中。

壤土基質(zhì)配制：黃心土4份河沙6份攪拌均勻。每130g配好的基質(zhì)壤土加水20ml，分裝240ml組培瓶。126℃高溫高壓消毒1.5h。

1.2.2.2 出苗管理

將播完馬尾松種子的114個組培瓶，放于已消好毒的21℃光照培養(yǎng)箱中出苗。光照1500lxs，每天通風(fēng)2次。經(jīng)18d（2018年12月1日至2018年12月18日）培養(yǎng)，106瓶長出松樹苗，出苗率93%。其中18粒種子發(fā)芽初期都有白色菌絲萌發(fā)且全發(fā)育成松樹苗無死亡。

1.2.3 接菌種培養(yǎng)

于2018年12月18日在超凈工作臺上將轉(zhuǎn)接2次將三種形態(tài)的松乳菇菌種（試管種20×20）每管用15ml無菌水稀釋接入已出苗的組培瓶（每瓶1ml）中。絲絨狀菌絲接種松樹苗32株，絲絨狀菌絲接種已長有白色菌絲的松樹苗6株，白毛絮狀菌絲接種松樹苗6株，乳狀菌絲接種松樹苗46株，乳狀菌絲接種已長有白色菌絲的松樹苗12株，4株松樹苗不接松乳菇菌種作空白對照。將接好菌種的松樹苗放于已消好毒的24℃，1500lks光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20d，觀察在光照培養(yǎng)箱中不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗的成活情況。

1.2.4 育苗

定植已感染的菌根苗，用花卉小鏟插入容器袋中央，右手提住帶有土壤基質(zhì)（注意已感染的菌根苗從組培瓶中起苗時根部土球定不要散落）的芽苗放入穴內(nèi)，使育苗袋中土壤與芽苗根部土球密合。自然環(huán)境培育，淋水要看天氣或土壤狀況，一般一星期一次，晴天干燥1天要澆2次水，寒流天氣吹北風(fēng)更應(yīng)注意淋透水，既要防干旱，又要防積水爛根，45天后，每隔2周施一次肥（0.4斤尿素＋1斤過磷酸鈣兌水100斤），噴施。分別于第10d、第96d、第106d、第133d對已接種菌種松樹苗觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工培養(yǎng)環(huán)境下松乳菇不同菌絲狀態(tài)感染對馬尾松苗成活的影響

由表1可知不同菌絲狀態(tài)在人工培養(yǎng)環(huán)境下感染馬尾松苗20d，對馬尾松苗的成活率有影響，白毛絮狀菌絲感染馬尾松苗成活率最高，其次是乳狀菌絲感染馬尾松苗成活率高，乳狀（松樹苗已長有白色菌絲）、絲絨狀、絲絨狀（松樹苗已長有白色菌絲）菌絲感染馬尾松苗成活率兼低，未接菌空白株無死亡。綜上所述乳狀菌絲在感染馬尾松苗過程中對馬尾松苗有傷害作用。白毛絮狀菌絲在感染馬尾松苗過程中對馬尾松苗無傷害作用。

表1 不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗成活率（2018年12月18日至2019年1月7日）

2.2 自然環(huán)境培養(yǎng)下松乳菇不同菌絲狀態(tài)感染馬尾松苗成活情況

已感染松乳菇不同菌絲狀態(tài)的馬尾松苗經(jīng)過133d在自然環(huán)境下的培養(yǎng)，結(jié)果如表2、圖2所示。通過以下圖表可以發(fā)現(xiàn)絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在自然環(huán)境下成活率相對絲絨狀感染馬尾松苗、乳狀感染馬尾松苗、白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗要高。白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗在自然環(huán)境下存活株數(shù)為0。由上述可見絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在自然環(huán)境中抗逆性強(qiáng)。絲絨狀感染馬尾松苗、乳狀感染馬尾松苗、白毛絮狀感染馬尾松苗、空白對照馬尾松苗在自然環(huán)境中易死亡抗逆性弱。

表2 自然環(huán)境培育不同時間段各種已感染不同形態(tài)菌種馬尾松苗成活狀況

圖2

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)中白毛絮狀菌絲感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率高，而移植于自然環(huán)境中抗逆性弱易死亡。絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率相對不高，在自然環(huán)境下133d成活率高抗逆性強(qiáng)。18粒種子發(fā)芽初期都有白色菌絲萌發(fā)且全發(fā)育成松樹苗無死亡。以上結(jié)果都與許多植物的種子缺乏菌根真菌就很難萌發(fā)，即使萌發(fā)也生長不正常甚至夭亡；莫美華報(bào)道紅汁乳菇提取物有抑制某些植物的發(fā)芽及生長，[1]相接近符合。絲絨狀已有毛感染馬尾松苗、乳狀已有毛感染馬尾松苗在人工潔凈條件下培養(yǎng)20d成活率相對不高，在自然環(huán)境下133d成活率高抗逆性強(qiáng)，此與植物種子發(fā)芽幾周后外生菌根便在二級菌系形成相符合。由此可見白毛絮狀菌絲及馬尾松種子發(fā)芽初期的白色菌絲具有向還無完整根系的馬尾松苗輸送營養(yǎng)的作用，而絲絨狀菌絲有利于菌根的形成，利于馬尾松苗自然環(huán)境下生長。本實(shí)驗(yàn)因是初實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量偏少，為增加高可信度，在以后的實(shí)驗(yàn)中還需加大樣本數(shù)。至于白毛絮狀菌絲、馬尾松苗已有白色菌絲、絲絨狀菌絲、乳狀菌絲之間的鑒定及關(guān)系還需要出菇及分子生物學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。