全自動化學發光免疫分析儀在梅毒螺旋體抗體檢測中的應用

陳秀英

龍海市第一醫院 （福建龍海 363199）

梅毒屬于一種傳染性較強的慢性性傳播疾病，該病的發生與梅毒螺旋體入侵機體所致一系列感染有關；一期梅毒以生殖器官或乳房、唇、舌部硬下疳為主要病理表現，隨著病情的不斷惡化，患者會出現穿鑿性潰瘍、組織壞死等不同程度的皮膚黏膜損傷。基于此，給予梅毒患者早期準確診斷，可及時阻止其病情惡化。梅毒感染者血液中含有大量梅毒螺旋體，此類厭氧微生物侵入人體后，機體免疫系統會產生大量針對梅毒螺旋體的抗體；若梅毒螺旋體抗體呈現明顯活性，則表示機體梅毒病情較活躍。暗視野顯微鏡法、酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等檢測方式雖在梅毒螺旋體抗體檢測中有一定應用價值，但暗視野顯微鏡法在明確物體細微結構方面未顯示出突出優勢，ELISA的檢測結果則較易受到血清樣本交叉反應的影響。研究顯示，全自動化學發光免疫測定法（chemiluminescence analysis，CLIA）在免疫分析方面具有較高的敏感性[1]，為研究此檢測方法在梅毒螺旋體抗體檢測中的應用價值，本研究對260例疑似梅毒患者進行CLIA、ELISA及梅毒螺旋體明膠凝集試驗（treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年2月至2021年2月于我院接受治療的260例疑似梅毒患者作為研究對象，其中男199例，女61例；年齡21～71歲，平均（49.79±8.33）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，患者家屬均自愿簽署知情同意書。

納入標準：出現淋巴結增大、硬下疳等疑似梅毒癥狀。排除標準：嚴重高血壓、心臟病未經控制者。

1.2 方法

囑患者檢測前一晚禁食，采集患者的晨起空腹靜脈血3 ml，在室溫狀態下靜置60 min 后離心（5000轉/min，10 min）并提取血清樣本待檢，每位患者的血清樣本均分為3份，分別進行CLIA、ELISA 及TPPA 檢測。本研究使用美國西門子醫學診斷股份有限公司所生產的ADVIA Centaur XP 全自動化學發光免疫分析儀（國食藥監械進字2014第3404170號）及配套試劑盒（國械注進20173406311）進行CLIA 檢測，采用科華生物工程股份有限公司 ST-360型酶標儀及配套試劑盒，以雙抗夾心法進行ELISA 檢測，采用北京中檢安泰診斷科技有限公司提供的TPPA 試劑盒（國械注準20153401572，型號為20T）進行TPPA 檢測，檢測過程中嚴格按照檢測儀器及試劑盒要求合理設置檢測參數。

1.3 觀察指標

以TPPA 檢測結果為金標準，比較CLIA、ELISA 的診斷準確度、靈敏度、特異度。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

以TPPA 檢測結果為金標準，CLIA 的診斷準確度、靈敏度、特異度均高于ELISA，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1～2。

表1 兩種方法的檢測結果比較（例）

表2 兩種方法的診斷效能比較（%）

3 討論

梅毒螺旋體感染可分為胎傳梅毒和獲得性梅毒，其中胎傳梅毒會影響胎兒身體狀況或導致胎兒出現全身感染甚至死亡，而獲得性梅毒以性傳播為主[2]。梅毒螺旋體的持續擴散，會導致機體心血管系統、中樞神經系統均受到侵犯，誘發主動脈炎、腦膜血管病等病癥。為有效阻止以上病癥的發生、最大限度保障母嬰安全，需盡早對個體梅毒感染程度進行評估以便開展針對性抗感染治療。梅毒螺旋體抗體是機體免疫系統應對梅毒感染的重要手段，檢測該抗體水平可為臨床診斷提供有效參考依據，而合理選擇檢測方法能夠進一步提升診治效率。

梅毒螺旋體感染人體局部組織后，機體血清中會產生針對梅毒螺旋體的特異性及非特異性抗體。其中特異性梅毒螺旋體的抗體產生早于非特異性抗體，且滯留于體內的時間較長，部分患者在梅毒感染癥狀完全緩解后仍能夠檢測出特異性抗體；此外，特異性抗體會受到妊娠、腫瘤、吸毒、結締組織病變等多種因素影響，主要體液免疫表現為IgM 水平升高，而非特異性抗體主要表現為IgG水平升高。TPPA 檢測較適用于普遍性篩查，全自動化TPPA 檢測操作加快了篩查效率，且檢測結果較穩定、直觀；需要注意的是，即使患者在接受抗梅毒治療后仍可能出現TPPA 陽性，故此檢測結果不適合作為區分既往感染、現癥感染的唯一標準。ELISA 主要對梅毒螺旋體的IgM、IgG 混合抗體進行檢測，該方法難以清晰地顯示梅毒螺旋體的實際活動情況，將其作為主要的療效監測措施可能會導致病情波動情況的診斷結果出現一定誤差，早期診斷中易檢出假陰性，且在一期、三期梅毒感染檢測中存在盲區。隨著檢測技術的不斷發展，全自動化學發光免疫分析儀應運而生。CLIA 克服了ELISA 干擾因素較多的缺點，其具有較長的發光信號時間和較高的光信號穩定性[3]，主要對特異性梅毒螺旋體抗體進行檢測，能夠檢測到TpN15、TpN17及TpN47等混合重組梅毒螺旋體抗體活性，而TpN15是活動期梅毒的標志性抗體，以上抗體所具有的炎癥活性與梅毒感染所引發的免疫反應關聯密切[4]，混合重組梅毒螺旋體抗體不僅會影響E-選擇素、單核細胞趨化蛋白-1等因子的表達，還會對人體血管內皮細胞合成及血管黏附因子在梅毒擴散過程中的相互作用產生影響，因此，對以上抗體活性進行監測，可進一步明確梅毒螺旋體的擴散、增殖情況，從而為臨床提供診斷參考依據；同時，與ELISA 相比，CLIA 檢測的線性范圍較寬，其能夠采用酶促發光底物來替代原有底物，通過測定微粒子表面非特異性抗體所結合的化學發光反應物相對光單位來得出待測物含量，其結果不易受人為操作、樣本數量的影響，且可進行重復操作，有效彌補了ELISA 在重復性上的不足，可應用于臨床大批量血清標本的篩查[5]；此外，CLIA 檢測時間較短，可隨時進行單個標本檢測，全自動化的操作能夠減少手工操作誤差并降低生物安全事件的發生概率，故全自動化學發光免疫分析儀已成為多數醫院檢測特異性梅毒螺旋體抗體的重要儀器。本研究結果顯顯示，以TPPA 檢測結果為金標準，CLIA 的診斷準確度、靈敏度、特異度均高于ELISA（P＜0.05），提示采用全自動化學發光免疫分析儀進行梅毒螺旋體抗體檢測可取得較為準確的診斷結果，且診斷靈敏度、特異度均較高。

綜上所述，在梅毒螺旋體抗體檢測中應用全自動化學發光免疫分析儀可取得較為理想的檢測結果，該檢測方式具有較高的準確度、靈敏度、特異度。