蘋果中腐霉利殘留快檢測定及方法評估

◎ 李 娟，高 華，陳海元，譚慧林

（阿克蘇地區食品安全檢測中心，新疆 阿克蘇 843000）

腐霉利是二甲酰亞胺類殺菌劑，是一種新型殺菌劑，也是低毒性殺菌劑，具有安全、低價、效果好等優勢，因此廣泛應用于蔬菜和水果的栽培中，防治灰霉病和菌核病。腐霉利不規范使用會在植物中富集，長期暴露會對人體生殖系統產生影響，美國環境保護署（Environmental Protection Agency，EPA）認為，腐霉利能引發人體雄激素依賴組織發生組織學變化，或對其他類似內分泌系統產生負面影響，嚴重影響人類健康[1]；腐霉利對土壤微生物的能量合成、DNA合成、蛋白質合成等多種生理功能都有負面影響，且腐霉利還會增加土壤中致病菌毒力因子基因的豐度，對環境健康構成一定風險[2]。因此，腐霉利殘留的測定對人們的健康和保護環境具有非常重要的意義。目前，腐霉利殘留的檢測主要利用熒光光譜法、高效液相色譜法、氣相色譜串聯質譜法等，這些方法具有選擇性好、靈敏度及準確度高的優點，但存在耗時長、出結果慢等特點；快檢法樣品前處理簡單，結果分析準確快速，攜帶方便，可隨時隨地進行現場實時檢測。

國際上的快檢產品評價體系已經發展得比較完善，但國內快檢產品評價體系剛剛起步，存在質量參差不齊、穩定性不足、靈敏度偏低、重現性差等缺點，原食品藥品監督管理總局印發的《食品快速檢測方法評價技術規范》為快檢試劑盒的評估提供了綱領性文件，本研究以《食品快速檢測方法評價技術規范》為依據，旨在為腐霉利的殘留快篩提供技術借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗所用蘋果樣品均采購于阿克蘇市銷售場所，均為阿克蘇市當地蘋果。腐霉利標準物質（濃度為1 000 μg·mL-1），北京壇墨質檢科技有限公司；乙腈（色譜純）、正己烷（色譜純），北京邁瑞達科技有限公司；腐霉利快檢試劑盒，均采用競爭法免疫膠體金檢測技術，為避免評價結果作為廠家宣傳工具，簡稱為試劑盒A、試劑盒B、試劑盒C。

1.2 儀器與設備

GC 2010 Pro氣相色譜儀，日本島津；NNW弗羅里矽柱，上海納諾微新材料科技有限公司；高速勻漿機、渦旋儀，艾卡（廣州）儀器設備有限公司；氮吹儀，上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

取蘋果樣品2.5 kg，縮分后切碎，充分混勻后粉碎，制成待測樣，放入分裝容器中，于-20 ℃下進行保存，實驗備用。

1.3.2 測定方法

按照行業標準《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）對蔬菜和水果中有機氯類、擬除蟲菊酯類農藥多殘留的測定要求，對待測樣品進行提取、凈化，并采用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進行腐霉利含量的測定。

1.3.3 色譜條件

采用1.0 m內徑的預柱和100%聚甲基硅氧烷分析柱；進樣口溫度200 ℃，檢測器溫度320 ℃；載氣為純度≥99.999%、流速為1 mL·min-1的氮氣，輔助氣為純度≥99.999%、流速為60 mL·min-1的氮氣；分流進樣，分流比為10∶1；進樣量為1.0 μL。

1.3.4 快檢試劑盒測定

分別按照3種試劑盒的說明書要求進行具體操作。

（1）試劑盒A。稱取（1±0.1）g待測樣本于樣品杯中（1 cm2左右，切勿將表皮切太碎，以免影響檢測結果），加入5 mL配套腐霉利稀釋液，手搖混勻30 s，放置于水平實驗臺上，充分提取1 min，此樣本杯內混合液體即為前處理待測液。從包裝袋中取出檢測卡，水平放置于觀察者正面，用移液器吸取80 μL稀釋后的前處理待測液，垂直緩慢滴加到檢測卡加樣孔（S）中，液體流動時開始計時，反應5～6 min，根據示意圖判定結果，其他時間判定無效。

（2）試劑盒B。將樣品剪成1 cm左右碎片，稱取1.0 g于離心管中，加入6 mL腐霉利提取液，手動振蕩30 s，靜置1 min后得到樣品待檢液。使用前將檢測卡和待測樣本溶液恢復至室溫。從包裝袋中取出試紙條，水平放置，取樣品待測液70 μL垂直滴于加樣孔中，加樣后開始計時，10 min后即可觀察結果，超過12 min后判讀無效。

（3）試劑盒C。檢測前將樣品剪碎成小于1 cm的碎片或細碎小丁，稱取1 g剪碎的樣品于15 mL離心管中，加入6 mL腐霉利稀釋液，蓋上蓋子，手動振蕩30 s，靜置1 min。從包裝袋中取出檢測卡，將檢測卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時，10 min后即可觀察結果。

（4）加標測定。分別取腐霉利終濃度為0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.3 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的加標樣品，分別用3種快檢試劑盒按操作說明進行檢測，并判斷檢測結果。

1.4 數據處理

依據原國家食品藥品監督管理總局發布的《食品快速檢測方法評價技術規范》計算實驗所用試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率、顯著性差異和相對準確度，使用Mcirosoft Excel 2010對數據進行整理分析。

2 結果與分析

2.1 蘋果中腐霉利農藥殘留的測定結果

采用行業標準《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）對所選樣品進行腐霉利殘留的測定，結果均顯示未檢出，見表1，說明在市場銷售環節的蘋果沒有腐霉利殘留，該結果與腐霉利行業標準檢測結果一致，未出現檢測結果的偏離。

表1 不同批次蘋果樣本中腐霉利殘留檢測情況表

2.2 快檢試劑盒的評估

根據3家快檢試劑盒提供信息檢出限均為0.2 mg·kg-1，因此規定≥ 0.2 mg·kg-1即為陽性樣品，＜0.2 mg·kg-1為陰性樣品。對3家快檢試劑盒添加不同濃度的加標基質進行檢測，結果如表2所示，表明3家快檢試劑盒在檢出限臨界值時的檢測結果存在差異。

表2 不同腐霉利加標濃度快檢結果表

3 結論與討論

本研究采用的3家試劑盒檢出限規定均在腐霉利濃度為0.2 mg·kg-1以上顯色，但在本次研究驗證過程中，試劑盒A和試劑盒C在0.3 mg·kg-1以上才顯色，較說明書規定的檢出限高；試劑盒B在0.1 mg·kg-1濃度顯色，導致假陽性率偏高。通過本次結果也可以看出，試劑盒B的靈敏度較其他兩者高，但其容易出現假陽性結果，試劑盒A和試劑盒C的靈敏度相對較低，容易出現假陰性結果，這與蔡新發、劉婷等[3-4]的研究結果一致。羅俊霞等[5]利用6種商品化農殘試劑盒對5種氨基酸甲酯類農藥進行檢測比對，結果顯示對同一種農藥而言，不同試劑盒的敏感性也不相同。因此，不同廠家生產的試劑盒效能不同，建議在使用之前對其適用性進行評價。

根據行業標準法和快檢試劑盒法對阿克蘇地產蘋果進行腐霉利殘留測定，結果均未檢出腐霉利殘留。通過在蘋果樣品中添加不同濃度的腐霉利標準品，結果顯示試劑盒B的靈敏度高于試劑盒A和試劑盒C，特異性較低，假陽性率高達50%，假陰性率低；3家快檢試劑盒的顯著性差異和相對準確度相同。綜上所述，腐霉利快檢試劑盒適于在基層開展蘋果中腐霉利篩查。