胃癌患者的血清miRNA-93水平及與臨床特征和預后的關系

楊茂省，楊到鳳，李世杰，劉大寧

1濮陽市第二人民醫院檢驗科，河南 濮陽 457000

2濮陽市人民醫院檢驗科，河南 濮陽 457000

胃癌是消化系統中常見且高發的惡性腫瘤，全球范圍內胃癌的病死率居全部惡性腫瘤第2位[1-3]。近年來中國胃癌的發病率呈逐年升高趨勢[4-5]。隨著中國全民健康意識和胃癌治療水平的不斷提高，中國胃癌的病死率得到有效控制，但中國欠發達地區的胃癌發病率和病死率仍然較高。早期胃癌多無典型癥狀，易與胃部良性疾病混淆，因此容易漏診或誤診。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼RNA，具有20～23個核苷酸序列，通過與靶mRNA的互補配對在轉錄后水平對基因的表達進行負調控[6-8]。miRNA在細胞的生長、分化等過程中具有重要作用，可影響多種惡性腫瘤細胞的增殖、浸潤及轉移。miRNA-93是miRNA家族成員之一，其高表達可促進胃癌細胞、食管癌細胞、骨肉瘤細胞、鼻咽癌細胞等多種惡性腫瘤細胞的增殖。miRNA-93高表達還與諸多惡性腫瘤的遠處轉移密切相關。本研究探討胃癌患者的血清miRNA-93水平及與臨床特征和預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年6月濮陽市第二人民醫院收治的胃癌患者。納入標準：①符合第8版《外科學》[9]和《胃癌病理分型和診斷標準的建議》[10]中胃癌的診斷標準；②經胃鏡病理或手術病理確診為胃癌；③臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②留存血樣時處于感染性疾病急性期、心腦血管疾病急性期、重大外傷后14天以內；③合并血液系統疾病；④入院前3個月內有放化療等抗腫瘤治療史；⑤復發胃癌；⑥出現遠處轉移；⑦失訪；⑧確診后放棄治療。依據納入和排除標準，本研究共納入82例胃癌患者，作為惡性組。選取同期接受治療的82例胃部良性疾病患者，作為良性組。惡性組中，男56例，女26例；年齡45～76歲，平均（59.21±8.12）歲。良性組中，男49例，女33例；年齡46～73歲，平均（58.96±7.74）歲；疾病類型：慢性萎縮性胃炎47例，胃潰瘍31例，反流性胃炎4例。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集兩組患者的靜脈血，3000 r/min離心10 min，獲得血清，采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測 miRNA-93相對表達量。依據miRNeasy Serum/Plasma Kit試劑盒說明書提取總RNA，使用分光光度儀測定總RNA濃度及純度。按照逆轉錄試劑盒miScriptⅡRT Kit說明書步驟完成逆轉錄合成cDNA。使用miScript SYBR Green PCR Kit試劑盒進行實時定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）。反應條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，60℃ 1 min，共45個循環。miRNA-93上游引物5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'，下游引物5'-ACGUGACACGUUCGGAGAAATT-3'；U6上游引物5'-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3'，下游引物5'-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3'。以U6為內參，采用 2-ΔΔCt法計算血清miRNA-93水平。

1.3 觀察指標

比較良性組和惡性組患者的血清miRNA-93水平，分析其對胃癌的診斷價值。以血清miRNA-93水平的中位值為界，將胃癌患者分為miRNA-93高表達組和miRNA-93低表達組，比較兩組患者的臨床特征，分析血清miRNA-93水平與胃癌患者臨床特征的相關性。隨訪3年，記錄胃癌患者預后，以病情未進展為預后良好，病情進展或死亡為預后不良，分析血清miRNA-93水平與胃癌患者預后的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS 25.0軟件對數據進行統計分析，采用K-S檢驗分析計量資料的分布狀態，符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線及曲線下面積（area under the curve，AUC）分析miRNA-93對胃癌的診斷價值，AUC＞0.9為較高診斷價值，0.7＜AUC≤0.9為中等診斷價值，0.5≤AUC≤0.7為較低診斷價值，AUC＜0.5為基本無診斷價值。相關性分析采用Spearman相關分析，以|r|≥0.3為具有相關性，越接近1，相關性越顯著。采用Cox比例風險回歸模型分析血清miRNA-93水平與胃癌患者預后的關系，OR＞1為危險因素，OR＜1為保護因素。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清miRNA-93水平的比較

惡性組患者的血清miRNA-93水平為（3.78±1.32），明顯高于良性組患者的（2.10±0.42），差異有統計學意義（t=10.948，P＜0.01）。

2.2 血清miRNA-93水平對胃癌的診斷價值

血清miRNA-93水平對胃癌具有中等診斷價值，AUC為0.852（95%CI：0.781～0.923），其診斷胃癌的cut-off值為2.985，靈敏度為76.83%，特異度為95.12%。（圖1）

圖1 血清miRNA-93水平診斷胃癌的ROC曲線

2.3 miRNA-93高表達組和miRNA-93低表達組胃癌患者臨床特征的比較

82例胃癌患者的血清miRNA-93水平中位值為4.055，據此劃分為miRNA-93高表達組40例和miRNA-93低表達組42例。兩組患者的年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；miRNA-93高表達組中腫瘤直徑≥5 cm、低分化、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴轉移的患者比例均高于miRNA-93低表達組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 miRNA-93高表達組和miRNA-93低表達組胃癌患者臨床特征的比較

2.4 血清miRNA-93水平與胃癌患者臨床特征的相關性

血清miRNA-93水平與胃癌患者的腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況均呈正相關（r=0.557、0.609、0.610、0.655，P＜0.01）。

2.5 血清miRNA-93水平與胃癌患者預后的關系

胃癌患者中預后不良39例，miRNA-93高表達組患者預后不良發生率為60.00%（24/40），高于miRNA-93低表達組患者的35.71%（15/42），差異有統計學意義（χ2=4.845，P=0.028）。Cox比例風險回歸分析顯示，血清miRNA-93高表達是胃癌患者預后不良的獨立危險因素（OR=2.488，95%CI：1.717～3.604，P＜0.05）。

3 討論

胃癌以中老年人為主要發病群體，起病隱匿，早期多無典型表現，因此早期診斷率有待提高。近年來中國胃癌的治療水平不斷提高，早期和中期胃癌患者多可通過規范化手術治療獲得理想預后，早診斷、早治療對提高胃癌患者生存率具有重要意義。病理檢查是胃癌診斷的金標準，但取材難度高，重復性不佳，適用范圍受到一定限制。因此，尋找一種易于操作，靈敏度、特異度和準確度均較高的診斷方式對胃癌的診斷和治療具有重要意義。

研究表明，miRNA參與惡性腫瘤細胞的生長、分化和侵襲過程[11-12]。由于miRNA是一類廣泛存在于機體中的小片段非編碼RNA，在血清中具有較高的穩定性，不易被酶降解，亦不易受外界因素的干擾，因此，血清miRNA可作為多種惡性腫瘤診斷與病情判斷的分子標志物[13-15]。臨床上已有諸多miRNA作為各種惡性腫瘤早期診斷、病情判斷及預后評估的分子標志物[16-18]。王丹等[19]研究表明，血清miRNA-187-3p可作為肝細胞癌早期診斷、預后評估的生物標志物。王靜等[20]研究發現，血清miRNA-223可為胃癌的臨床診斷提供重要參考。但目前臨床上關于診斷胃癌的血清miRNA標志物尚無統一定論。miRNA-93是miRNA-106b-25簇的一個重要成員，在消化系統惡性腫瘤中異常表達，其表達水平可能與胃癌患者的臨床特征和預后有關。miRNA-93作為腫瘤基因可促進惡性腫瘤細胞生長。miRNA-93是一種致癌基因，可通過促進B細胞淋巴瘤-2等抗腫瘤細胞凋亡蛋白的合成發揮促進腫瘤生長、侵襲及腫瘤新生血管生成等作用。因此，抑制miRNA-93的表達能夠促進腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖、遷移。

本研究結果表明，胃癌患者血清miRNA-93水平明顯高于胃部良性疾病患者，提示miRNA-93在胃癌的發生發展過程中發揮重要作用。本研究結果顯示，血清miRNA-93水平對胃癌具有中等診斷價值，AUC為0.852（95%CI：0.781～0.923），其診斷胃癌的cut-off值為2.985，靈敏度為76.83%，特異度為95.12%。miRNA-93高表達組中腫瘤直徑≥5 cm、低分化、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴轉移的患者比例均高于miRNA-93低表達組，差異均有統計學意義（P＜0.05），提示血清miRNA-93高表達胃癌患者的腫瘤較大、分化程度較低、臨床分期較高且易出現淋巴結轉移。相關性分析結果顯示，血清miRNA-93水平與胃癌患者的腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況均呈正相關（P＜0.01），提示檢測胃癌患者的血清miRNA-93水平能夠為評估患者臨床特征提供必要參考。隨訪3年，miRNA-93高表達組患者預后不良發生率高于miRNA-93低表達組患者（P＜0.05）；Cox比例風險回歸分析顯示，血清miRNA-93高表達是胃癌患者預后不良的獨立危險因素（OR=2.488，95%CI：1.717～3.604，P＜0.05）。說明血清miRNA-93異常升高可提示胃癌患者預后不良，為臨床治療方案的選擇提供重要參考。

綜上所述，血清miRNA-93水平對胃癌具有中等診斷價值，其與胃癌患者的臨床特征具有相關性，其高表達是胃癌患者預后不良的危險因素。因此，臨床上對于血清miRNA-93高表達的胃癌患者應根據其具體情況給予規范化綜合治療，以最大限度地改善患者預后，延長患者生存期。