生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的鑒別與防控

鄭杰民

(廈門海洋職業(yè)技術學院，福建 廈門 361008)

生魚是輻鰭魚綱、鱸形目、鱧科、鱧屬魚的統(tǒng)稱，以烏鱧(Channa argus)與斑鱧(Channa maculata)人工雜交而成的雜交鱧，因具有生長快和抗病力雙重優(yōu)勢，已成為生魚高密度養(yǎng)殖放養(yǎng)比例最高的品種。制約生魚高密度養(yǎng)殖盈利的關鍵因素中，病害及其造成的損失排在第1位，其中危害最為嚴重的是以內臟“白點”為臨床癥狀的諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病。前者的病原主要為鰤魚諾卡氏菌(Nocardia seriolae)，后者的病原為舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)。兩者臨床癥狀上均為內臟出現“白點”，在診斷上極易混淆，生產上常因為疾病診斷不準確而延誤治療時機，造成較大經濟損失。因此，本文從病原屬性、病理特征、鑒別診斷和防控技術四個方面，比較生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的差異，以期推動生魚養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

一、病原屬性

1.病原形態(tài)與分布

(1)鰤魚諾卡氏菌：鰤魚諾卡氏菌為革蘭氏陽性長桿菌，具有弱抗酸性，沒有運動能力，以腐生為主，廣泛分布于土壤、活性污泥、海水、腐爛的植被及動物的排泄物中(張媛等，2012)。該菌生長緩慢，28℃下需5～14天培養(yǎng)皿上才形成白色或淡黃色菌落。菌落呈沙粒或花瓣狀，粗糙易碎，邊緣不規(guī)則，表面有時凸起形成皺褶，在綿羊血平板上不溶血。

(2)舒伯特氣單胞菌：舒伯特氣單胞菌為革蘭氏陰性短桿菌，屬于氣單胞菌科(Aeromonadaceae)、氣單胞菌屬(Aeromanas)。該菌單極鞭毛，運動極為活潑，廣泛分布于土壤、淡水、水中沉積物及動物排泄物中。該菌生長速度快，14～24 小時即可在培養(yǎng)皿上形成中央隆起、圓形、濕潤、表面光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，在綿羊血平板上呈β－溶血。

(3)關鍵異同點：鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌均可在胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂平板、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基等生長，但在培養(yǎng)基接種至形成單個菌落所需時間不同，鰤魚諾卡氏菌耗時一般5～7 天，而舒伯特氣單胞菌耗時一般僅14～20 小時(Kariya T 等，2009；莫金鳳等，2016)。挑取菌落革蘭氏染色鏡檢，呈革蘭氏染色陽性的鰤魚諾卡氏菌多呈桿狀分枝，菌體長度最大超過100微米，而呈革蘭氏染色陰性的舒伯特氣單胞菌多呈短桿狀，菌體長度多為1～3微米，詳見表1。

表1 鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌病原屬性差異

2.病原生理生化特性

(1)鰤魚諾卡氏菌：該菌具有弱抗酸性，專性需氧，可分解七葉苷和尿素，可利用檸檬酸鹽，不能還原硝酸鹽，不能分解腺嘌呤、黃嘌呤、干酪素、酪氨酸。該菌可在20℃及30℃下生長，于50℃放置8小時后仍可存活，35℃及45℃的培養(yǎng)溫度均不能生長，并且不能在含有4%氯化鈉的葡萄糖酵母浸膏培養(yǎng)基上生長(Kudo T 等，1988；Isik K等，1999)。

(2)舒伯特氣單胞菌：該菌兼性厭氧，氧化酶、精氨酸雙水解酶和賴氨酸脫羧酶均為陽性，鳥氨酸脫羧酶、吲哚、VP 陰性，不能發(fā)酵葡萄糖產氣，不分解阿拉伯糖、乳糖、蔗糖、肌醇、甘露醇、水楊苷和七葉苷。該菌魚源菌株在5～50℃的溫度范圍均可生長，最適生長溫度為30℃(Chen Y F 等，2012；莫金鳳等，2016)。舒伯特氣單胞菌可以耐受的pH為3～11，鹽度為0～5.5。

(3)關鍵異同點：鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌生長特性差異比較詳見表2。

表2 鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌生長特性

二、病理特征

1.臨床癥狀

生魚感染鰤魚諾卡氏菌初期體表無明顯癥狀，攝食無明顯異常；隨著病情加重，發(fā)病魚食欲下降，游邊且活力減退，有些伴有眼球外突的癥狀；在發(fā)病后期，生魚出現鰓絲局部灶性壞死，鰭條充血、體表散在性的化膿性潰瘍灶，肛門紅腫和偶見腹水性腹部膨大等現象。

生魚感染舒伯特氣單胞菌初期體表無癥狀或出現少量紅點，然而，在2～3 天發(fā)病生魚內臟會出現肉芽腫，且肉芽腫中可檢測到大量活細菌(常藕琴等，2013)。

2.血液學指標

鰤魚諾卡氏菌感染會引起烏鱧血液指標明顯變化，主要為血細胞數呈先升高、后降低的趨勢，而血細胞脆性在各實驗時間點均高于對照組；血清堿性磷酸酶呈先降低、后升高趨勢，血清溶菌酶、血清總蛋白和血清尿素氮等均呈先降低、后增高、再降低的趨勢，血清乳酸脫氫酶活力顯著增加(孫東雨等，2012)。

生魚感染舒伯特氣單胞菌也會引發(fā)血液指標變化，但未見相關文獻報道。

3.病理特征

典型的肉芽腫結構可分為3層，即中央為壞死的無結構細胞碎片和病原菌形成的干酪樣壞死，周圍圍繞胞體較大、邊界不清的類上皮細胞或多核巨細胞層，最外層為成纖維細胞和纖維細胞組成的包膜層(常藕琴等，2008)。生魚感染鰤魚諾卡氏菌的中后期(感染10～15 天)，魚體內臟表現出明顯的組織病理變化，在肝、脾和腎組織形成肉芽腫病理癥狀，并伴有脂肪變性、炎性細胞浸潤等現象(安樹偉等，2012)。生魚感染舒伯特氣單胞菌中后期(感染2～3 天)，發(fā)病魚肝臟、脾臟、腎臟等器官形成平滑、柔軟、邊緣界限清晰的點狀壞死灶，大小為0.5～2.2 毫米。具體差異見表3。

表3 生魚感染鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的癥狀

三、診斷技術

1.臨床診斷

(1)根據諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的流行期做出初步判斷。一般情況下，諾卡氏菌病高發(fā)于1齡生魚當年的10－12月和2齡生魚當年的所有階段，舒伯特氣單胞菌病高發(fā)于1 齡生魚當年的6－8月和2齡生魚當年的4－5月。

(2)根據病程的長短和死亡的程度來判斷。生魚諾卡氏菌病的病程比較緩慢，從感染到出現臨床癥狀一般需要10～15 天，表現為緩慢死亡的特征；而舒伯特氣單胞菌感染后則表現為急性發(fā)病，從感染到出現死亡一般僅需要2～3 天，表現為急性傳染性死亡。

(3)根據魚體臨床癥狀和解剖癥狀進行初診。一般情況下，生魚諾卡氏菌病的內臟結節(jié)質地較硬，用玻片按壓不易鋪平；而生魚舒伯特氣單胞菌病的內臟結節(jié)質地較軟，正面按壓易鋪平。

(4)取病變部位的結節(jié)涂片，革蘭氏染色后鏡檢，若發(fā)生諾卡氏菌病可觀察到革蘭氏陽性的分枝桿菌，較易與其他菌區(qū)分比較；發(fā)生諾卡氏菌病病變部位的結節(jié)中常可觀察到革蘭氏陽性的短桿菌，不易與氣單胞菌屬的其他菌區(qū)分比較。

2.實驗室檢測

利用PCR、熒光PCR 等技術手段，通過特異性引物對目標片段擴增，較短時間即可對病原的種屬做出鑒定。

針對鰤魚諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的快速診斷試紙，例如膠體金快速檢測試紙條符合使用便利的優(yōu)點，在市場上也有較大的需求，市場空間取決于膠體金快速檢測試紙的準確性和使用成本雙重因素。

四、防控技術

1.優(yōu)化養(yǎng)殖管理，降低發(fā)病風險

生魚養(yǎng)殖畝產超5 000 千克，畝均投喂飼料約6噸，一方面，氮源通過生態(tài)路徑轉化為氨氮和亞硝酸鹽，且由于持續(xù)累積引發(fā)氨氮和亞硝酸鹽持續(xù)超標，間接地導致魚體出現氨氮和亞硝酸鹽中毒，體質隨之下降；另一方面，魚體排出的糞便到達底部，引發(fā)底部氧債和氧化還原電位急速下降，會引發(fā)生魚的低氧脅迫問題，體質也隨之下降。因投喂引發(fā)水質和底質問題，對生魚誘發(fā)諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病存在一定的關聯(lián)性。因此，通過養(yǎng)殖管理的優(yōu)化，例如更換新水，使用抗應激類產品、微生態(tài)制劑、環(huán)境改良劑，增加單位養(yǎng)殖水面的增氧設備，全方位降低生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的發(fā)生風險。

2.藥物手段治療

一般情況下，通過藥敏試驗篩選高敏合規(guī)抗生素用于治療水產動物疾病，有利于精準用藥和對癥治療，然而鰤魚諾卡氏菌有不易培養(yǎng)和在培養(yǎng)基生長緩慢的特點，現實操作中很難通過對鰤魚諾卡氏菌做藥敏試驗來獲得對高敏抗生素的篩選；相反，舒伯特氣單胞菌通過藥敏試驗則可篩選到較可靠的敏感合規(guī)的抗生素。因此，在藥物篩選上，生產上治療諾卡氏菌病多是結合以往治療有效的方案和經驗進行用藥，而治療舒伯特氣單胞菌病則可以根據藥敏試驗篩選的抗生素進行用藥。需要注意的是，無論用于治療諾卡氏菌病，還是用于治療舒伯特氣單胞菌病，抗生素單用或聯(lián)用時，都必須達到有效治療劑量，確保用藥治療期間魚體內達到抗菌作用的血藥濃度。因此，以魚群存塘總量來測算單次用藥劑量，用藥時則要確保這些劑量能在其中一餐拌飼投喂，如果將單次用藥劑量分成單日兩餐投喂，可能會因魚體內達不到有效的血藥濃度而影響治療效果。