FAM83H 及其天然反義轉錄本FAM83H-AS1在肺腺癌和卵巢癌發生發展中的作用

劉夢真 孫蓉蓉 劉艷華 張有為

1.徐州醫科大學臨床學院，江蘇徐州 221009；2.江蘇省徐州市中心醫院腫瘤內科，江蘇徐州 221009

惡性腫瘤已成為我國居民的主要死因，探索腫瘤發生發展中的關鍵基因具有重要意義[1]。FAM83H 位于染色體8q24.3，是FAM83 家族成員之一，最初因其在牙齒發育中的重要作用被關注，FAM83H 在肝細胞癌、腎癌、胃癌、胰腺癌和宮頸癌等腫瘤中高表達，并促進癌細胞的生長、侵襲和轉移[2-6]。FAM83H-AS1 位于FAM83H 的對側，是其天然反義轉錄本，二者以頭對頭（5’-5’）形式互補重疊。研究表明，FAM83H-AS1 是多種腫瘤潛在的診斷、預后標志物和治療靶點[7-9]。本研究擬在泛癌種水平研究FAM83H 和FAM83H-AS1 在腫瘤發生發展中的生物學作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

CCK-8 購于Signalway Antibody（CP002）；Transwell小室購于Costar（3422）；Trizol 購于美國Invitrogen 公司（1596026）；逆轉錄試劑盒購于Fermentas（#K1622）；SYBR Green PCR 試劑盒（#K0223）、BCA 蛋白定量試劑盒（PICPI23223）、兔抗人FAM83H 多克隆抗體（PA5-55094）購于Thermo；兔抗人GAPDH 單克隆抗體（#5174）購于CST；羊抗兔HRP 標記二抗（A0208）、Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒（C1036）購于上海碧云天生物技術有限公司。

1.2 生物信息學分析

在線分析FAM83H 基因在惡性腫瘤中的表達及預后，測試數據集來自基因表達譜動態分析（gene expression profiling interactive analysis，GEPIA）工具（http：//gepia2.cancer-pku.cn）[10]。

1.3 細胞培養和轉染

siFAM83H 與siFAM83H-AS1 干涉載體由上?；鶢栴D生物公司構建。A549、SKOV3 細胞均用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培養基在37℃，5%CO2培養箱中培養。取對數生長期的細胞進行轉染，分為空載對照組（siNC 組）和實驗組（siFAM83H 組、siFAM83H-AS1組），同時設置空白對照組（control 組），細胞轉染利用脂質體Lipofectamine 2000（美國Invitrogen 公司）介導的方法，轉染48 h 后進行后續實驗。本研究所有實驗步驟均重復3 次。

1.4 Real-time PCR 實驗

胰酶消化并收集各組細胞，Trizol 試劑盒提取總RNA，并對提取的RNA 進行濃度和純度檢測?！?br>