氣相色譜法測定消栓通絡片中龍腦和異龍腦的含量及質量評價

李存金，鄧杰華，吳喆，周云峰

1.江西省藥品檢查員中心，江西 南昌 330029；2.宜春市檢驗檢測中心，江西 宜春 336000

消栓通絡方出自北京同仁堂傳統秘方［1］，其中消栓通絡片收載于現行《中國藥典》，由川芎、丹參、黃芪、澤瀉、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片、山楂共11 味中藥制成，有活血化瘀，溫經通絡之功效［2］。方中冰片為合成品，其主要成分為龍腦和異龍腦，有開竅醒神作用。現代研究表明，冰片可促進藥物通過血腦屏障、黏膜、胃腸道、皮膚等部位，可發揮引領其他藥物直達病所作用［3-5］，作為佐使藥，正如《本草衍義》所述冰片：“獨行則勢弱，佐使則有功”［6］。

現行質量標準［2］對該中成藥中冰片的質量控制為化學鑒別。因中成藥成分復雜［7］，采用化學反應鑒別其中某種成分往往專屬性不強，在監督抽驗和研究中亦發現不同廠家或批次的制劑中冰片主要成分含量存在較大差異。為了準確反映樣品中冰片的質量，本實驗建立了消栓通絡片中冰片（以龍腦和異龍腦的總量計算）的含量測定方法，并以此為指標對11 家企業生產的26 批次樣品進行質量評價。

1 儀器與材料

7890A 氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；MS205DU 電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；PL-S60 超聲波清洗儀（東莞康士潔超聲波科技有限公司）。龍腦對照品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號110881-201709，含量：99.6%），異龍腦對照品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號111512-201904，含量：98.4%）；乙酸乙酯（色譜純，天津光復科技發展有限公司）。

消栓通絡片共26 批次涉及11 個生產企業（18批次來自市場監督抽樣，8 批次通過網絡平臺自購），樣品信息見表1。

表1 消栓通絡片樣品信息

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-WAX（30 m×0.45 mm×0.85 μm)；火焰離子化檢測器（FID）；進樣口溫度200 ℃；檢測器溫度300 ℃，分流比為2∶1；柱溫：140 ℃，保持20 min；進樣量為1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取龍腦對照品19.03 mg、異龍腦對照品20.96 mg 分別置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備取樣品20 片，除去包衣，研細，取約0.2 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯適量溶解，冰浴超聲處理（功率250 W，頻率40 kHZ）30 min，放至室溫，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備精密稱取不含冰片的消栓通絡片陰性樣品約0.2 g，按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線制備精密吸取龍腦對照品儲備液、異龍腦對照品儲備液，加入乙酸乙酯配制系列濃度的對照品溶液，按照“2.1”項下色譜方法進行測定。以峰面積Y為縱坐標，對照品溶液濃度X（μg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線。龍腦、異龍腦的線性范圍、回歸方程和相關系數見表2。

表2 龍腦、異龍腦線性關系

2.3.2 專屬性實驗取“2.2”項下制備的陰性樣品溶液、供試品溶液、對照品溶液分別照“2.1”項下色譜方法進行測定，采集色譜圖，如圖1 所示，供試品溶液出現與龍腦、異龍腦保留時間一致的色譜峰，且陰性樣品色譜圖在相應位置處無相應色譜峰，說明該方法專屬性較好。

圖1 GC色譜圖：A.混合對照品；B.供試品；C.陰性樣品

2.3.3 精密度試驗精密吸取龍腦對照品溶液、異龍腦對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件，連續進樣6 次，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，結果顯示，龍腦、異龍腦峰面積的RSD 值分別為0.5%、0.8%，表明方法精密度好。

2.3.4 重復性試驗取消栓通絡片樣品（編號25）粉末0.2 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，并計算其含量。結果龍腦、異龍腦含量RSD（n=6）值分別為1.6%、1.5%，表明該方法重復性好。

2.3.5 穩定性試驗取同一份消栓通絡片樣品供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h 進樣測定，記錄龍腦、異龍腦的峰面積，計算峰面積RSD 為1.8%、1.9%，表明樣品溶液在24 h 內穩定。

2.3.6 加標回收試驗精密稱取6 份消栓通絡片樣品（編號25）各0.1 g，加入龍腦、異龍腦對照品溶液適量，按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果龍腦的回收率范圍為96.00%～100.27%，異龍腦回收率范圍為96.32%～101.22%，RSD 值均小于2.0%，表明該方法準確度高。

2.4 實驗結果

26 批次市售消栓通絡片均檢出與龍腦對照品、異龍腦對照品保留時間一致的色譜峰，計算樣品中龍腦、異龍腦的含量，結果見表3。26 批次樣品中冰片含量（以龍腦、異龍腦的總量計）在0.42～4.49 mg/片之間，不同企業冰片含量差異較大，如K 公司的消栓通絡片中冰片含量最高為4.49 mg/片，為B 公司（0.42 mg/片）的10 倍，且同一企業不同批次樣品中冰片的量呈總體較離散狀態。

表3 消栓通絡片中冰片含量測定結果 mg/片

3 討論

《中國藥典》2020 年版一部冰片（合成龍腦）標準中含量測定項規定“本品含龍腦（C10H18O）不得少于55.0%”。計算本研究中26 批次樣品中龍腦含量與龍腦、異龍腦總量的比值在55.9%～64.3%之間。消栓通絡片現行質量標準采用冰片升華物與香草醛濃硫酸發生顯色反應來鑒別冰片［2］，專屬性不強，且不能反映方中冰片的質量、投料量、主要成分含量及制劑成型的質量控制等。本研究采用氣相色譜法測定了消栓通絡片中龍腦和異龍腦的含量，以二者總量來計算冰片的含量，能有效控制冰片的質量、投料量及制劑成型過程。結果不同廠家26批次制劑中冰片含量差異較大。

供試品溶液制備參考相關文獻報道［8-9］，考察了不同超聲時間的影響，最終選擇超聲30 min 作為最佳提取條件。

消栓通絡片制法為除冰片外的其余藥味制粒、干燥后，冰片以原粉直接加入，后續混勻、包衣工藝均未涉及連續高熱，理論轉移率應接近90%，根據處方中冰片用量5.7 mg/片，以實際樣品中龍腦、異龍腦總量計算冰片的平均轉移率僅為42.2%，分析原因可能是冰片屬揮發性藥材，原材料質量、生產工藝、包衣輔料、包裝材料、貯存條件等因素都會影響其含量［9］。以平均轉移率42.2%計算，擬定本品每片含冰片（以龍腦、異龍腦總量計）不得少于2.41 mg/片。不同企業、相同企業不同批次生產的消栓通絡片中冰片含量差異較大，26 批次樣品中低于擬定限度（2.41 mg/片）的有10 批次，合格率為61.5%，提示部分企業冰片原料質量、投料量可能存在問題，或制劑在生產、儲存過程中冰片揮發而導致龍腦和異龍腦含量偏低。建議法定檢驗標準中增加消栓通絡片中冰片的含量測定項；生產企業按規定優化工藝，如將冰片進行包合后再入藥，以及改進包衣輔料、包裝材料等，以保證其臨床用藥的有效性。