黨參多糖對環磷酰胺所致小鼠貧血的治療效果觀察

邢秀玲，趙海鷹，李麗君，高麗華,才蔚濤，王海燕，王 巍，田 菲，孫映雪，劉偉然，杜美容

腫瘤相關性貧血(CRA)是指腫瘤患者在疾病發展、治療過程中出現的貧血，機體內血紅蛋白(Hb)濃度降低或外周血單位容積內紅細胞數量減少，機體無法對周圍組織與細胞供氧，進而引發的惡性貧血[1-2]。CRA在采用放療或多種化療腫瘤患者中的發生率為70%～90%[3]，惡性腫瘤化療所致貧血常導致患者無法繼續化療和出現一系列貧血癥狀。目前，隨著中藥在臨床中的廣泛應用，其在減輕化療藥物毒副作用等方面發揮了積極作用。黨參性味甘平，歸脾肺兩經，具有養血生津、健脾益肺的功效[4]。本研究主要探討黨參多糖對環磷酰胺(CTX)所致小鼠貧血的治療效果。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1實驗動物：SPF級健康雄性BALB/c小鼠60只，10周齡，體質量18～22 g，購自百農實驗動物繁育科技有限公司，飼養于天津中醫藥大學動物實驗研究中心，實驗動物許可證號SCXY(津)2015-0002。實驗動物分籠飼養，飼養環境：溫度(22±2)℃，相對濕度60%～70%，自由攝食飲水。適應性飼養7 d后備用。

1.1.2藥物與試劑：黨參多糖，純度為98%，購自陜西慈緣生物技術有限公司，批號20190507；注射用CTX購自江蘇盛迪醫藥公司，批號H32026196；生理鹽水購自山東魯抗醫藥公司，批號H20045154；生血寧片購自武漢聯合藥液有限責任公司，批號20150305。促紅細胞生成素(EPO)酶聯免疫吸附試驗檢測試劑盒購自美國RB公司，批號DRE30187；多能集落刺激因子(multi-CSF)檢測試劑盒購自上海烜雅生物有限公司，批號XY-SJH-XS1176；CD71、Ter119購自美國BD公司，批號分別為554890及563998。

1.1.3實驗儀器：F-800型全自動血球計數儀購自日本Sysmex公司，流式細胞儀購自美國貝克曼庫爾特公司，MK3型全自動酶標儀購自上海賽默飛世爾有限公司，ROTOFIX 32臺式離心機購自德國HITTICH公司。

1.2實驗方法

1.2.1動物造模和分組[5]：按照隨機數字表法將60只小鼠均分為空白組、模型組[5]和黨參多糖低、中、高劑量組及陽性對照組6組。模型組和低、中、高劑量組及陽性對照組分別于實驗第1天，按100 mg/kg劑量腹腔注射CTX,每日1次；空白組給予等容積生理鹽水腹腔注射，連續7 d。實驗第2天開始，于注射CTX后2 h，低、中、高劑量組分別給予黨參多糖10、20、40 ml/kg灌胃；陽性對照組給予生血寧片，用前將藥片研成細粉末，用生理鹽水配制，按照400 mg/kg劑量灌胃，每日1次，連續7 d。每3日稱體質量并檢測小鼠血紅細胞(RBC)和Hb。實驗期間各組小鼠均自由攝食飲水。

1.2.2RBC、Hb及紅細胞壓積(HCT)測定：實驗第9天，各組依次經鼠尾靜脈取血0.5 ml，置入抗凝試管中，用全自動血球計數儀測定RBC、Hb及HCT水平。

1.2.3multi-CSF和EPO測定：實驗第9天，各組依次經鼠尾靜脈取血0.5 ml，血液樣品置于室溫自然凝固15 min，然后3000 r/min離心20 min，取血漿于-20 ℃環境中保存備用。嚴格按照ELISA試劑盒說明書檢測血漿multi-CSF和EPO水平。

1.2.4外周血細胞CD71+和Ter119+測定[6]：同上取各組小鼠尾靜脈血，置入抗凝試管中，紅細胞裂解液裂解，離心，棄上清，加入PBS液洗滌2次，離心，棄上清，收集細胞。分別加入抗CD71和Ter119單克隆抗體各10 μl，震蕩混勻，室溫避光反應20 min，1000 r/min離心5 min，棄上清，再加入PBS液洗滌2次，1500 r/min離心10 min，用流式細胞儀檢測CD71+和Ter119+水平。

2 結果

2.1各組小鼠RBC、Hb和HCT水平比較 與空白組比較，模型組外周血RBC、Hb和HCT均顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，低、中、高劑量組RBC、Hb和HCT均顯著升高(P<0.05)；空白組與陽性對照組比較，RBC、Hb和HCT均無差異(P>0.05)。低劑量組、中劑量組RBC、Hb、HCT明顯低于陽性對照組(P<0.01)，高劑量組RBC、Hb、HCT與陽性對照組比較無差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠外周血RBC、Hb和HCT水平比較

2.2各組小鼠multi-CSF和EPO水平比較 與空白組比較，模型組外周血multi-CSF和EPO水平均顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，低、中、高劑量組multi-CSF和EPO水平均顯著升高(P<0.05); 空白組與陽性對照組比較，multi-CSF和EPO均無差異(P>0.05)。低、中、高劑量組multi-CSF均低于陽性對照組(P<0.01)，且隨著干預劑量的增加multi-CSF呈升高趨勢；低、中劑量組EPO明顯低于陽性對照組(P<0.01)，高劑量組EPO與陽性對照組比較無差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組小鼠multi-CSF和EPO水平比較

2.3各組小鼠外周血CD71+和Ter119+水平比較 模型組CD71+和Ter119+水平顯著低于空白組(P<0.01)；與模型組比較，低、中、高劑量組CD71+和Ter119+水平均顯著升高(P<0.01)；空白組與陽性對照組比較，CD71+和Ter119+水平無差異(P>0.05)。低、中劑量組CD71+和Ter119+水平均低于陽性對照組(P<0.01)，高劑量組CD71+和Ter119+水平與陽性對照組比較無差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組小鼠外周血CD71+和Ter119+水平比較

3 討論

CRA是指因腫瘤因素或在腫瘤治療過程中發生的貧血，是惡性腫瘤常見并發癥。嚴重貧血可增強惡性腫瘤的侵襲性，還能促進腫瘤細胞轉移，進而影響腫瘤的治療效果及患者預后，降低患者生存質量[7-8]。目前臨床針對CRA主要采用輸血或多種生血藥物聯合治療。輸血常用于嚴重貧血患者，可迅速糾正貧血癥狀，短期內升高Hb，但如果不予病因治療，輸血的療效是短暫的。此外，若患者多次輸血，體內可能產生抗體，從而縮短Hb的維持時間，且輸血后出現的免疫抑制反應可促進腫瘤生長[9]。

隨著近些年中醫藥在腫瘤治療中的廣泛應用，其在改善患者臨床癥狀、減輕放化療毒副作用等方面發揮了積極作用。CRA屬中醫“虛勞”“血虛”“血枯”等范疇，多采用補益類中藥治療，黨參是臨床常用的補益類中藥，也是藥食兩用的保健食材，具有養血生津、健脾益肺的功效。我們從中國知網中國學術期刊網絡出版總庫以黨參為主題詞共檢索到2007—2019年發表的中文期刊4204篇[10]。以黨參為主藥的益中生血膠囊[11]、健脾益腎顆粒[12]、復方阿膠漿[13]、健脾生血顆粒[14]、圣愈湯[15]等中成藥及中藥古方治療CRA的研究屢見報道。

現代藥理學研究發現，黨參含有多糖、黨參昔、甾醇類、三萜類、生物堿、內酯類、香豆素類等多種成分，具有提高免疫力、抗炎、抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、保護神經、增強造血功能、調節胃腸道功能等多種藥理活性，而黨參多糖是其主要有效成分[16-17]。張曉君等[18]報道，黨參多糖能促進溶血性貧血模型小鼠外周血Hb，增加脾臟結節個數，對脾臟代償造血功能有促進作用。本研究結果表明，黨參多糖各劑量組較模型組均可增加外周血RBC、Hb和HCT水平，說明黨參多糖對CTX所致貧血具有顯著的療效。

EPO是由腎皮質腎小管周圍間質細胞分泌的一種激素樣物質，作用于骨髓紅系造血祖細胞并促進其增殖分化。部分CRA發生原因為EPO含量相對不足[19-20]。multi-CSF是造血干細胞增殖分化的正性調節因子，通過與靶細胞表面的受體結合傳遞生長、分化信號，調控造血干細胞增殖及向各系血細胞分化、成熟，是造血功能調節的重要因子。本研究結果顯示，黨參多糖低、中、高劑量組較模型組外周血EPO均顯著升高，表明黨參多糖能促進造血因子分泌，從而提高造血功能。

CD71是早期紅系祖細胞向晚期幼稚紅細胞過渡的一個特異性抗原標志物，CD71和Ter119常被用以標記紅系細胞在體內的動態成熟過程[21]。本研究結果表明，黨參多糖各劑量組外周血CD71+及Ter119+水平較模型組顯著升高，表明外周血幼稚紅細胞逐步向成熟紅細胞轉化。

綜上，黨參多糖能有效改善CTX致小鼠貧血。